添加不同形式亞麻油對肉羊生產(chǎn)性能、肉品質(zhì)、脂肪酸含量及脂代謝相關(guān)酶基因mRNA表達(dá)量的影響

張秋旭，張潤厚，史曉雪，李 剛，高愛琴

(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，呼和浩特 010018)

羊肉中多飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid, PUFA)含量受日糧組成影響較大，由于舍飼肉羊短期育肥過程需攝取高比例的精料，導(dǎo)致羊肉中飽和脂肪酸(saturated fatty acid, SFA)和n-6 PUFA含量高于放牧肉羊[1]，而高SFA/PUFA和n-6 PUFA/n-3 PUFA將增加人們罹患心血管疾病的風(fēng)險[2-3]。根據(jù)以往研究發(fā)現(xiàn)，提高反芻動物肌肉中CLA的水平主要?dú)w結(jié)于日糧中不飽和脂肪酸(unsaturated fatty acid, UFA)的含量，UFA在瘤胃中的氫化程度以及組織中SCD酶的活力這3個方面。對亞麻油進(jìn)行過瘤胃保護(hù)處理可減少瘤胃對UFA的氫化作用，由于肉中CLA主要來自日糧CLA沉積、瘤胃氫化菌對亞油酸(linoleic acid, LA)和α-亞麻酸(alpha～Linolenic acid ALA)的異構(gòu)化以及其前體物反-11十八碳二烯酸(t-11 C18:2, TVA)在組織中的去飽和作用[4]，因此日糧UFA的過瘤胃保護(hù)在減少氫化作用同時使其壁材具備一定的緩釋作用，利用氫化菌對日糧脂肪酸的異構(gòu)化使更多的CLA沉積于動物產(chǎn)品中[5]。微膠囊脂末過瘤胃效果介于未保護(hù)油脂和整粒油籽之間，且具有一定的緩釋作用，是過瘤胃脂肪中增加PUFA，尤其是CLA含量較好的添加方式[6]，但是目前還未見亞麻油微膠囊在反芻動物生產(chǎn)方面的應(yīng)用報道，對其作用效果也并不明確。

n-3 PUFA包含ALA、二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid, DHA)。研究發(fā)現(xiàn)，n-3 PUFA可直接作用于胞內(nèi)信號通路，激活包含過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferators activated receptorPPAR)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(sterol regulatory element binding proteins,SREBP)在內(nèi)的多種轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮作用[7]。亞麻籽中n-3 PUFA含量豐富，可上調(diào)肌肉中PPARγmRNA的表達(dá)。PPARγ參加脂代謝的調(diào)節(jié)及脂肪細(xì)胞的分化，激活PPARγ過表達(dá)可上調(diào)SREBP1、脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase，LPL)、硬脂酰輔酶A去飽和酶(stearoyl-CoA desaturase, SCD)等脂肪相關(guān)基因的表達(dá)，從而上調(diào)脂肪酸去飽和系數(shù)，使UFA和PUFA含量增加[8-9]。n-3 PUFA可通過抑制細(xì)胞核內(nèi)SREBP1豐度而降低脂肪合成基因的表達(dá),研究表明，n-3 PUFA加速SREBP1 mRNA的降解，減少脂質(zhì)生成，有益于細(xì)胞內(nèi)能量平衡，減輕胰島素抵抗[10]。SREBP1可激活與脂類和膽固醇合成與轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的基因，其靶基因主要包括SCD、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)、乙酰輔酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)。

本研究以不同形式的亞麻油(亞麻油、亞麻油微膠囊脂末、亞麻籽)為試驗材料，在相同油脂添加量下，初步比較研究其對肉羊生產(chǎn)性能、肌肉營養(yǎng)成分、肉品質(zhì)及脂肪酸含量的影響，并根據(jù)脂肪代謝相關(guān)調(diào)節(jié)因子(PPARγ、SREBP1)及關(guān)鍵酶(LPL、FAS、ACC、SCD)mRNA在綿羊背最長肌中表達(dá)量的變化，探討亞麻油不同添加形式對肌肉中脂類代謝的影響，以期為亞麻油微膠囊脂末在生產(chǎn)富含PUFA羊肉的應(yīng)用中提供基礎(chǔ)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

