高強度間歇訓練通過不同部位HSL磷酸化差異性激活減少內臟脂肪積累的機制研究

劉 陽，梅佳順，何玉秀

肥胖威脅人類健康，腹部內臟脂肪大量蓄積與脂肪肝、高血壓、2型糖尿病關系密切[10,20,19]。由于40%～60%攝氧量強度運動的脂肪供能比例較大，傳統(tǒng)觀點認為，持續(xù)較長時間的中等強度持續(xù)訓練（Moderate-intensity Continuous Training,MICT）是最佳的減肥運動方案。MICT可以降低腹部內臟脂肪重量，但必須達到較高的運動量才能有明顯的效果[18]。近年來多項研究表明，完成相同運動量時，90%攝氧量以上強度的高強度間歇訓練（high intensity interval training，HIIT）與MICT對皮下脂肪的減少效果沒有顯著差異，但HIIT能減少更多的腹部內臟脂肪[18,29]，其內在機制如何尚無定論。已知腹部內臟脂肪對促脂解類激素的敏感性更高[5]，即使在運動量相同的條件下，HIIT由于運動強度較高，對機體的骨骼肌、神經(jīng)、內分泌和免疫系統(tǒng)會造成極大的應激，在此高應激狀態(tài)下，如兒茶酚胺、生長激素、鳶尾素等脂解類激素和細胞因子會大量分泌，這可能是HIIT對腹部內臟脂肪的減重效果更明顯的內在機制。

脂肪的分解過程分為甘油三酯水解為甘油和游離脂肪酸的“脂肪動員”階段和徹底氧化成水和二氧化碳的脂肪氧化階段。其中，HSL是脂肪動員階段的關鍵限速酶之一。HSL的脂肪水解活性可以被兒茶酚胺等脂解類激素通過cAMP-PKA通路激活，加速脂肪水解，而AMP依賴蛋白激 酶 （Adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase，AMPK）可抑制其活性[1]。2017年Nature上的一篇研究指出[3]，巨噬細胞向脂肪細胞釋放的兒茶酚胺可能是促進脂肪分解的重要因素，同年Nature Medicine上的一篇研究指出[4]，脂肪分解產熱的主要動力來自交感神經(jīng)向脂肪組織釋放的兒茶酚胺遞質。脂解類激素促進機體減肥的作用機制，已經(jīng)成為當前的研究熱點。

Gaidhu研究發(fā)現(xiàn)，小鼠經(jīng)過高脂膳食飼養(yǎng)后，提取腹股溝（皮下）和附睪（內臟）脂肪細胞，加入了兒茶酚胺和cAMP-PKA激動劑forskolin后，附睪脂肪細胞HSL的絲氨酸位點HSLser563和ser660被磷酸化，HSL水解活性升高，但腹股溝脂肪細胞HSL卻并沒有出現(xiàn)磷酸化現(xiàn)象[6]。這提示腹部內臟脂肪對脂解激素激活的cAMP-PKA磷酸化更為敏感。本研究對c57bl/6小鼠進行高脂膳食飼養(yǎng)，建立肥胖小鼠動物模型，之后對其進行12周的HIIT和MICT訓練，觀察小鼠皮下和內臟脂肪細胞形態(tài)、重量、HSL蛋白表達和ser563、565和660位點磷酸化情況，探討HIIT與MICT對HSL激活的部位性差異性和磷酸化位點差異性，試圖從脂肪水解的角度，揭示HIIT更顯著減少內臟脂肪積累的內在機制，為科學制定減肥運動處方提供理論依據(jù)。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

2017年關于HIIT訓練效果的一篇Meta分析的研究指出，HIIT的減脂效果與性別無關[14]，且本研究團隊前期進行了大量女性大學生HIIT減肥效果研究，故本研究采用雌性c57bl/6小鼠作為實驗對象。3周齡小鼠（體重9.67±1.12g）購買于北京維通利華實驗動物技術有限公司。自然光照飼養(yǎng)，溫度24.0±2.0℃，濕度45%~55%，自由飲水、攝食，并記錄攝食量。

