仔豬大腸桿菌病原分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

李靖

摘要：本文將陜西某豬場(chǎng)發(fā)生嚴(yán)重腹瀉的仔豬作為研究對(duì)象，采集了仔豬黃、白痢糞便樣品共計(jì)20份，并從中分離出了6株大腸桿菌。經(jīng)過(guò)藥敏試驗(yàn)后得出分離得到的這6株大腸桿菌對(duì)頭孢噻肟，頭孢拉啶、諾氟沙星等藥物最為敏感。可以將分離得到的菌群混合制成疫苗為產(chǎn)前的母豬接種，從而使其后代黃痢、白痢發(fā)病率降低。

關(guān)鍵詞：仔豬；大腸桿菌；藥敏試驗(yàn)

前言

黃白痢和水腫病都屬于仔豬大腸桿菌病。該疾病是因致病性的大腸桿菌所引發(fā)的腸道傳染性疾病。黃痢在1周齡的幼豬身上較為高發(fā)，主要的癥狀是排便呈現(xiàn)黃色糊狀。而白痢則在10至30天齡的幼豬身上較為高發(fā)，其糞便形態(tài)也多為糊狀，顏色呈現(xiàn)出灰白或乳白，伴有惡臭。近些年，仔豬大腸桿菌疾病在各大豬場(chǎng)的發(fā)病率皆有所上升，嚴(yán)重影響了仔豬的成活率，限制了養(yǎng)豬行業(yè)的發(fā)展。且致病性的大腸桿菌亦呈現(xiàn)出一定的耐藥性，這與此前濫用抗生素的做法有密切關(guān)聯(lián)，且針對(duì)該疾病的血清種類較多，為抗原康復(fù)帶來(lái)不小的困難[1]。本文將陜西某豬場(chǎng)發(fā)生嚴(yán)重腹瀉的仔豬作為研究對(duì)象，將患有黃白痢疾病的仔豬糞便進(jìn)行收集和細(xì)菌分離鑒定，并通過(guò)藥敏試驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步的分析。以下是具體的研究報(bào)告：

1材料和方法

1.1一般資料

將陜西某豬場(chǎng)發(fā)生嚴(yán)重腹瀉的仔豬作為研究對(duì)象，采集了仔豬黃、白痢糞便樣品共計(jì)12份，并從中分離出了6株大腸桿菌。

1.2研究材料

研究中所用到的輔助材料包括培養(yǎng)基、藥敏紙片、鋁膠以及清潔級(jí)的實(shí)驗(yàn)小白鼠若干。

1.3方法

1.3.1 病原菌的分離鑒定

采用無(wú)菌采集法分別對(duì)豬場(chǎng)內(nèi)患有黃痢或白痢的仔豬糞便進(jìn)行采樣，樣品數(shù)量共計(jì)20份，分別接種于麥糠培養(yǎng)基和伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上。放入溫箱24小時(shí)后，溫度控制在37攝氏度，隨后把挑選出來(lái)的菌落接種到普通的肉湯里面去增菌。具體的做法同樣是，在37攝氏度的溫控條件下，放入溫箱18小時(shí)。完成以上操作后把培養(yǎng)物在麥糠凱瓊脂平板與伊紅美藍(lán)瓊脂平板上分別進(jìn)行劃線接種培養(yǎng)操作1天后再挑選其中的可疑菌落進(jìn)行抹片和染色鏡檢。

1.3.2藥敏實(shí)驗(yàn)

通過(guò)常規(guī)的紙片法對(duì)復(fù)方新諾明、卡那霉素、鏈霉素等13種藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

1.3.3 致病測(cè)試

選取6只實(shí)驗(yàn)小白鼠，作為研究對(duì)象。另選取2只小白鼠作為參照。將菌落純培養(yǎng)物對(duì)實(shí)驗(yàn)小白鼠進(jìn)行空腹注射。如出現(xiàn)發(fā)病小白鼠或死亡小白鼠，抽取其心血并進(jìn)行抹片和染色鏡檢。

