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    血清p—ANCA與sRAGE在潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá)及聯(lián)合檢測的診斷意義

    2018-10-31 09:52劉增福李慶芝葛紅梅付景吳衛(wèi)東
    中外醫(yī)療 2018年17期
    關(guān)鍵詞:潰瘍性結(jié)腸炎

    劉增福 李慶芝 葛紅梅 付景 吳衛(wèi)東

    [摘要] 目的 檢測潰瘍性結(jié)腸炎患者血清核周型抗中性粒細(xì)胞抗體(p-ANCA)、可溶性晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(sRAGE)的表達(dá)情況,探討p-ANCA和sRAGE作為潰湯性結(jié)腸炎患者輔助診斷指標(biāo)的價(jià)值。 方法 方便收集該院2014年5月—2015年5月間就診的68例潰瘍性結(jié)腸炎患者(潰瘍性結(jié)腸炎組)、42例非潰瘍性結(jié)腸炎引起腹瀉的患者(疾病對照組)、30名健康體檢人群(對照組);用間接免疫熒光法(IIF)檢測各組患者血清p-ANCA的表達(dá),采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測各組患者血清中sRAGE表達(dá)。 結(jié)果 潰瘍性結(jié)腸炎組、疾病對照組和對照組的p-ANCA的陽性率分別為64.7%(44/68),7.1%(3/42)和0.0%(0/30),各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=17.52、21.71,P<0.01);潰瘍性結(jié)腸炎組患者的sRAGE陽性率為51.5%(35/68)高于腸道疾病對照組16.7%(7/42)和對照組13.3%(4/30) (χ2=4.71、4.03,P<0.05);且p-ANCA與sRAGE表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.784,P<0.01;r=0.822,P<0.01);兩者聯(lián)合檢測,潰瘍性結(jié)腸炎組的陽性率為64.8%。結(jié)論 p-ANCA和sRAGE可作為潰瘍性結(jié)腸炎診斷時(shí)的輔助指標(biāo),具有一定的診斷意義,聯(lián)合檢測p-ANCA和sRAGE可以提高診斷的陽性率。

    [關(guān)鍵詞] 潰瘍性結(jié)腸炎;p-ANCA;sRAGE;IIF;ELISA

    [中圖分類號] R574 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742(2018)06(b)-0011-04

    Expression of Serum p-ANCA and sRAGE in Ulcerative Colitis and Diagnostic Significance of Combined Test

    LIU Zeng-fu1, LI Qing-zhi1, GE Hong-mei2, FU Jing1, WU Wei-dong1

    1.Digestive System Department, Heze Municipal Hospital, Heze, Shandong Province, 274031 China;2.Department of Neurosurgery, Heze Municipal Hospital, Heze, Shandong Province, 274031 China

    [Abstract] Objective To test the expressions of p-ANCA and sRAGE of patients with ulcerative colitis and study the value of p-ANCA and sRAGE as the adjunctive diagnostic indexes. Methods 68 cases of patients with ulcerative colitis diagnosed in our hospital from Mary 2014 to Mary 2015 (ulcerative colitis group), 42 cases of patients with diarrhea due to non- ulcerative colitis (disease control group) and 30 cases of healthy physical examination group (control group) were convenient collected, and the expressions of serum p-ANCA in each group was tested by IIF, and the serum sRAGE expression in each group was tested by the ELISA. Results The p-ANCA positive rates in the ulcerative colitis group, disease control group and control group were respectively 64.7%(44/68), 7.1%(3/42), 0.0%(0/30), and the difference was statistically significant (χ2=17.52,21.71,P<0.01), and the sRAGE positive rate of patients in the ulcerative colitis group was higher than that in the disease control group and in the control group[51.5%(35/68) vs 16.7%(7/42), 13.3%(4/30)](χ2=4.71, 4.03,P<0.05), and the p-ANCA and sRAGE expression had a positive correlation (r=0.784, P<0.01; r=0.822, P<0.01), and the positive rate of ulcerative colitis group was 64.8%. Conclusion The p-ANCA and sRAGE can be used as the adjunctive indexes in diagnosis of ulcerative colitis, with a certain diagnostic significance, and the combined test of p-ANCA and sRAGE can improve the diagnosis positive rate.

