“葛根定眩膠囊”對(duì)頸性眩暈?zāi)Ｐ痛笫箢i椎X線征象、部分體液因子的影響研究

豐廣魁 馬先軍 陳隱漪 杜 青 石薷月 孟 梓

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)連云港附屬醫(yī)院腦病科，江蘇連云港222004； 2.連云港中醫(yī)藥高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校，江蘇連云港222007）

頸性眩暈（cervical vertigo，CV）是一種由各種頸源性因素引起的，以眩暈等交感神經(jīng)癥狀為主的癥候群，常見(jiàn)頭暈?zāi)垦＃D(zhuǎn)頭加重，甚者惡心嘔吐、步履不穩(wěn)、頸項(xiàng)僵痛，或伴麻木、耳鳴等癥狀，常有低頭、伏案等頸椎勞損的誘因。近年來(lái)我們采用院內(nèi)制劑葛根定眩膠囊治療頸性眩暈在臨床上取得了較好的療效，為了探討其作用機(jī)制進(jìn)行了本實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD雄性大鼠，體重（200±20）g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（京）2013-0003，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2 藥品與試劑 葛根定眩膠囊由南京中醫(yī)藥大學(xué)連云港附屬醫(yī)院制劑室提供，蘇藥制字Z04001243。藥物制備：葛根、桂枝、生白芍、炙甘草、僵蠶、羌活、川芎、鉤藤、生姜、大棗按10∶4∶4∶2∶3.3∶3.3∶2∶5∶5∶5比例配備；取葛根一半、川芎，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻；另取剩余葛根、桂枝、生白芍、炙甘草、僵蠶、羌活、鉤藤、生姜、大棗加水煎煮3次，濾過(guò)，合并濾液濃縮，加乙醇使含醇量至60%，靜置，取上清液回收乙醇，減壓濃縮至適量，與上述細(xì)粉拌勻干燥粉碎，裝膠囊即得。鹽酸氟桂利嗪膠囊（西比靈），由西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：5mg/粒。注射用青霉素鈉，華北制藥股份有限公司生產(chǎn)。水合氯醛（分析純）上海國(guó)藥集團(tuán)生產(chǎn)。大鼠（Rat）內(nèi)皮素（ET）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)試劑盒，由上海撫生生物有限公司提供；大鼠（Rat）降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）ELISA檢測(cè)試劑盒，由上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司提供。

1.3 主要儀器 Labsystems Finnpipette 100μL單道移液器，銀河生物有限公司；Thermo 50μL 8道移液器，杭州雷琪實(shí)驗(yàn)器材有限公司；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋，國(guó)華電器有限公司；華東電子DG5033A酶標(biāo)儀，南京華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司。2cm×80cm的木桿、鼠板等，自制。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組與造模 大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、西比靈組（簡(jiǎn)稱西藥組）、葛根定眩膠囊組（簡(jiǎn)稱中藥組），每組10只。除空白組外其余各組均造模，造模方法在頸椎失穩(wěn)法基礎(chǔ)上予以改良[1]，即剪斷頸后部肌肉，切除C5～6棘突及韌帶，包括棘上韌帶和棘間韌帶，用剪刀破壞C5～6關(guān)節(jié)囊，致大鼠頸椎上下椎體明顯失穩(wěn)，然后逐層縫合。術(shù)后連續(xù)注射青霉素（4萬(wàn)單位/只）3d。術(shù)后1周，待傷口愈合，上下左右轉(zhuǎn)動(dòng)大鼠頭部一次后，迅速放于平衡木桿上，觀察大鼠行為步態(tài)，以大鼠不能在木桿上站立或移動(dòng)，或出現(xiàn)搖晃、停滯、調(diào)轉(zhuǎn)方向移動(dòng)認(rèn)定為造模成功。

2.2 給藥 確定造模成功后次日開(kāi)始對(duì)大鼠進(jìn)行灌胃給藥，每日上午8∶00—12∶00給藥1次，藥液量按體重比1mL/100g計(jì)?？瞻捉M和模型組灌胃等量雙蒸水；葛根定眩膠嚢成人劑量是每次1.8mg（4粒），3次/d，大鼠給藥劑量折算為486mg/kg；西比靈成人每次5mg，1次/d，大鼠給藥劑量折算為0.45mg/kg。

2.3 指標(biāo)檢測(cè)