1.3.4仔豬黃、白痢菌苗制備

用無(wú)菌生理鹽水制備成菌懸液，活菌的計(jì)數(shù)濃度是每毫升30億，加入甲醛。然后進(jìn)行滅活48小時(shí)，在此期間將溫度始終控制在37攝氏度。完成以上操作以后再加入無(wú)菌生理鹽水和鋁酸佐劑，直至菌液濃度降低到每毫升10億。

2結(jié)果

2.1病原菌的形態(tài)觀察

所有培養(yǎng)出來(lái)的可疑菌株在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)16小時(shí)之后全部都都呈現(xiàn)出紅色的菌落狀態(tài)，而全部可疑菌株在伊紅美藍(lán)瓊脂上培養(yǎng)基上的培養(yǎng)結(jié)果則全部為大小適中的紫黑色的或者是具有金屬光澤的圓形菌群。

2.2 藥敏試驗(yàn)

由表1我們可以得知，全部分離菌都對(duì)頭孢拉啶、頭孢噻肟、諾氟沙星這幾個(gè)藥物較為敏感，而其他的藥物產(chǎn)生了程度不一的耐藥性。

2.4致病性試驗(yàn)

在本場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象的6只小白鼠里面，總計(jì)有4只在接受注射后的24小時(shí)里死亡，有1只在接受注射后的30小時(shí)內(nèi)死亡，剩余一只雖為死亡但出現(xiàn)發(fā)病癥狀。對(duì)照組中的兩只實(shí)驗(yàn)小白鼠安然無(wú)恙，沒(méi)有發(fā)病[2]。給實(shí)驗(yàn)中發(fā)病及死亡的小白鼠做了心血抹片和染色鏡檢，全部檢查結(jié)果都顯示為中等小桿菌。

2.4 仔豬黃、白痢疾菌苗免疫效果

將6珠菌群混合，并制備成鋁膠滅活菌苗，然后按照每只5毫升的劑量為產(chǎn)前半個(gè)月的母豬接種。從實(shí)驗(yàn)的結(jié)果來(lái)看，該豬場(chǎng)中懷孕的母豬，在臨產(chǎn)前的半個(gè)月接受菌苗注射的，所生產(chǎn)的幼仔豬的黃、白痢疾病發(fā)病概率都明顯得到下降。

結(jié)語(yǔ)：

從菌群的培養(yǎng)結(jié)果來(lái)看，全部的6株分離細(xì)菌都是致病型的大腸桿菌。會(huì)對(duì)仔豬健康構(gòu)成威脅。藥敏試驗(yàn)表明，出現(xiàn)該疾病的仔豬可以通過(guò)頭孢拉啶、頭孢噻肟、諾氟沙星等藥物對(duì)其進(jìn)行診治。此外，做好母豬的健康防御工作能夠?qū)υ摷膊∑鸬揭欢ǖ囊种谱饔?。試?yàn)證明，為即將生產(chǎn)的母豬注射大腸桿菌多價(jià)菌苗，所生產(chǎn)的幼仔豬的黃、白痢疾病發(fā)病概率都明顯得到下降。而值得注意的是，菌苗的制備須與本豬場(chǎng)的致病大腸桿菌血清種類一致，否則將無(wú)法達(dá)到預(yù)設(shè)的防治效果。仔豬依然存在黃、白痢發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)。

參考文獻(xiàn)：

[1]楊作豐，宋淑英，高鋒，等. 生豬養(yǎng)殖場(chǎng)仔豬白痢大腸桿菌分離、鑒定及藥物敏感性試驗(yàn)[J]. 飼料工業(yè)，2017，38（9）：61-62.

[2]祖立闖，謝金文，姚春陽(yáng)，等. 一例仔豬致病性大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)[J]. 養(yǎng)豬，2017，34（2）：100-101.