亞麻油微膠囊脂末由大連醫(yī)諾生物有限公司提供，壁材為大豆蛋白、麥芽糊精和亞麻籽膠混合物，芯材為亞麻油，含油率50%。亞麻籽、亞麻油由呼和浩特土默特左旗榨油廠提供。

1.2 試驗動物與飼養(yǎng)管理

選擇24只日齡((100±10) d)和體重((27±2.17) kg)相近的健康杜泊(♂)×小尾寒羊(♀)雜交F2代公羔，隨機(jī)分為4組，每組6只。羔羊進(jìn)欄前統(tǒng)一進(jìn)行疫苗注射及驅(qū)蟲，單欄飼養(yǎng)，每日早晚飼喂，自由飲水，記錄采食量。試驗共計50 d，預(yù)試期15 d，正試期35 d。

1.3 試驗設(shè)計及日糧營養(yǎng)水平

采用單因子完全隨機(jī)設(shè)計，分別飼喂4種日糧，基礎(chǔ)日糧由全混合顆粒料組成，精粗比6∶4。對照組(CON)飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗組分別在飼喂基礎(chǔ)日糧的同時添加含油量為4%的亞麻油(LO)、亞麻油微膠囊脂末粉(LOM)和亞麻籽炒粒(L)，添加量分別為精料的4%、8%和10%。玉米及亞麻餅作為補(bǔ)充日糧中的能量和蛋白原料，4種日糧為等能等氮水平。各組日糧的原料組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗日糧和添加油脂的脂肪酸組成采用氣相色譜法(PE，Clarus 680, Perkin Elmer)進(jìn)行測定，見表2。

1.4 屠宰及樣品的采集

飼養(yǎng)試驗結(jié)束后所有羊只統(tǒng)一屠宰，宰前禁食24 h，禁水2 h，采集200 g左右背最長肌用于進(jìn)行營養(yǎng)成分及肉品質(zhì)檢測；另取少量背肌置于液氮，-80 ℃冰箱保存，用于脂肪酸含量的測定及脂肪代謝相關(guān)酶基因mRNA表達(dá)量的分析。

1.5 測定指標(biāo)及方法

1.5.1 生產(chǎn)性能的測定 記錄試驗初始體重和終末體重，計算平均日增重(average daily gain, ADG)、干物質(zhì)采食量(dry matter intake, DMI)和料肉比(feed-gain ratio, FGR)。

1.5.2 肉中營養(yǎng)成分與肉品質(zhì)指標(biāo)的測定 采用烘干法、凱氏定氮法、索氏提取法和高溫灰化法分別測定肉中干物質(zhì)、粗蛋白、粗脂肪及粗灰分含量；用梅特勒-托利多(GB-T11165) pH計測定背最長肌45 min和24 h的pH，并立即測定滴水損失、蒸煮損失；利用C-LM3B型嫩度計和全自動壓肉儀測定背肌剪切力和系水力。

表1試驗日糧組成和營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

Table1Thecompositionandnutrientlevelsofexperimentaldiets(air-drybasis)

%

①. 預(yù)混料為每千克日糧提供：VA 400 000 IU，VD 30 000 IU，VE 3 000 IU，鐵3 000 mg，銅490 mg，錳1 750 mg，硒22.5 mg，碘55 mg，鋅2 000 mg，鈷25 mg；②. 代謝能為計算值，其余為實(shí)測值

①. The premix provided the following for per kg of diet：VA 400 000 IU, VD 30 000 IU, VE 3 000 IU, Fe 3 000 mg, Cu 490 mg, Mn 1 750 mg, Se 22.5 mg, I 55 mg, Zn 2 000 mg, Co 25 mg;②. The metabolizable energy is calculated value, the others are measured values