1.2 肥胖動物模型建立

1周適應性喂養(yǎng)后，隨機選取10只小鼠作為普通膳食對照組（C組），其余為肥胖建模組（H組）。C組給予標準動物飼料，H組給予高脂飼料（60%標準飼料+白砂糖16%+5%豬油+18%蛋黃粉+1%膽酸鈉）。15周飼養(yǎng)后，選取H組體重于C組體重均值10%以上的36只小鼠作為肥胖動物，并隨機分為高脂膳食對照組（HFD組，n=6只）、中等強度持續(xù)訓練組（MICT組，n=6只）和高強度間歇訓練組（HIIT組，n=6只）。HFD組高脂飼養(yǎng)，無訓練；MICT組和HIIT組在高脂飼養(yǎng)的同時，分別進行12周的MICT訓練和HIIT訓練。飼養(yǎng)和訓練期間嚴格測量并記錄攝食量、體重和身長，根據(jù)“（體重1/3）/身長×1000”的公式計算代表小鼠肥胖程度的Lee’s指數(shù)（體重單位為g，身長單位為cm）。

1.3 訓練方案

MICT和HIIT小鼠采用動物跑臺進行25°上坡運動干預。3天適應性訓練后進行正式訓練，每周訓練5天，休息2天。MICT組運動時間45 min，第1周跑速13 m/min。由于小鼠自身的生長發(fā)育，同樣攝氧量強度下，跑速會有所提升，所以隨著訓練進展，調整跑速(每周的速度見表1，依據(jù)H?ydal MA的研究[11]，此方案運動強度始終約為60%最大攝氧量）。HIIT組小鼠的訓練方案參考據(jù)Hoshino D的方案[8]制定，進行數(shù)組間歇訓練，每組中包括1min高強度運動(約100%最大攝氧量強度)和2min低強度運動（約60%最大攝氧量強度），并通過控制重復組數(shù)，保證HIIT組奔跑距離與MICT相等。（注：在比對HIIT和MICT的訓練效果時，人體試驗常采用功率車計算對外做功[30]。但動物研究無法實現(xiàn)，故本實驗控制HIIT組和MICT的奔跑距離相同，盡可能保證一致的運動量。）在5天訓練的第1天，進行1次遞增負荷測試，以確定HIIT組在此后兩周內，100%最大攝氧量強度下的跑速。依據(jù)H?ydal MA的研究，確定遞增負荷試驗的初始速度為7 m/min，跑臺坡度25°，每2 min遞增2 m/min，直到小鼠在驅趕條件下不能完成測試為止。

表1 訓練時各組跑動速度Table 1 Running Speed during Training (m/min)

圖1 MICT與HIIT組訓練方案Figure1.MICT and HIIT Training Programs

1.4 取材

運動組小鼠末次運動后48 h取材，取材前禁食12 h，腹腔注射0.4%戊巴比妥鈉（1 ml/100 g）麻醉。摘眼球取血，室溫靜置30 min，3 000 rpm離心10 min，取血清-80℃冷凍。使用生理鹽水進行主動脈灌流后，迅速取出肝臟、子宮周圍脂肪（代表內臟脂肪）和腹股溝皮下脂肪（代表皮下脂肪），濾紙吸去表面組織液，取右葉肝組織，多聚甲醛固定。脂肪在稱重后部分置于多聚甲醛，其余-80℃冷凍。

1.5 脂肪細胞和肝細胞形態(tài)

將肝組織制作石蠟切片，蘇木青伊紅染色，中性樹膠封固。顯微鏡觀察脂滴侵潤形態(tài)。

1.6 血脂4項測試

血脂4項（甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇）采用比色法進行測試，嚴格按照試劑盒說明書操作。試劑盒購自南京生物工程研究所，其中甘油三酯（TG）試劑盒貨號A110-2、總膽固醇（TC）試劑盒貨號A111-2、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒貨號A112-2、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑盒貨號A113-2。