    [Key words] Ulcerative colitis; p-ANCA; sRAGE; IIF; ELISA

    潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)是一種病因尚不清楚的以腹瀉、腹痛、黏液膿血便為臨床表現(xiàn)的大腸慢性非特異性炎癥性疾病;病變主要在大腸黏膜和黏膜下層,一般不超過粘膜下層。因其癥狀缺乏特異性,確診 UC 通??績?nèi)鏡檢查及病理活檢[1-3]。但相當(dāng)部分的 UC 疑似病例仍然不能通過內(nèi)鏡檢查確診[4]。缺乏有效的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)是目前臨床上診斷UC的短板,所以尋找特異性高、診斷準(zhǔn)確度好的血清標(biāo)記物鑒別潰瘍性結(jié)腸炎成為人們研究的焦點(diǎn)。該研究方便選擇2014年5月—2015年5月收治的68例潰瘍性結(jié)腸炎患者,探討p-ANCA和sRAGE作為潰湯性結(jié)腸炎患者輔助診斷指標(biāo)的價(jià)值,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    依據(jù)2007年 5月第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議推薦的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5],方便收集在該科就診的68例潰瘍性結(jié)腸炎患者(潰瘍性結(jié)腸炎組),男39例,女29例;年齡18~72歲,平均年齡(43.7± 15.4)歲。所有入選病例均接受全結(jié)腸鏡和病理組織學(xué)檢查。相同時(shí)期42例非潰瘍性結(jié)腸炎的急性自限性腸炎引起腹瀉的患者(疾病對照組),男25例,女17例,年齡24~60 歲,平均(35.8±12.6)歲。并選擇同期30名健康體檢者為對照組;男17名,女13名,年齡20~65歲平均年齡(34.1±9.4)歲。所有患者及其家屬均知曉并同意該次研究,該研究經(jīng)該院倫理委員會批準(zhǔn)。

    1.2 方法

    ①清晨空腹采集3 mL肘靜脈血,離心后保存待檢。②采用間接免疫熒光薄片法測定p-ANCA。將血清點(diǎn)陣于反應(yīng)平板,于20~25°條件下孵育30 min。然后使用磷酸鹽-吐溫緩沖液進(jìn)行清洗及浸泡。將熒光標(biāo)記抗體點(diǎn)陣于第二個(gè)反應(yīng)平板,于20~25°條件下孵育30 min。然后使用磷酸鹽-吐溫緩沖液進(jìn)行清洗及浸泡,最后封片并于顯微鏡進(jìn)行仔細(xì)觀察。陽性:核周型(pANCA):為圍繞中性粒細(xì)胞核的帶狀、平滑熒光。陰性:中性粒細(xì)胞較暗,基本無熒光。采用德國歐蒙公司sRAGE-IgA、sRAGE-IgG酶聯(lián)免疫吸附法檢測試劑盒檢測sRAGE表達(dá),sRAGE-IgA和(或)sRAGE-IgG陽性為sRAGE陽性。

    1.3 統(tǒng)計(jì)方法

    采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。各組間抗體陽性率比較采用χ2檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用Pearson檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 3組p-ANCA 陽性表達(dá)率分析研究

    潰瘍性結(jié)腸炎組p-ANCA 陽性率為64.7%(44/68),明顯高于疾病對照組的 7.1%(3/42)和對照組0.0%(0/30),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=17.52、21.71,P<0.01),見表1。

    2.2 sRAGE 的陽性表達(dá)率

    潰瘍性結(jié)腸炎組患者的 sRAGE 陽性率為51.5%(35/68)高于疾病對照組16.7%(7/42)和對照組 13.3%(4/30) ,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.71、4.03,P<0.05),見表1。

    2.3 聯(lián)合檢測

    p-ANCA 和 sRAGE p-ANCA 和 sRAGE 同時(shí)陽性的有 17例,以任一指標(biāo)陽性作為觀察指標(biāo),潰瘍性結(jié)腸炎組的陽性率為64.8%。

    潰瘍性結(jié)腸炎組sRAGE表達(dá)水平與CRP、TNF-0表達(dá)具有正相關(guān)性(r=0.784,P<0.01;r=0.822,P<0.01)。