1.5.3 脂肪酸含量的測定 肌肉樣品的預(yù)處理：用氯仿/甲醇(3∶1)溶液超聲抽提肌肉10 min，離心機(jī)離心(1 800 r·min-110 min)收集脂肪，氮?dú)獯蹈桑患尤? mL 6% KOH的甲醇溶液，室溫過夜(密封)，加入2 mL正己烷，搖勻，震蕩離心，棄上層萃取液，剩下水相液體轉(zhuǎn)移至帶蓋玻璃管中氮?dú)獯蹈?，加入約2 mL BF3-MeOH，充入氮?dú)夂竺荛]，90 ℃ 加熱2 h，冷卻，加入約1 mL NaCl溶液(5%)，用2 mL正己烷萃取3次，并轉(zhuǎn)移到2 mL進(jìn)樣瓶中，氮?dú)獯蹈?，待分析。采用氣相色譜法測定背最長肌中主要脂肪酸的組成和含量。氣相色譜條件：氣相色譜儀(Thermo Fisher)；色譜柱：TG-5 MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；進(jìn)樣口溫度290 ℃；進(jìn)樣量1 μL。

1.5.4 基因表達(dá)量的分析 利用Trizol提取試劑(TaKaRa，Japan)從肉中提取總RNA，OD260 nm/OD280 nm值為1.8～2.1的樣品用于反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA完整度。采用Prime ScriptTMRT Reagent Kit with gDNA Eraser(TaKaRa，Japan)反轉(zhuǎn)錄試劑盒于PCR儀中合成cDNA，反應(yīng)條件：37 ℃轉(zhuǎn)錄反應(yīng)15 min，85 ℃反轉(zhuǎn)錄酶失活5 s，4 ℃時結(jié)束，-80 ℃冰箱保存。參考GenBank提供的綿羊引物序列，由北京六合華大基因科技有限公司合成。引物序列見表3。

表2試驗日糧及添加油脂的脂肪酸組成

Table2Fattyacidscompositionofdietsandlipidsupplements

脂肪酸Fatty acid試驗日糧/(g·kg-1DM)Diet添加油脂(占總脂肪酸的百分比)Lipid supplement (percentage of total fatty acid)CONLOLOML亞麻油Linseed oil亞麻油微膠囊Linseed oil microcapsule亞麻籽Linseed棕櫚酸C16:04.637.998.057.945.605.275.50硬脂酸C18:00.691.241.281.263.902.663.48油酸C18:1n9c8.8915.5115.6215.4722.2216.7119.54亞油酸C18:2n6c15.2426.2726.3926.0917.1015.6315.00ALA C18:3n30.772.032.812.9049.6058.9955.97總脂肪酸TFA①30.2153.0454.1553.66---不飽和脂肪酸UFA24.9043.8144.8244.4688.9291.3290.51飽和脂肪酸SFA5.319.239.339.209.507.938.98UFA/SFA4.694.754.804.839.3611.5210.08多不飽和脂肪酸PUFA16.0128.3129.2029.0066.7074.6170.97n-615.2426.2726.3926.0917.1015.6315.00n-3 0.772.032.812.9049.6058.9955.97n-6/n-3 19.7412.929.388.980.340.260.27

①. 添加油脂中的總脂肪酸(TFA)含量為100%

①.The total fatty acid content in the added oil is 100%

表3熒光定量引物信息

Table3Theinformationsofprimersforreal-timequantitativePCR

基因Gene引物序列(5'→3')Primer sequenceGenBank登錄號GenBank accession No.產(chǎn)物長度/bpLengthFASF:CACAACCCAAACCCCAAGAR:GAGCCACCGAAGCCAAAXM_015098375.1116ACCF:GAAAATCCACAACGCCAACCR:CCTCCACCTCCACAAACCANM_001009256.180LPLF:CCCAGCAGCATTATCCAGTGTR:TTCATCCGCCATCCAGTTCNM_001009394.186SCDF:GTGGGAAACAAGGCAGGAAGR:GAGTCAGGAGAGAAAGGGAGCANM_001009254.182PPARγF:CACAGGCCGAGAAGGAAAAGR:TTGGTCAGCGGGAAGGAXM_015102092.1133SREBP1F:CGACACCACCAGCATCAACR:GCCAGGAGAAGCACCAXM_015098336.1138GAPDHF:GGTCGGAGTGAACGGATTTGR:TGGCAACGATGTCCACTTTGNM_00128974683