1.7 脂肪組織HSL蛋白表達和ser563、565、660磷酸化

1）蛋白提?。褐窘M織置于RIPA裂解液中，加入PMSF和蛋白磷酸酶抑制劑混合，冰上勻漿、超聲粉碎；靜置30min之后將勻漿液置于離心機中12000rpm、4°C離心20min；取上清，BCA法測定蛋白濃度后煮沸樣品。2）Westernblot：每孔30 μg樣品，恒壓電泳，4%濃縮膠80V恒壓30min；12%分離膠150 V恒壓60 min。濕轉法將蛋白轉至PVDF膜，300mA恒流，2h；5%脫脂奶粉室溫封閉1 h；一抗孵育過夜（HSL、HSL563、HSL565和HSL660一抗采購自CST公司，貨號：#4107，#4139，#4137，#4126），濃度1:2 000；TBST洗膜次每次5 min；二抗（1：5 000，中杉金橋公司，ZB-2301）孵育2 h；TBST洗膜5×5min后發(fā)光，暗室曝光呈像。3）結果計算：采用Image J計算蛋白條帶灰度值，Westernblot結果以目標蛋白與內參蛋白灰度值比值和磷酸化蛋白與總蛋白灰度值比值表示。

1.8 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)使用平均數(shù)±標準差（X±SD）表示。以HFD作為無運動干預的對照組，對MICT和HIIT的訓練效果進行分析。由于動物飼養(yǎng)采用自由攝食，攝食量會對體重、Lee’s指數(shù)、腎周脂肪重量、腹股溝脂肪重量、HSL總蛋白表達產生影響[8]，故將攝食量作為協(xié)變量，以訓練方案作為固定因子，對以上指標進行協(xié)方差分析，以達到在排除攝食量影響的前提下，分析MICT和HIIT對小鼠以上指標造成的差異。采用LSD法進行主效應比較，以分析每兩組間差異。由于HSL磷酸化位點ser563、ser565、ser660主要受細胞內cAMP-PKA和AMPK信號調節(jié)，攝食量對其無直接作用，故對上述指標進行以訓練方案作為主因子的單因素方差分析。用事后檢驗多重比較LSD法分析不同取材時間點訓練組與對照組的差異。統(tǒng)計軟件為SPSS24.0。取P＜0.05為具有顯著性差異，P＜0.01具有非常顯著性差異。

2 實驗結果

2.1 HIIT和MICT對小鼠體重、Lee’s指數(shù)和不同部位脂肪重量的影響

將膳食量作為協(xié)變量，不同訓練方案作為固定因子，分別對體重、lee’s指數(shù)和脂肪重量進行協(xié)方差分析發(fā)現(xiàn)，總攝食量對體重無顯著主體間效應，MICT與HFD之間無顯著差異,兩者都非常顯著低于HFD（P＜0.01）?？倲z食量對Lee’s指數(shù)無顯著主體間效應，HFD與HIIT之間有顯著差異（P＜0.05），說明去除攝食量的影響后，MICT與HIIT都能夠降低小鼠體重，HIIT能有效改善小鼠體型。HFD、MICT和HIIT總攝食量、體重、Lee’s指數(shù)和腹股溝與子宮周脂肪重量見圖2。

總攝食量對子宮周圍脂肪有顯著的主體間效應，（P＜0.05），對腹股溝脂肪無顯著的主體間效應。HIIT的子宮周圍脂肪非常顯著的低于HFD組與MICT組（P＜0.01），HIIT和MICT的腹股溝脂肪重量都顯著低于HFD組（P＜0.05）。說明HIIT和MICT都能夠有效的減少皮下脂肪積累，兩者之間差異不顯著，但HIIT較MICT能夠減少更多的內臟脂肪積累。

圖2 不同訓練組小鼠體重、Lee’s指數(shù)和不同部位脂肪重量Figure 2.Body Weight,Lee’s Index,and Different Parts of theFat Weight in Different Mice Groups