2.3.1 平衡木試驗(yàn)[2]各組于造模后和治療4周、8周后進(jìn)行評(píng)價(jià)。選用2cm×80cm的平衡木桿懸空放置，先將大鼠的頭部上下左右旋轉(zhuǎn)，再迅速將其放置于木桿上，觀察其通過(guò)木桿時(shí)的情況。平衡木試驗(yàn)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（自擬）：大鼠不能在木桿上移動(dòng)，或搖晃、停滯、調(diào)轉(zhuǎn)方向，僅稍有移動(dòng)而不能通過(guò)木桿計(jì)0分；大鼠在木桿上搖晃、停滯、調(diào)轉(zhuǎn)方向，有明顯移動(dòng)，甚至能通過(guò)木桿，計(jì)1.5分；大鼠較流暢行走，通過(guò)木桿，計(jì)3分。

2.3.2 X線評(píng)分 治療8周后進(jìn)行評(píng)價(jià)。各組大鼠注射1%戊巴比妥鈉（40mg/kg）后攝頸椎側(cè)位X線片，使用宋沛松評(píng)分法進(jìn)行評(píng)分[1]。頸椎生理彎曲狀況：存在，計(jì)0分；輕度僵硬，計(jì)1分；喪失，計(jì)2分；完全喪失并反屈，計(jì)3分。椎間隙狹窄情況：無(wú)，計(jì)0分；輕度，計(jì)1分；中度，計(jì)2分；重度，計(jì)3分。椎體前后緣有無(wú)骨贅增生：無(wú)，計(jì)0分；輕度，計(jì)1分；中度，計(jì)2分；重度，計(jì)3分。鉤椎關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)突關(guān)節(jié)有無(wú)增生硬化：無(wú)，計(jì)0分；關(guān)節(jié)模糊不清，計(jì)1分；關(guān)節(jié)輕度增生硬化，計(jì)2分；關(guān)節(jié)明顯增生硬化，計(jì)3分。

2.3.3 ET-1、CGRP測(cè)定 各組大鼠于給藥4周及8周后，眼眶取血于抗凝離心管中，將血液充分混勻，-80℃冷藏保存。采用ELISA法測(cè)定ET-1，雙抗體夾心法測(cè)定CGRP，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、處理和分析，計(jì)量數(shù)據(jù)用（±s）表示，釆用t檢驗(yàn)，假設(shè)檢驗(yàn)統(tǒng)一使用雙側(cè)檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組大鼠干預(yù)前后平衡木得分比較 見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠干預(yù)前后平衡木得分比較（±s） 分

表1 各組大鼠干預(yù)前后平衡木得分比較（±s） 分

注： 與空白組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與西藥組比較，##P＜0.01。

組別 動(dòng)物數(shù)（只）劑量（mg/kg） 造模后 干預(yù)4周后 干預(yù)8周后空白組 10 3.00±0.00 3.00±0.00 3.00±0.00模型組 10 0.30±0.60▲▲ 0.30±0.60▲▲ 0.15±0.45▲▲西藥組 10 0.45 0.15±0.45▲▲ 0.9±0.77▲▲ 1.35±0.81▲▲**中藥組 10 486 0.15±0.45▲▲ 1.65±0.81▲▲* 2.4±0.73▲**##

3.2 各組大鼠干預(yù)后頸椎X線評(píng)分比較 見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠干預(yù)后頸椎側(cè)位片X線評(píng)分比較（±s） 分

表2 各組大鼠干預(yù)后頸椎側(cè)位片X線評(píng)分比較（±s） 分

注： 與空白組比較，▲▲P＜0.01；與模型組比較，**P＜0.01；與西藥組比較，##P＜0.01。

組別 動(dòng)物數(shù)（只） 劑量（mg/kg） X線評(píng)分空白組 10 0.00±0.00模型組 10 7.40±0.97▲▲西藥組 10 0.45 4.50±1.27▲▲**中藥組 10 486 2.50±1.18▲▲**##

3.3 各組大鼠干預(yù)各時(shí)期血漿ET-1、CGRP含量及其比值比較 見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠干預(yù)各時(shí)期血漿ET-1、CGRP含量及其比值比較

4 討論

頸性眩暈與頸椎生理曲度變直、反弓、不穩(wěn)、負(fù)荷有關(guān)[3-4]，這些原因?qū)е骂i部交感神經(jīng)興奮進(jìn)而引發(fā)椎-基底動(dòng)脈痙攣誘發(fā)眩暈。大鼠的頸椎失穩(wěn)法模型符合頸性眩暈的發(fā)病機(jī)制，而且操作相對(duì)簡(jiǎn)單，成功率高[5]，是頸性眩暈的理想動(dòng)物模型。宋沛松等[1]建立的造模方法其操作風(fēng)險(xiǎn)與創(chuàng)傷均較大，為此我們做了改良，即破壞C5～6頸椎，本次造模大鼠無(wú)死亡發(fā)生，造模后平衡木試驗(yàn)與空白組有顯著差異，表明造模成功。平衡木試驗(yàn)?zāi)軌蝌?yàn)證大鼠的平衡能力及大鼠的“眩暈”狀態(tài)，操作簡(jiǎn)單易行，但尚無(wú)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，我們自行擬定了3個(gè)等次作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。鹽酸氟桂利嗪（西比靈）是臨床常用治療眩暈的藥物，能夠防止血管痙攣且對(duì)椎基底動(dòng)脈的作用效果最強(qiáng)[6]，因此選擇其作為對(duì)照藥。