采用SYBR Premix Ex TaqTMⅡ(TaKaRa，Japan)進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增的檢測。反應(yīng)體系為25 μL：SYBR Premix Ex TaqTMⅡ12.5 μL，上、下游引物各1 μL，cDNA模板2 μL和無酶水8.5 μL。以GADPH基因為內(nèi)參基因。實(shí)時熒光定量的反應(yīng)程序：95 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s，60 ℃退火 30 s，40個循環(huán)。采用2-ΔΔCt法進(jìn)行基因相對定量分析。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2007進(jìn)行初步整理后，采用SAS 9.2 GLM模型進(jìn)行分析，并進(jìn)行Duncan氏多重比較檢驗，所有指標(biāo)以每只肉羊為統(tǒng)計單位。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P<0.05為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 亞麻油不同添加形式對肉羊生產(chǎn)性能的影響

由表4可見，試驗開始時各組體重接近，結(jié)束時體重差異顯著(P<0.05)，與對照組相比LOM顯著提高7.94%，為40.78 kg(P<0.05)；與其他試驗組相比，LO組顯著降低ADG水平(P<0.05)，為0.25 kg·d-1，LOM組最高，為0.34 kg·d-1；各組羔羊DMI接近(P>0.05)，亞麻油不同添加形式對FGR沒有顯著影響(P>0.05)，但LO組FGR高于其他組，影響羔羊的飼料報酬。

表4亞麻油不同添加形式對肉羊生產(chǎn)性能的影響

Table4Effectsofsupplementationofdifferentformsoflinseedoilongrowthperformanceofmuttonsheep

項目Item處理TreatmentCONLOLOMLP值P-value試驗初重/kg Initial BW26.75±1.1828.01±3.3929.10±1.6727.78±2.170.31試驗?zāi)┲?kg Final BW37.78±1.15bc36.92±2.17c40.78±1.47a39.45±1.07ab0.02干物質(zhì)采食量/(kg·d-1) DMI1.59±0.121.31±0.281.59±0.101.77±0.220.26平均日增重/(kg·d-1) ADG0.32±0.03a0.25±0.05b0.34±0.02a0.33±0.05a0.03料肉比FGR5.00±0.495.56±0.324.72±0.315.39±0.760.59

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)；肩標(biāo)相同字母或無字母標(biāo)注表示差異不顯著(P>0.05)。下表同

In the same column, values with different small letter superscripts mean significant difference(P<0.05); Values with the same or no letter superscripts mean no significant difference(P>0.05). The same as the following tables

2.2 添加不同形式亞麻油對肉羊肌肉營養(yǎng)成分及肉品質(zhì)的影響

由表5可見，日糧添加油脂可顯著提高肉羊肌肉中脂肪含量，試驗組均比CON組顯著提高(P<0.05)；試驗組肌肉中粗蛋白含量高于CON組，但差異不顯著(P>0.05)；添加不同形式亞麻油對肉羊肌肉水分和灰分含量無顯著影響(P>0.05)。

由表6可見，與CON組相比，LOM組顯著降低了背肌的剪切力(P<0.05)，其他各組間差異不顯著(P>0.05)；總體上來看，添加不同形式亞麻油對肌肉的pH、剪切力、滴水損失、蒸煮損失、失水率的影響并不顯著(P>0.05)，但LOM組較CON組降低了滴水損失和升高了蒸煮損失。

2.3 添加不同形式亞麻油對肉羊肌肉中主要脂肪酸含量的影響

表7顯示，添加不同形式亞麻油對TFA含量沒有顯著影響(P>0.05)，但試驗組TFA比CON組高20%左右；日糧沒有顯著影響C14～C18 SFA和總SFA含量(P>0.05)；試驗組對MUFA影響主要表現(xiàn)在C16:1上，亞麻籽可顯著提高C16:1含量(P<0.05)，但對C17:1、C18:1、TVA及總MUFA含量沒有明顯影響(P>0.05)，在PUFA方面，試驗組與CON組相比可顯著增加肌肉CLA、ALA、花生四烯酸(arachidonic Acid, AA)的含量(P<0.05)，其中LOM組CLA較CON、LO、L組顯著提高375%、171%和58%(P<0.05)；L、LOM組n-3 PUFA含量比CON組顯著提高151%、178%，較LO組顯著提高39%、54%(P<0.05)，但對n-6 PUFA影響并不顯著(P>0.05)；添加油脂對SFA、PUFA及PUFA/SFA含量沒有顯著影響(P>0.05)，但與CON組相比，顯著降低了n-6/n-3水平，亞麻油的添加使羊肉n-6/n-3比例符合人們對膳食脂肪酸n-6/n-3的健康需求，彌補(bǔ)舍飼肉羊n-6 PUFA高于n-3 PUFA的營養(yǎng)缺陷。