2.2 HIIT和MICT對小鼠肝細胞組織形態(tài)的影響

相比普通飼料飼養(yǎng)小鼠，高脂膳食飼養(yǎng)的HFD小鼠肝細胞出現(xiàn)了彌散性的脂肪小泡分布，并在某些位置出現(xiàn)了較大的脂滴空泡（箭頭所示）；MICT組與HFD類似；HIIT組肝細胞內脂肪小泡依然存在，但無論是脂肪小泡的密度或者較大脂滴空泡的數(shù)量（箭頭所示），都明顯低于HFD組和MICT組。HIIT可以更明顯的改善小鼠肝細胞脂肪侵潤程度。各組小鼠肝細胞HE染色組織形態(tài)見圖3。

2.3 HIIT和MICT對小鼠血脂的作用

TC、TG和HDL-C在3組間無顯著性差異；HIIT組LDLC顯著低于HFD與MICT組（P＜0.05），HFD與MICT之間無差異。說明12周HIIT訓練可以顯著降低小鼠血清LDL-C水平。各組小鼠血脂4項（總膽固醇TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白膽固醇HDL-C、低密度脂蛋白膽固醇LDL-C）12周訓練后血清濃度見圖4。

圖3 不同訓練組小鼠肝細胞形態(tài)Figure 3 Morphology of Liver Cells in Mice of Different Training Groups

圖4 不同訓練組小鼠血脂變化Figure 4 Blood Lipid Changes in Mice in Different Training Groups

2.4 HIIT和MICT對小鼠不同部位脂肪組織HSL蛋白表達與磷酸化的作用

協(xié)方差分析顯示，總攝食量對HSL蛋白表達無顯著的主體間效應，HFD、MICT和HIIT組之間，HSL表達也沒有顯著性差異。3組腹股溝脂肪ser563磷酸化沒有顯著差異，但HIIT的子宮周圍脂肪ser563磷酸化相比HFD和MICT顯著升高（P＜0.05）。3組間HSL-ser565磷酸化水平?jīng)]有顯著性差異。MICT組腹股溝脂肪ser660磷酸化顯著高于HFD與HIIT組（P＜0.05），MICT組子宮周圍脂肪ser660顯著高于HFD組，有高于HIIT組的趨勢，但不著性（P=0.102）。說明HIIT可以激活內臟脂肪HSL-ser563磷酸化位點，MICT相比HIIT能夠更明顯的促進HSL-ser660磷酸化。各組小鼠子宮周圍和腹股溝脂肪中，HSL蛋白表達與ser563、ser565、ser660磷酸化水平見圖5。

圖5 不同訓練組小鼠HSL蛋白表達和磷酸化水平Figure 5 HSL Protein Expression and Phosphorylation Levels in Different Training Groups

3 討論

3.1 HIIT比MICT更顯著減少內臟脂肪積累

近年來HIIT作為一種減肥訓練方案越來越受到人們的重視，相比MICT，其在具有同樣的安全性[11]的前提下，能夠節(jié)省更多的運動時間[14]。本團隊前期的研究[29]和國外的相關研究[15]都表明，在運動量相同的前提下，雖然HIIT和MICT在減少皮下脂肪量方面效果相似，但HIIT可以更多的減少內臟脂肪。已有Meta分析指出，能降低內臟脂肪含量的運動，存在著強度閾，而此閾值在45%～70%最大攝氧量之間[26]，高于閾值才能顯著性降低內臟脂肪。雖然MICT的訓練也高于強度閾，但為何在完成相同運動量時，更高強度的HIIT訓練能夠降低更多的內臟脂肪呢？目前比較合理的解釋是：內臟脂肪相比皮下脂肪由于具有更多的β腎上腺素能受體[3]，其對兒茶酚胺類的脂解激素的敏感性更高。兒茶酚胺是機體的應激激素，具有較強烈的脂解作用，可以通過cAMP-PKA通路激活脂肪細胞內多條脂肪分解途徑。研究顯示，當運動強度大于65%最大攝氧量時，兒茶酚胺的分泌量會隨著運動強度的增加而顯著增加[31]。HIIT由于極高的運動強度，可以促使機體釋放更多的兒茶酚胺類激素，所以對內臟脂肪的減少效果更明顯。