頸性眩暈屬于中醫(yī)“眩暈”“項(xiàng)痹”范疇，多因勞倦傷（頸項(xiàng)）筋，失卻氣之溫煦，內(nèi)外寒濕凝滯筋脈，絡(luò)脈痹阻、氣血難榮清竅而致，故寒濕凝澀、筋脈不舒、氣血運(yùn)行不暢是本病的病機(jī)關(guān)鍵，當(dāng)治以解肌舒筋、通利太陽(yáng)經(jīng)脈。葛根定眩膠囊為我院2004年獲批的院內(nèi)制劑，由桂枝加葛根湯加羌活、川芎、僵蠶、鉤藤組成。本方重在解肌舒筋通絡(luò)，通利太陽(yáng)經(jīng)樞。葛根定眩取桂枝加葛根湯解肌通經(jīng)、舒筋和營(yíng)，加羌活辛溫通絡(luò)散寒祛濕，川芎通絡(luò)活血，僵蠶祛風(fēng)活絡(luò)，鉤藤息風(fēng)通絡(luò)。

本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)8周給藥，中藥組與西藥組大鼠平衡木試驗(yàn)得分皆顯著高于模型組，且中藥組明顯優(yōu)于西藥組。給藥8周后，頸椎X線評(píng)分中藥組明顯低于模型組和西藥組。有研究表明，桂皮醛可改善肌肉的攣急和攣縮[7]；芍藥苷、甘草酸具有較好的緩解肌肉痙攣及鎮(zhèn)痛作用[8]；僵蠶中所含草酸銨具有明顯的抗驚厥作用，對(duì)強(qiáng)直、痙攣的肌肉有松弛作用[9]。由此推測(cè)，葛根定眩膠囊對(duì)大鼠行為學(xué)及頸椎不穩(wěn)起到的干預(yù)及治療作用可能與其不僅作用于血管，還能松弛頸部肌肉痙攣，進(jìn)而改善頸椎交感神經(jīng)興奮有關(guān)。

除了解剖和交感神經(jīng)因素外，體液因素可能是頸性眩暈的重要物質(zhì)基礎(chǔ)之一[10-11]，其中包括ET-1、CGRP兩種因子。血漿中ET和CGRP是已知的最強(qiáng)的內(nèi)源性縮血管因子和舒血管因子[12]，對(duì)血管的作用力強(qiáng)且持久，共同調(diào)節(jié)血流變化與維持血管的舒縮功能。有研究表明，血漿ET-1、CGRP可能是誘發(fā)頸性眩暈的關(guān)鍵物質(zhì)，兩者的失衡與頸性眩暈的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[13]，兩者的比值更有意義[11]。本研究結(jié)果顯示，給藥4周、8周后，中藥組ET-1水平明顯低于模型組，作用近似于西藥組（P＞0.05）；中藥組CGPR水平顯著高于模型組，但改善效果不及西藥組；中藥組ET-1/CGRP比值顯著低于模型組，近似西藥組（P＞0.05）。但是體液因子的異常是因還是果還不完全明晰，而體液因子的異常無(wú)法解釋頸性眩暈的發(fā)作性，我們推測(cè)是果不是因。有文獻(xiàn)報(bào)道，葛根的主要成分葛根總黃酮有擴(kuò)張腦及內(nèi)耳血管、調(diào)節(jié)循環(huán)等作用，調(diào)整血漿ET-1與CGPR的相對(duì)水平[14]。川芎有效成分阿魏酸鈉可以通過(guò)拮抗ET受體和ET效應(yīng)，抑制血管內(nèi)皮素的產(chǎn)生[15]。葛根定眩膠囊也有調(diào)節(jié)體液因子的作用，但升高CGPR作用顯著弱于西藥組，降低ET-1及調(diào)節(jié)ET-1/CGRP比值也不及西藥組，這與其改善大鼠行為學(xué)及頸椎X線評(píng)分不相一致，說(shuō)明對(duì)體液因子的影響不是葛根定眩膠囊的優(yōu)勢(shì)所在。由此推測(cè)，葛根定眩膠囊的作用機(jī)制不完全在影響體液因子方面，可能與其具有解肌疏筋活絡(luò)作用，能夠改善頸椎小關(guān)節(jié)紊亂、解除頸肌痙攣進(jìn)而抑制頸椎交感神經(jīng)興奮有關(guān)，確切機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。