表5添加不同形式亞麻油對肉羊肌肉營養(yǎng)成分的影響

Table5Effectsofsupplementationofdifferentformsoflinseedoilonnutrtientcontentsinmuscleofmuttonsheep

%

表6添加不同形式亞麻油對肉羊肉品質(zhì)的影響

Table6Effectsofsupplementationofdifferentformsoflinseedoilonmeatqualityofmuttonsheep

項目Item處理TreatmentCONLOLOMLP值P-valuepH 45 min6.64±0.266.71±0.226.67±0.156.83±0.280.54pH 24 h5.49±0.055.58±0.115.53±0.135.48±0.150.44滴水損失/% Dripping loss5.01±0.484.78±0.724.11±1.295.64±0.900.06剪切力/N Shear force57.32±1.95a53.58±4.89ab50.49±4.77b55.36±3.03ab0.04蒸煮損失/% Cooking loss43.65±3.6343.95±0.9945.56±3.3044.27±2.030.63失水率/% Rate of loss water29.38±1.4728.62±1.3328.03±1.4127.23±1.260.08

表7添加不同形式亞麻油對肉羊肌肉中主要脂肪酸含量的影響

Table 7 Effects of supplementation of different forms of linseed oil on fatty acids content in muscle of mutton sheep%

2.4 添加不同形式亞麻油對綿羊肌肉中脂代謝關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子和相關(guān)酶mRNA表達(dá)量的影響

由表8可知，不同添加形式的亞麻油可顯著影響脂代謝關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子PPARγ和SREBP1 mRNA表達(dá)，與CON組相比，LO、LOM及L組中PPARγmRNA表達(dá)量分別上調(diào)53%、68%及36%，而SREBP1 mRNA表達(dá)量下調(diào)47%、49%、53%(P<0.05)；LOM的PPARγmRNA表達(dá)量高于LO、L組，但各處理組之間的PPARγ表達(dá)量差異并不顯著(P>0.05)，而L組SREBP1 mRNA的表達(dá)量低于LO、LOM組，各組間SREBP1 mRNA表達(dá)量差異也不顯著(P>0.05)。

表8添加不同形式亞麻油對綿羊肌肉中脂代謝關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子基因表達(dá)的影響

Table8EffectofsupplementationofdifferentformsoflinseedoilonmRNAabundanceofkeyregulatoryfactorsinfattyacidssynthesisinthemuscleofsheep

項目Item處理TreatmentCONLOLOMLP值P-valuePPARγ1.00b1.53±0.32ab1.68±0.30a1.36±0.32ab0.048SREBP11.00a0.53±0.09b0.51±0.07b0.47±0.13b0.002

由表9可見，日糧添加亞麻油物質(zhì)對肌肉FAS、SCD、LPLmRNA表達(dá)量影響顯著(P<0.05)，試驗LO、LOM、L組FAS表達(dá)量顯著低于CON組，分別下調(diào)32%、45%、41%，但試驗各組間差異并不顯著(P>0.05)，與CON組相比，試驗各組均可下調(diào)SCDmRNA的表達(dá)，其中L組最低，下調(diào)幅度達(dá)63%，與LOM組差異顯著(P<0.05)；各試驗組顯著上調(diào)LPLmRNA表達(dá)水平，其中LOM組最高，是CON組的2.7倍，但各試驗組間差異不顯著(P>0.05)；與CON組相比，添加不同形式的亞麻油并未對ACCmRNA的表達(dá)量產(chǎn)生顯著影響，但具有一定的下調(diào)趨勢(P=0.051)。

表9添加不同形式亞麻油對綿羊肌肉中脂代謝相關(guān)酶基因表達(dá)的影響

Table9EffectofsupplementationofdifferentformsoflinseedoilonmRNAabundanceoflipidmetabolismrelatedenzymesinthemuscleofsheep