本研究用高脂膳食飼養(yǎng)建立肥胖小鼠模型，并分別給予小鼠相同運動量（奔跑距離）的MICT和HIIT訓練，在訓練12周后發(fā)現(xiàn)，兩種運動訓練都能有效降低小鼠體重，相比MICT，HIIT能夠明顯的降低小鼠內臟脂肪，HIIT有比MICT降低更多皮下脂肪的趨勢，但不顯著。說明強度更高的HIIT方案對內臟脂肪的減少效果更高。由于內臟脂肪與2型糖尿病、脂肪肝、高血壓等疾病密切相關，所以，相同運動量的HIIT相比MICT訓練雖然在降低體重方面沒有顯著優(yōu)勢，但可能在更加節(jié)省運動時間的基礎上，能夠更好地減少內臟脂肪，改善相關的代謝性疾病。

3.2 HIIT對肝細胞形態(tài)作用和血脂的改善作用更明顯

Verrijken通過對數(shù)百人進行肝功能各指標與內臟脂肪重量間的多元回歸分析顯示，內臟脂肪含量與丙氨酸轉氨酶和γ-谷氨酰轉移酶水平密切相關[25]，說明內臟脂肪堆積是誘發(fā)非酒精性脂肪肝的重要因素。2018年Nature上的一篇最新研究顯示，肝臟可以通過向血液中分泌DPP4，進而促進內臟脂肪的炎癥反應[7]。這些研究都說明，內臟脂肪與肝臟病變存在著重要的聯(lián)系。本研究顯示，高脂膳食飼養(yǎng)的HFD組肝細胞出現(xiàn)了明顯的脂肪病變，而MICT雖然能夠減少皮下脂肪含量，但并不能緩解肝臟脂肪病變，而HIIT小鼠雖然肝細胞內也存在脂肪病變，但脂滴大小和數(shù)量都較MICT少，說明HIIT在能夠更顯著的減少內臟脂肪的同時，對于緩解肝臟脂肪病變也具有一定的作用。

肥胖常常伴隨著以血脂異常為標志的脂代謝紊亂。運動對血脂異常的改善作用，與運動的強度、時間、方式等要素密切相關。目前，HIIT血脂的作用效果研究普遍顯示，高強度運動可以顯著降低LDL水平，但不同的運動方案對HDL的作用效果還存在爭議。Senthilnathan的研究顯示，HIIT可以提高成年男性HDL-C，降低LDL-C水平[22]，Taravati的研究卻發(fā)現(xiàn)，HIIT可降低肥胖女性TG、LDL和極低密度脂蛋白（VLDL）水平，但對HDL沒有顯著影響[24]。有趣的是，Wilson的研究發(fā)現(xiàn)，12周HIIT訓練可降低肥胖雌雄小鼠LDL水平，提高雌性小鼠HDL，但對雄性小鼠的HDL和TG沒有作用[28]。這些研究顯示，HIIT對降低LDL水平具有較為確定的效果，但是否能夠改善HDL、TG和TC水平，可能與訓練方案和實驗對象的性別有關。本研究顯示，經(jīng)過12周相同運動量的MICT和HIIT訓練，小鼠血清TC、TG、HDL-C水平?jīng)]有顯著區(qū)別，但HIIT相較MICT能夠更明顯的降低LDL-C水平。由于LDL也是引發(fā)心血管疾病的獨立危險因素，所以HIIT相較MICT，對于改善機體血脂異常以及預防與肥胖相關的心血管疾病具有更明顯的作用。