    3 討論

    UC是消化內(nèi)科常見疾病之一,是炎癥性腸病中最常見類型,但直到目前其病因尚不十分清楚,病變在大腸,為腸道粘膜及粘膜下層慢性且反復(fù)發(fā)作的非特異性炎癥。由于該疾病早期臨床癥狀不具有典型性,且尚無較為成熟完善的檢測手段,所以大多數(shù)患者在就診時(shí)往往已經(jīng)發(fā)展至中晚期,從而使患者錯過了最佳的治療時(shí)機(jī)。該類疾病具有病程長,病情遷延難愈以及復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn),臨床主要表現(xiàn)為腹瀉、腹痛等,嚴(yán)重威脅了患者的身體健康,積極尋找安全有效的診斷、治療措施具有重要的作用。如今其診斷尚缺乏特異性,主要通過臨床表現(xiàn)、病理學(xué)等方式進(jìn)行診斷,且往往在排除急性自限性結(jié)腸炎、阿米巴痢疾、慢性血吸蟲病、腸結(jié)核、缺血性腸炎、放射性腸炎、克隆恩病、大腸癌等各種其他原因引起的腸道病變作出的。當(dāng)結(jié)腸鏡檢查無法確診或患者存在結(jié)腸鏡檢查禁忌證時(shí),特異的血清學(xué)抗體標(biāo)志物檢測有助于它們的鑒別。所以若可早期及時(shí)診斷該疾病,則會有效降低患者死亡率,延長其生存時(shí)間。UC的發(fā)病機(jī)制錯綜復(fù)雜,是多種因素綜合所致的結(jié)果,如何從研究血清因子的發(fā)展去診斷、治療疾病,是目前我們需要深入探索的。目前,越來越多的研究證明p-ANCA和sRAGE在UC中的表達(dá)水平與預(yù)后質(zhì)量、病情程度呈相關(guān)性。如今,雖然聯(lián)合檢測兩種指標(biāo)為臨床診斷工作提供了極大的便利,保障了患者的生命健康,其科學(xué)性、合理性也受到眾人的關(guān)注。該研究收集了UC患者的臨床資料,旨在觀察上述指標(biāo)在UC中的臨床價(jià)值,以期患者的身體健康。

    近幾年,血清標(biāo)志物逐漸應(yīng)用于臨床中,它們在一種或多種疾病中呈陽性表達(dá),已經(jīng)成為篩查疾病必不可少的檢測項(xiàng)目。p-ANCA是UC特異性血清抗體之一,可用于鑒別UC與CD。文獻(xiàn)報(bào)道在 UC患者血清中p-ANCA陽性率為43.4%~70.0%,在鑒別CD與UC時(shí),p-ANCA診斷UC的敏感性稍低(50%~67%),特異性較高(75%~94%)[5]。該研究顯示潰瘍性結(jié)腸炎組患者的 p-ANCA 的陽性率為64.7%(44/68),較對照組的0.0%(0/30)明顯升高(P<0.01),結(jié)果與國內(nèi)外報(bào)道基本一致。ANCA主要經(jīng)嗜天青顆粒、溶菌酶而發(fā)揮作用。國外研究報(bào)道UC 患者ANCA陽性率大約為70%,這與國內(nèi)相關(guān)研究報(bào)道基本一致[6-7],該研究潰瘍性結(jié)腸炎 組p-ANCA陽性率為64.7%,這可能是由于熒光檢測模型影響所致。有文獻(xiàn)報(bào)道,血清 p-ANCA 水平與潰瘍性結(jié)腸炎病情程度呈現(xiàn)相關(guān)性,若為p-ANCA 陽性者,則其出現(xiàn)腸黏膜血管炎的幾率高于陰性患者,另外存在血管炎的 UC 患者,其病灶處炎癥情況明顯較重,表明UC 相關(guān)P-ANCA對血管炎的發(fā)生、發(fā)展起到了一定的促進(jìn)作用。人可溶性晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(sRAGE)屬于RAGE內(nèi)源分泌型[8],其屬于多配體受體,主要是由RAGE mRNA剪接形成的異形體,由于其未包括跨膜段,因此在循環(huán)系統(tǒng)中水平較高,另外它在上皮及神經(jīng)等組織中也有表達(dá)。如今, sRAGE已經(jīng)成為診斷免疫失調(diào)相關(guān)疾病的重要炎癥因子之一[9]。目前越來越多地研究發(fā)現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎是免疫失調(diào)所致的炎癥病變[10],全世界對于sRAGE在UC中的表達(dá)情況報(bào)道不多。近年來,有研究發(fā)現(xiàn)sRAGE與細(xì)胞增殖及炎癥反應(yīng)等方面具有重要的關(guān)系,另外它還可有效評估腸道受損程度[11-12]。國外Yilmaz等[4]研究發(fā)現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎組血清中sRAGE含量明顯高于疾病對照組及對照組。國內(nèi)李為慧等研究發(fā)現(xiàn)UC患者sRAGE含量明顯升高,陽性率55.6%;且活動期sRAGE含量要高于緩解期,并與CRP存在正相關(guān)性。該研究發(fā)現(xiàn),潰瘍性結(jié)腸炎組血清中sRAGE含量亦明顯高于疾病對照組及對照組,這與國外研究相似。如今,其已成為診斷炎癥病變的特異性指標(biāo)之一,上述數(shù)據(jù)提示,sRAGE因潰瘍性結(jié)腸炎的出現(xiàn)而呈陽性表達(dá)。