項目Item處理TreatmentCONLOLOMLP值P-valueFAS1.00a0.68±0.10b0.55±0.13b0.59±0.22b0.012ACC1.000.57±0.160.44±0.180.46±0.150.051LPL1.00b2.51±0.81a2.70±0.58a2.33±0.63a0.028SCD1.00a0.53±0.10bc0.67±0.24b0.37±0.25c<0.001

3 討 論

3.1 亞麻油不同添加形式對肉羊生產(chǎn)性能的影響

目前國內(nèi)外對于日糧添加油脂對反芻動物DMI的影響尚無定論，Martin等[11]在奶牛日糧中添加含油量為5.8%的亞麻籽、擠壓亞麻籽與亞麻油發(fā)現(xiàn)，天然亞麻籽對奶牛的DMI無顯著影響，而擠壓亞麻籽與亞麻油中DMI顯著降低。趙天章[4]發(fā)現(xiàn)，在巴美肉羊日糧中添加2.4%的魚油、大豆油及混合油脂對肉羊的DMI沒有顯著影響。本試驗對DMI的研究結(jié)果與其一致，不同添加形式的亞麻油對肉羊DMI無明顯影響，這可能與本試驗中使用全混合顆粒料，添加油脂的日糧適口性與對照組無明顯區(qū)別有關(guān)，而添加擠壓亞麻籽與亞麻油的全混合日糧帶有特殊的苦味，日糧適口性差致使DMI降低。日糧脂肪添加對ADG結(jié)果影響的報道并不一致，但均表明高PUFA日糧可提高日增重[12-14]。本試驗發(fā)現(xiàn)，未經(jīng)包被的LO組ADG顯著低于其他組，可能是直接向日糧中添加未保護(hù)的植物油，對瘤胃發(fā)酵有一定抑制作用，影響瘤胃粗纖維降解率[15]，而導(dǎo)致ADG的降低，與此對應(yīng)的經(jīng)過壁材、種皮保護(hù)的LOM和L組的ADG含量明顯上升，這與Gillis和許蕾蕾等[16-17]在肉牛中添加過瘤胃脂肪以及亞麻籽增加ADG的研究較為一致，過瘤胃亞麻油能夠提高能量利用率而增加肉羊日增重。

3.2 添加不同形式亞麻油對肉羊肌肉營養(yǎng)成分及肉品質(zhì)的影響

多數(shù)研究表明，動物品種、年齡對肉中營養(yǎng)成分影響較大，日糧因素對其影響并不明顯[18]。但日糧營養(yǎng)水平高時，可增加肉中肌內(nèi)脂肪的含量，而其嫩度也隨之增加，Mapiye等[19]在日糧中添加15%亞麻籽可增加肉牛肌肉脂肪含量，但對水分、蛋白和灰分等營養(yǎng)物質(zhì)沒有影響。本試驗與以上結(jié)果一致，添加油脂的試驗組脂肪含量高于對照組，但對其他營養(yǎng)物質(zhì)沒有顯著影響。反芻動物日糧中添加亞麻籽對肉品質(zhì)有一定的改善作用，李秋鳳等[20]研究表明，添加5%、10%亞麻籽可顯著提高牛肉嫩度，而對其他肉品指標(biāo)沒有影響，但也有研究發(fā)現(xiàn)，添加10%亞麻籽不會對綿羊剪切力、失水率等肉質(zhì)指標(biāo)產(chǎn)生影響[21]，本試驗中，除LOM組的剪切力顯著低于其余各組外，不同亞麻油的添加形式對pH、蒸煮損失、失水率等肉質(zhì)指標(biāo)同樣沒有顯著影響。肌肉中蛋白和脂肪的含量決定羊肉的嫩度，水分含量與肉中多汁性有關(guān)，試驗各組肉中蛋白和水分含量相當(dāng)，因此并不會對肉質(zhì)產(chǎn)生過多影響。雖然添加油脂使肌內(nèi)脂肪含量高于對照組，但各組嫩度呈現(xiàn)低于對照組的趨勢，羊肉肌肉中脂肪所占比例低于牛肉，因此添加亞麻籽對肉牛肌內(nèi)脂肪影響效果更為顯著，嫩度也隨之變化，而LOM對嫩度的影響原因可能是壁材對亞麻油的保護(hù)作用而增加脂肪酸在肉中沉積效率進(jìn)而增加肌肉嫩度，但具體原因還需進(jìn)一步在嫩度方面的研究。