3.3 HIIT對內臟脂肪HSL的磷酸化的特異性激活

脂肪在體內的分解首先要經(jīng)歷將脂滴內的三酰甘油水解為甘油和游離脂肪酸的“脂肪動員”階段，之后分解的甘油分子和游離脂肪酸才能逐步氧化分解。其分解過程分為3個階段：首先甘油三酯被脂肪甘油三脂水解酶（AadiposeTriglyceride Lipase，ATGL）水解，生成二腺甘油和1分子游離脂肪酸；之后二腺甘油被HSL分解為單腺甘油和1分子游離脂肪酸；最后，單腺甘油由單腺甘油脂肪酶（Monoacylglycerol Lipase，MAGL）徹底分解為甘油和游離脂肪酸[12]。其中，ATGL和HSL被認為是脂肪水解過程中的關鍵限速酶。ATGL本身具備ser404和ser42兩個磷酸化位點，可被兒茶酚胺激活的cAMP-PKA通路磷酸化，但是其位點磷酸化后會產生何種功能變化目前尚不清楚。ATGL活性的調節(jié)主要途徑是兒茶酚胺激活PKA后，磷酸化脂肪細胞內的脂滴結合蛋白（Perilinpin），進而釋放比較基因識別物-58（Comparative gene identification-58，CGI-58），進而激活ATGL活性。但ATGL的激活并非意味著機體脂肪含量的降低。雖然有研究表明，長期運動可以刺激正常體重大鼠的ATGL高表達和ATGL與CGI-58的結合[17]，但也有研究顯示，1次運動不能激活健康男性ATGL基因表達，禁食則能夠顯著提高其mRNA表達[16]。而在對高脂膳食飼養(yǎng)誘導的肥胖大鼠的研究中，Mandeep發(fā)現(xiàn)，肥胖大鼠ATGL表達顯著高于普通大鼠[6]。Renate的研究顯示，脂肪組織特異性敲除ATGL后的小鼠，進食普通飼料時，體重相比野生型小鼠高，然而在高脂膳食飼養(yǎng)后，其體重較高脂膳食飼養(yǎng)的野生型小鼠體重顯著降低[21]，這是由于ATGL敲除影響了小鼠的進食量和PPARs信號而造成的。這些研究提示，普通飼料飼養(yǎng)的正常體重小鼠，ATGL的高表達可促進脂肪水解，降低體重；而對于高脂膳食飼養(yǎng)的肥胖小鼠，ATGL升高只是對過量甘油三脂堆積的代償，并不能減輕脂肪重量和體重。故本研究將重點關注HIIT是否能夠通過兒茶酚胺和cAMP-PKA通路激活HSL途徑，而非ATGL途徑，進而達到促進脂解的效果。

目前已知HSL可被脂解類激素（如兒茶酚胺、生長激素、鈉尿肽等）激活cAMP-PKA通路，磷酸化ser563和ser660，加速甘油三酯分解。AMPK則可通過磷酸化ser565，抑制HSL的水解能力。Andrea的研究顯示，大鼠在應激狀態(tài)下，兒茶酚胺誘導脂肪細胞HSL-ser660磷酸化是具有部位差異性的：腸系膜脂肪細胞在兒茶酚胺的誘導下出現(xiàn)了ser660磷酸化的增加，并伴隨著脂肪重量降低，而附睪脂肪并沒有出現(xiàn)顯著的磷酸化和脂肪重量降低[23]。這提示，脂解激素誘導的HSL脂肪水解酶活性升高，是具有部位的特異性的。Silvia在使用去甲腎上腺素（Norepinephrine，NE）和cAMP激動劑誘導肥胖女性人群皮下脂肪HSL磷酸化的研究中發(fā)現(xiàn)，安靜狀態(tài)下皮下脂肪的脂解水平與和HSL-ser552（對應鼠的ser563）磷酸化相關，而NE和cAMP激動劑的作用主要通過抑制AMPK活性，繼而解除對ser554（對應鼠的ser565）的磷酸化來提升脂肪水解水平，ser563磷酸化程度與皮下脂肪細胞NE介導的脂解無相關性[13]。這提示，激素激活皮下脂肪水解主要是依靠抑制ser565，而非激活ser563磷酸化完成的。Mandeep的研究[8]顯示，高脂膳食飼養(yǎng)的肥胖小鼠，其內臟脂肪細胞在兒茶酚胺或cAMP激動劑的誘導下，可以出現(xiàn)ser563和ser660磷酸化的增加，且其甘油三酯水解能力也獲得了提高，而皮下脂肪雖然經(jīng)過了相同濃度的兒茶酚胺或cAMP激動劑誘導，ser563和ser660未出現(xiàn)磷酸化，脂解水平雖也有提高，但較內臟脂肪細胞提高幅度低。上面兩個研究表明，皮下脂肪和內臟脂肪的HSL雖然都能被激素通過cAMP-PKA激活，但具體的機制和磷酸化位點不同。