    除了采用陽性率進(jìn)行評價(jià)外,該研究認(rèn)為評價(jià)上述兩種血清因子的標(biāo)準(zhǔn)還可包括以下幾點(diǎn):①敏感性:早期診斷疾病的作用;②特異度:排除誤診的效果;③診斷準(zhǔn)確性:判斷疾病的能力;④病程相關(guān)性:與疾病分期、進(jìn)展等方面的關(guān)系;⑤預(yù)后相關(guān)性:術(shù)后通過其水平觀察預(yù)后質(zhì)量。隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的逐漸發(fā)展,部分研究發(fā)現(xiàn)它們在患者體內(nèi)的變化情況與病情發(fā)展、預(yù)后質(zhì)量都具有較高的相關(guān)性,具有極為重要的臨床指導(dǎo)意義。p-ANCA和sRAGE對于評估患者病情程度意義重大,然而在臨床中其往往易發(fā)生假陽性情況,所以該研究認(rèn)為應(yīng)注意以下幾點(diǎn):①檢驗(yàn)科應(yīng)積極主動與醫(yī)護(hù)人員溝通,共同建立、規(guī)范標(biāo)本采集過程以及手冊;②檢驗(yàn)人員保持高度的責(zé)任感,仔細(xì)做好標(biāo)本、儀器保養(yǎng)等工作,一旦出現(xiàn)異常,則應(yīng)迅速與醫(yī)師交流,以免錯過最佳的治療時(shí)間。目前,病理檢查是診斷疾病的“金標(biāo)準(zhǔn)”,但其存在有創(chuàng)性,因此患者依從性較差,因此如血清學(xué)檢查等無創(chuàng)性方法已經(jīng)成為新型的診斷趨勢,所以血清因子檢測逐漸走進(jìn)人們的視野。值得注意的是,p-ANCA和sRAGE也可能存在于其它疾病中,所以該研究認(rèn)為:在聯(lián)合多種血清學(xué)指標(biāo)進(jìn)行診斷的同時(shí),還應(yīng)與影像學(xué)檢查等多個(gè)指標(biāo)實(shí)施綜合討論,從而改善診斷準(zhǔn)確率。近年來,血清學(xué)指標(biāo)的發(fā)現(xiàn)也為治療敞開了另外一扇大門,雖然目前導(dǎo)致UC的機(jī)制尚未清晰,但血清因子在疾病進(jìn)展過程中扮演的角色為治療UC提供了可能。扎實(shí)的理論基礎(chǔ),正確的操作方法以及合理的檢測指標(biāo),那么血清因子檢測必將被所有人所認(rèn)可??傊?,在UC中p-ANCA、sRAGE檢測陽性率顯著上升,它們可作為潰瘍性結(jié)腸炎診斷時(shí)的輔助指標(biāo),具有一定的診斷意義,聯(lián)合檢測p-ANCA和sRAGE可以提高診斷的陽性率。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1] Armando Rojas,Ileana González,Erik Morales,et al. Diabet es and cancer:Looking at the multiligand/RAGE axis[J].World J Diabetes,2011,2(7):108-113.

    [2] Varun Parkash Singh,Anjana Bali,Nirmal Singh,et al. Advanced glycation end products and diabetic complicat ions[J].Korean J Physiol Pharmacol,2014,18:1-14.

    [3] Vernier G,Sendid B,Poulain D,et a1.Relevance of serologic studies in inflammatory bowel disease[J].Curr Gastroenterol Rep,2004,6:482-487.

    [4] Yilmaz Y,Yonal 0,Eren F,et a1.Serum levels of soluble receptor for advanced glycation endproducts(sRAGE)are higher in ulcerative colitis and correlate with disease activity[J].J Crohns Colitis,2011,5(5):402-406.

    [5] 歐陽欽,胡品津,錢家鳴,等.2007年我國炎癥性腸病診斷

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