3.3 添加不同形式亞麻油對肉羊肌肉中主要脂肪酸含量的影響

人類膳食脂肪酸推薦的n-6 PUFA/n-3 PUFA應(yīng)小于5，但舍飼肉羊的n-6 PUFA含量相對較高，導(dǎo)致肉中n-6/n-3往往高于這一范圍[22]。本試驗結(jié)果顯示，日糧添加壁材和種皮保護(hù)的亞麻油可增加肉中CLA、ALA n-3系列PUFA，但對總n-6系列含量沒有產(chǎn)生影響，肉中n-6/n-3符合膳食脂肪酸健康標(biāo)準(zhǔn)。Facciolongo等[23]研究報道稱，日糧中添加富含ALA類物質(zhì)能夠增加畜產(chǎn)品中的n-3 PUFA含量，本試驗發(fā)現(xiàn)，日糧添加保護(hù)性亞麻油對提高n-3 PUFA含量，降低n-6/n-3比值具有良好的效果，直接添加亞麻油飼喂肉羊其肌肉中n-3 PUFA含量的增加幅度低于添加亞麻油微膠囊和亞麻籽，一方面由于亞麻油在運(yùn)輸、儲藏過程中高UFA含量極易氧化而使PUFA量減少[24]，亞麻油與日糧添加亞麻籽為同批次籽實(shí)，但從表2日糧脂肪酸含量可以看出，經(jīng)飼料加工、飼喂后亞麻油中n-3 PUFA較亞麻籽降低達(dá)30%，針對上述問題本試驗對亞麻油進(jìn)行壁材保護(hù)處理，以解決日糧亞麻油添加困難的問題；另一方面，日糧UFA在未保護(hù)下進(jìn)入瘤胃中，微生物自身采用氫化脫毒方式將UFA加氫為SFA，大量功能性不飽和脂肪酸不能有效沉積在肌肉組織中[7]，雖然對UFA具有氫化反應(yīng)，但并不徹底氫化中間產(chǎn)物及未經(jīng)氫化的n-6、n-3 PUFA，其仍可以沉積到肌肉中[25]，故受保護(hù)亞麻油可減少氫化，增加肉中n-3 PUFA含量，改善舍飼羊肉n-6/n-3比例以滿足人類對膳食脂肪酸的健康需求。此外Ferreira等[12,26]研究指出，增加CLA前提物TVA(C18:1T)的底物可提高羊肉中CLA含量，與本試驗日糧添加亞麻油微膠囊脂末提高羊肉肌肉n-3 PUFA含量，特別是CLA含量的結(jié)果類似，亞麻油微膠囊在瘤胃中釋放油脂的效果介于亞麻油與亞麻籽之間[27]，一部分UFA經(jīng)壁材保護(hù)避免氫化到達(dá)小腸后直接被機(jī)體吸收、代謝產(chǎn)生CLA沉積肉中，另一少部分PUFA氫化產(chǎn)生中間產(chǎn)物，在SCD等去飽和酶作用下生成CLA沉積到肌肉中[28]，故添加亞麻籽微膠囊對CLA在肉中的沉積比添加亞麻油及亞麻籽油具有更好的作用效果。

3.4 添加不同形式亞麻油對綿羊肌肉中脂代謝關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子和相關(guān)酶mRNA表達(dá)量的影響

