梔子豉湯配伍規(guī)律研究

李函陽，曹文正，高紅梅

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117）

梔子豉湯出自漢代張仲景之《傷寒論》，本方用于太陽表證、陽明熱證診治不當(dāng)導(dǎo)致的懊惱煩悶之證。梔子豉湯方中的梔子，性味苦寒，體輕上浮，既可清宣胸膈郁熱，又可導(dǎo)火熱下行；淡豆豉氣味輕薄，既能解表宣熱，又可和降胃氣。二藥配伍，清中有宣，宣中有降，為清宣胸膈郁熱，以治虛煩懊儂之良方?，F(xiàn)代藥理研究表明，梔子豉湯具有顯著的抗抑郁作用[1-2]。梔子豉湯中化學(xué)成分有環(huán)烯醚萜類、單萜類、有機酸類、黃酮類、三萜皂苷類等，其中環(huán)烯醚萜類中梔子苷具有抗抑郁活性[3-5]。本實驗研究進一步確定不同配伍比例的梔子豉湯中梔子苷、總環(huán)烯醚萜苷的含量變化規(guī)律，為其研制開發(fā)抗抑郁中藥提供基礎(chǔ)。

1 儀器、試劑與材料

島津LC-2030高效液相色譜儀，紫外檢測器；UV-1780紫外分光光度計；TDL-80-2B低速離心機；FA1204B分析天平；KQ-250B超聲波清洗器。乙腈、甲醇均為色譜純；其余試劑均為分析純；水為娃哈哈純凈水。

梔子購于酒泉市培豐中藥材生態(tài)種植加工有限公司（批號：170101）。淡豆豉購于酒泉市培豐中藥材生態(tài)種植加工有限公司（批號：161001）。梔子苷對照品購于中國食品藥品檢定研究院（批號：110749-201718）。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同配比梔子豉湯中梔子苷含量測定

2.1.1 分析條件

2.1.1.1 色譜條件 C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相為乙腈：水（10：90）；流速為1.0 mL/min；柱溫為25 ℃；檢測波長為237 nm。

2.1.1.2 檢測波長的確定 取梔子苷對照品溶液，在200～400 nm進行光譜掃描，隨行空白對照。梔子苷對照品溶液在237 nm處有最大吸收，因此選237 nm作為檢測波長。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱定梔子苷對照品20 mg，置于20 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲溶解，甲醇定容。精密吸取300 μL于10 mL容量瓶中，25、50、150、250、400、500 μL于5mL容量瓶中，加甲醇至刻度，制成30 μg/mL梔子苷對照品溶液及5、10、30、50、80、100 μg/mL系列濃度的梔子苷對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備

2.1.3.1 不同配比梔子豉湯供試品溶液的制備 分別取梔子 ： 淡豆豉（1：1，1：2，1：4，2：1，10：1）30 g[6-7]，先煮梔子（剪碎），加400 mL水，煎至水剩余約250 mL時，加淡豆豉（包煎），待水剩余約150 mL時，絹布過濾，合并濾液，蒸餾水定容到150 mL，在2 000 r/min條件下離心10 min，得到上清液。取上清液稀釋100倍，用0.22 μm的微孔濾膜過濾，得到不同配比梔子豉湯供試品溶液[8-11]。

2.1.3.2 梔子藥材供試品溶液的制備 精密稱定梔子粉末（過四號篩）0.103 5 g，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，用0.22 μm的微孔濾膜過濾得到梔子藥材供試品溶液。

2.1.4 線性關(guān)系考察 精密吸取2.1.2項下系列梔子苷對照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀中，在237 nm處進行檢測，以濃度（X）為橫坐標，以峰面積（Y）為縱坐標，繪制梔子苷標準曲線，求出線性回歸方程為Y =14 001 X - 1 847.4，r2= 0.999 9，梔子苷在0.05～1 μg/mL

內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.1.5 精密度考察 取同一梔子苷對照品溶液及梔子豉湯（1：4）供試品溶液，按上述梔子苷含量測定方法連續(xù)測試6次，RSD值分別為：0.29%和0.35%，結(jié)果表明測定方法精密度良好。

2.1.6 重復(fù)性考察 取梔子：淡豆豉（1：4）按2.1.3.1項下方法制備供試品溶液6份，按上述方法測定，測得梔子苷的平均含量為40.93 μg/mg，RSD為1.44%，結(jié)果表明測定方法重復(fù)性良好。

2.1.7 穩(wěn)定性考察 取同一份梔子豉湯（1：4）供試品溶液，分別在放置不同時間后按上述方法測定，RSD為0.64%，結(jié)果表明，供試品溶液在 6 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.8 加樣回收率 采用加樣回收實驗，以梔子：淡豆豉（1：4）煎煮液為樣品，加入對照品，按2.1.3項下方法制備梔子豉湯供試品溶液，按上述方法進行測定，按下列公式計算加樣回收率。

加樣回收率（%）=（C-A）/B×100%。其中：A為供試品中被測成分含量, B為對照品加入量，C實際測出供試品中成分含量。平均回收率為98.20%，RSD為1.92%，結(jié)果表明，本方法測定梔子苷的回收率良好。