本研究對高脂膳食飼養(yǎng)造成的肥胖小鼠進行12周跑臺訓練，發(fā)現(xiàn)HIIT和MICT對降低小鼠皮下脂肪的效果相似，但HIIT能夠更明顯的減少內臟脂肪積累。12周HIIT訓練可以促使安靜狀態(tài)下內臟脂肪HSL-ser563磷酸化的升高，而MICT并不能顯著提高ser563磷酸化水平，提示HIIT對內臟脂肪減少更顯著，與內臟組織HSL-ser563磷酸化特異性升高有關。

MICT在減少內臟脂肪的效果方面不如HIIT明顯，在減少皮下脂肪的效果方面效果與HIIT類似。MICT不能顯著升高ser563，但能明顯升高皮下和內臟脂肪ser660磷酸化。Matthew的研究可對這個結果做出一定的解釋：當對離體脂肪細胞只加入兒茶酚胺后，ser563和ser660磷酸化升高，但如果在加入兒茶酚胺30min后，又加入AMPK激動劑AICRA，則ser563原本應該出現(xiàn)的磷酸化現(xiàn)象會被抑制，而Ser660則不受AMPK影響，無論是否加入AIACR，兒茶酚胺都能引起其磷酸化程度的增加[27]。這提示，MICT可能激活了AMPK途徑，進而抑制了ser563的磷酸化，由于ser660的磷酸化不受AMPK的抑制，所以出現(xiàn)了MICT組ser563不升高，但ser660升高的現(xiàn)象。

眾所周知，AMPK是細胞的能量感受器，cAMP-PKA途徑則是細胞的應激感受器。HIIT可造成機體較大的應激，分泌大量脂解激素和細胞因子，由于內臟脂肪對這些信號的敏感性更高，所以HIIT可特異性提高內臟脂肪ser563的磷酸化水平，進而促進其水解。MICT由于長時間中等強度的運動，對機體能量代謝狀態(tài)的影響更高，可能產生激活AMPK途徑抑制ser563的現(xiàn)象，此時即使皮下和內臟脂肪ser660都在較高水平，但其特異性促進內臟脂肪水解的效果仍低于HIIT。不同強度的訓練減少內臟脂肪積累的效果并不相同，可能正是由于MICT與HIIT對脂肪細胞內不同信號通路的激活造成的。當然，AMPK和PKA的上下游調控過程是極其復雜的，不同的運動強度，如何通過不同的信號，協(xié)調HSL磷酸化位點的相互抑制？相對于MICT，HIIT小鼠內臟脂肪HSL-ser563的特異性升高，究竟是由于HIIT能更強的促進HSL磷酸化，亦或是由于MICT運動伴隨著AMPK激活，進而抑制了ser563的磷酸化，相關深入的細胞信號變化，需要更加深入的研究進一步闡明。

4 結論

HIIT訓練能明顯緩解肝臟脂肪病變、改善血脂，提高機體健康水平。在完成同樣的運動量時，HIIT能更明顯的減少內臟脂肪積累，這與HIIT訓練時，內臟脂肪組織的HSL-ser563磷酸化特異性升高，進而促進內臟脂肪水解密切相關。MICT對HSL激活的途徑與HIIT不同，可同時提高皮下與內臟脂肪的HSL-ser660磷酸化，但不能特異性促進內臟脂肪水解，減少內臟脂肪積累的效果低于HIIT。

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