日糧PUFA通過影響細(xì)胞膜信息傳遞途徑和激活肌肉轉(zhuǎn)錄因子PPARγ、SREBP1參與調(diào)控LPL、FAS、ACC及SCD等脂代謝相關(guān)酶基因的表達(dá)。ALA、CLA作為PPARγ的天然配體通過特異性激活PPARγ，調(diào)節(jié)線粒體與脂肪酸氧化相關(guān)基因的表達(dá)，其主要的靶基因為LPL[29]。有研究表明，日糧中補(bǔ)飼亞麻籽可提高背肌中PPARγ、LPL的mRNA表達(dá)水平，尤其是低比例n-6/n-3可上調(diào)PPARγmRNA的表達(dá)[30-31]，本試驗日糧添加不同形式的亞麻油發(fā)現(xiàn)，肌肉中PPARγ和LPL基因的表達(dá)水平高于對照組，并與肉中n-3的含量的變化趨勢一致。PPARγ、LPL表達(dá)上調(diào)可誘導(dǎo)間質(zhì)細(xì)胞向脂肪細(xì)胞的分化，本試驗發(fā)現(xiàn)，試驗組肉中粗脂肪、TFA含量高于對照組，添加亞麻油對PPARγ、LPL基因的表達(dá)是一種正向反饋調(diào)節(jié)，n-3 PUFA激活PPARγ核調(diào)控因子，上調(diào)LPL酶基因表達(dá)，并促進(jìn)脂肪酸的沉積，增加肉中PUFA的含量。SREBP1是主要參與脂肪合成基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)因子，研究表明，在脂質(zhì)合成過程中PUFA尤其是CLA可抑制SREBP1的表達(dá)，并使相關(guān)代謝酶基因ACC、FAS、SCDmRNA表達(dá)水平下降，目前CLA抑制機(jī)制主要是直接阻斷SREBP1蛋白的裂解活化過程，使其無法與自身啟動子上的SRE位點(diǎn)結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)錄過程，形成一個正反饋?zhàn)哉{(diào)節(jié)系統(tǒng)，PPARγ核調(diào)控因子同樣可調(diào)控SREBP1的表達(dá)，但具體機(jī)制尚不明確[32-33]。陳娜和Urrutia等[30,34]用添加10%亞麻籽的日糧飼喂反芻動物，抑制了其背最長肌中SREBP1基因的表達(dá)，同時也下調(diào)了FAS、ACC、SCD的mRNA表達(dá)水平，與本試驗結(jié)果較為一致，本試驗中，亞麻油的不同添加形式可顯著下調(diào)SREBP1、SCD和FAS基因的表達(dá)量，而亞麻籽組的SCDmRNA表達(dá)水平低于其他兩組，其原因可能是相較于亞麻油與亞麻油微膠囊脂末，整粒亞麻籽中90%脂質(zhì)直接過瘤胃后被消化道吸收，肉中CLA沉積主要來源于機(jī)體SCD酶的去飽和化[35]，而亞麻油微膠囊組的CLA一部分來源于機(jī)體內(nèi)代謝，另一部分為在瘤胃中經(jīng)微生物對ALA等PUFA作異構(gòu)化生成CLA前體物TVA等物質(zhì)再經(jīng)組織去飽和，而絕大多數(shù)亞麻油經(jīng)瘤胃時被微生物氫化，其CLA主要來源于前提物在組織中去飽和的代謝途徑[36]。添加亞麻籽使機(jī)體組織合成CLA底物的能力高于其他兩組，故其對SCD下調(diào)酶基因的表達(dá)更為明顯，而亞麻油微膠囊脂末因瘤胃氫化產(chǎn)生CLA，雖含量高于亞麻籽組但并未抑制SCD酶的表達(dá)，推測可能相較亞麻籽其具有高SCD酶活，進(jìn)而沉積CLA，具體作用機(jī)制還有待進(jìn)行具體的研究。但總體上反映出添加亞麻籽微膠囊脂末可更好的提供PUFA底物，使更多CLA有效沉積于羊肉中。

4 結(jié) 論

4.1日糧添加亞麻油對肉羊生產(chǎn)性能產(chǎn)生負(fù)面影響，降低綿羊平均日增重；添加油脂可增加肌肉中脂肪含量，而亞麻油微膠囊脂末可降低剪切力，提高綿羊肌肉嫩度。

4.2添加不同形式亞麻油可提高肉羊肌肉中PUFA含量，尤其是添加亞麻籽微膠囊脂末可更好的增加功能性脂肪酸CLA的含量。

4.3日糧添加富含亞麻油物質(zhì)能夠上調(diào)PPARγ、LPL基因的表達(dá)水平，并抑制SREBP1、SCD和FAS基因mRNA的表達(dá)。