2.1.9 供試品中梔子苷含量測定 取2.1.3項下供試品溶液，精密吸取10 μL，注入高效液相色譜儀進行測定，得到峰面積值代入2.1.4項下的線性回歸方程，求出不同配比梔子豉湯中梔子苷含量[12-14]。見表1。

表1 供試品中梔子苷含量測定

2.2 不同配比梔子豉湯中總環(huán)烯醚萜苷含量測定

2.2.1 供試品溶液的制備 取2.1.3.1項下的上清液，稀釋500倍，得到不同配比梔子豉湯供試品溶液。另取2.1.3.2項下溶液稀釋30倍，得到梔子藥材供試品溶液。

2.2.2 梔子苷對照品溶液的制備 按2.1.2項下方法，制成6、7、8、9、10、11 μg/mL系列濃度的梔子苷對照品溶液。

2.2.3 檢測波長確定 分別取梔子苷對照品溶液、供試品溶液，在紫外分光光度計200～400 nm掃描，隨行空白對照。梔子苷對照品溶液和供試品溶液均在237 nm處有最大吸收，因此選237 nm作為檢測波長。

2.2.4 線性關(guān)系考察 取2.2.2項下系列梔子苷對照品溶液，在237 nm處測吸光度，以濃度（C）為橫坐標，以吸光度（A）為縱坐標，繪制梔子苷標準曲線，求出線性回歸方程為A = 0.051 1 C - 0.191 1，r2= 0.999 8，梔子苷在6～11 μg/mL內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度考察 取同一梔子苷對照品溶液及梔子豉湯（1：4）供試品溶液連續(xù)測定吸光度6次，RSD值分別為：0.07% 和 0.05%，結(jié)果表明測定方法精密度良好。

2.2.6 重復(fù)性考察 取梔子：淡豆豉（1：4）按2.2.1項下方法制備供試品溶液6份，以水為空白，237 nm下測供試品吸光度，代入標準曲線，計算總環(huán)烯醚萜苷平均含量115.11 μg/mg，RSD為0.74%，結(jié)果表明測定方法重復(fù)性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性考察 取同一份梔子豉湯（1:4）供試品溶液，分別在放置不同時間后測定吸光度，RSD為1.60%，結(jié)果表明， 供試品溶液在 6 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.8 加樣回收率 采用加樣回收實驗，以梔子：淡豆豉（1:4）煎煮液為樣品，加入對照品，按上述方法進行測定，按2.1.8項下方法與公式計算加樣回收率。平均回收率為96.76%，RSD為1.35%，結(jié)果表明本方法測定梔子苷的回收率良好。

2.2.9 供試品中總環(huán)烯醚萜苷含量測定 取2.2.1項下供試品溶液，在237 nm處測得吸光度，代入2.2.4項下的線性回歸方程，求出不同配比梔子豉湯中總環(huán)烯醚萜苷含量[15-18]，見表2。

表2 供試品中總環(huán)烯醚萜苷含量測定

3 討論

3.1 提取方法、劑量的選擇 本實驗選擇了煎煮法為不同配伍比梔子豉湯的提取方法?！秱摗分袟d子豉湯處方原文為“梔子十四個（擘），香豉四合（綿裹），上二味以水四升，先煮梔子得二升半，內(nèi)豉，煮取一升半，去滓”，查閱歷代中藥度量衡演變考論及仲景方用藥劑量的考察文獻[19-23]，梔子豉湯中“梔子十四個”約12 g，“香豉四合”（80 mL）約48.27 g，“升”換算為現(xiàn)今的計量單位為200 mL，推算得梔子豉湯中梔子與淡豆豉的比例為1：4，并確定了本實驗中藥、水的劑量。

3.2 梔子豉湯比例的選擇 從實驗結(jié)果看，梔子：淡豆豉（1：1、1：2、1：4、2：1、10：1）的梔子豉湯中，梔子豉湯（1：4）梔子苷、總環(huán)烯醚萜苷的轉(zhuǎn)移率在5種配伍比例中最高，可以說明張仲景之《傷寒論》立方嚴謹，用藥精當(dāng)，配伍巧妙，療效顯著；并且進一步的確定了《傷寒論》中梔子豉湯配伍比例的科學(xué)性與可信度，為后續(xù)梔子豉湯治療抑郁癥等臨床研究中配伍比例選擇提供重要依據(jù)。此外，從結(jié)果中觀察到，在梔子比例一定時，隨著淡豆豉的比例增加，梔子苷、總環(huán)烯醚萜苷的轉(zhuǎn)移率也隨之增加。為了進一步確定梔子與淡豆豉的配比規(guī)律，加測了梔子：淡豆豉（1：6、1：10）的梔子豉湯中梔子苷、總環(huán)烯醚萜苷的含量。結(jié)果，梔子苷的含量為 29.27 μg/mg、30.44 μg/mg，轉(zhuǎn)移率為：63.82%、66.38%；總環(huán)烯醚萜的含量為72.94 μg/mg、102.14 μg/mg，轉(zhuǎn)移率為 27.68%、38.62%。得出結(jié)論，在梔子用量一定時，隨著淡豆豉的用量增加，梔子苷、總環(huán)烯醚萜苷的轉(zhuǎn)移率先增大后減小，其中梔子豉湯（1：4）時最高。