正交實驗法優(yōu)選益腎滌濁丸的制備工藝

彭愛娜 田素英 陳震堯

【摘 要】 目的：優(yōu)選益腎滌濁丸的最佳制備工藝。方法：以溶散時限、小檗堿含量為考察指標(biāo)，以清膏相對密度、起模的粉水比例、干燥溫度、干燥時間為主要影響因素，采用L9（34）正交實驗法優(yōu)選制備工藝。結(jié)果：優(yōu)選的最佳制備工藝為清膏相對密度1.15（20℃），起模的粉水比例1∶1，干燥溫度80℃，干燥時間8h。結(jié)論：該制備工藝科學(xué)合理，建立的定量方法較簡便、靈敏、重現(xiàn)性好。

【關(guān)鍵詞】 益腎滌濁丸；制備工藝；正交實驗法

【中圖分類號】R284 【文獻標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2018）10-0014-04

Abstract：Objective To optimize the best preparation process of Yishendizhuo pills.Methods The dissolution time and the berberine content were used as the index， determine the relative density of the cream， the proportion of powder from the mold， drying temperature， drying time were main influence factors， the L9（34） orthogonal experiment was used to optimize the best preparation process.Results The optimal preparation process of Yishendizhuo Pills was that the relative density of the cream was 1.15（20℃）， the ratio of powder to water was 1∶1， the drying temperature was 80℃，the drying time was 8h.Conclusion The preparation process is scientific and reasonable， the quantitative method established is simpler， more sensitive and reproducible.

Keywords：Yishendizhuo Pills； Preparation Process； Orthogonal Experiment

益腎滌濁丸是廣東省名老中醫(yī)梁宏正臨證多年的經(jīng)驗方，具有清熱解毒、通癃滌濁、祛瘀止痛、益腎補虛，主治急、慢性前列腺炎、性功能障礙等癥，在廣東省肇慶市中醫(yī)院臨床應(yīng)用多年，療效良好。方中黃柏有較好的清熱燥濕瀉火作用，《醫(yī)學(xué)啟源》引用《主治秘訣》云：“瀉膀胱龍火，利結(jié)小便，下焦?jié)衲[，臍中痛，補腎水不足”[1]。其主要有效成分為小檗堿，小檗堿有較好的抗菌、抗炎等藥理作用。丸劑的溶散時限已作為評價丸劑內(nèi)在品質(zhì)的重要手段之一，是對丸劑特有的檢查項目。因此本實驗以小檗堿含量和溶散時限為考察指標(biāo)，用L9（34）正交試驗法[2]優(yōu)化益腎滌濁丸的制備工藝，可以較為全面的衡量工藝的合理性，得到療效穩(wěn)定、質(zhì)量可控的制劑。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀（美國，Waters），GZX-9246MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；B-220恒溫水浴鍋（上海亞榮生化儀器廠）；BS-6G智能崩解試驗儀（上海優(yōu)浦科學(xué)儀器有限公司）；HWS26電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科技有限公司）；BY-800型調(diào)速糖衣鍋（長沙湘勁機械）；UV1000紫外可見分光光度計（上海天美科學(xué)儀器有限公司）；CP225D萬分之一天平（德國Sartorus公司）。

1.2 材料 鹽酸小檗堿對照品（批號：100080-201409，中國食品藥品檢定研究院）；磷酸二氫鉀（AR，天津市福晨化學(xué)試劑廠）；乙腈（色譜純，天津市百世化工有限公司）；超純水（屈臣氏）。所用藥材經(jīng)廣東藥科大學(xué)田素英副教授鑒定均符合2015版中國藥典標(biāo)準(zhǔn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 制丸和溶散時限的測定 將黃柏、苦參、虎杖、黃芪、淫羊藿、菟絲子6味藥加8倍水（浸泡10min）回流2次，每次1h，濾過，合并濾液并濃縮成相對密度為1.15～1.20（20℃）的清膏[3]，備用；粉萆薢等中藥粉碎過100目篩的藥粉，備用。用調(diào)速糖衣鍋噴灑少量水進行起模，加大成型時噴灑黏合劑，將丸粒制成黃豆粒大小，進行整粒，蓋面，干燥即得[4]。按照2015年版《中國藥典》（一部）丸劑溶散時限方法測定[5]。

2.2 鹽酸小檗堿含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：乙腈∶0.1mol/L 磷酸二氫鉀水溶液（30∶[KG-*2]70），流速1.0 mL/min，波長345 nm，柱溫：室溫，進樣量 20μL。

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 對照品溶液 精密稱取鹽酸小檗堿對照品2.44 mg，用上述流動相溶解并定容至50 mL，得濃度為0.0488 mg/mL的溶液，用0.45 μm微孔濾膜過濾備用。

2.2.2.2 供試品溶液 按處方量等比例縮減后稱取每份約為2.0g，加8倍量的蒸餾水，浸泡60 min，加熱回流1.0h，提取3次，將提取的藥液濃縮并定容成50 mL。經(jīng)純化后精密量取5 mL用上述流動相定容成25 mL，充分搖勻后4000 r/min離心30 min，用0.45 μm微孔濾膜過濾備用。

2.2.2.3 陰性對照溶液 取處方中去黃柏的其他藥材，按供試品溶液制備方法制成缺黃柏的陰性樣品。

2.2.3 方法學(xué)考察

2.2.3.1 系統(tǒng)適用性實驗 分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進樣分析，理論塔板數(shù)不低于4000。色譜峰與相鄰峰之間分離度大于1.5（如圖1所示）。

2.2.3.2 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密吸取對照品溶液1、2、4、6、8 mL，分別置于10mL容量瓶中，加流動相稀釋到刻度，在“2.2.1”項下方法分別測定，以對照品濃度（X）為橫坐標(biāo)，相應(yīng)對照品峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為y=64389723.27x+218364.62，r=0.9993，結(jié)果表明鹽酸小檗堿含量在4.88～39.04μg的范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.2.3.3 精密度試驗 精密取對照品溶液各20μL，按“2.2.1”項下方法重復(fù)進樣 6 次，計算鹽酸小檗堿的色譜峰面積。RSD為1.02%，表明本儀器精密度良好。

2.2.3.4 重復(fù)性試驗 精密稱取處方中藥材粉末共 6 份，各2 g，按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法制備6份溶液，各取20μL，在“2.2.1”項下方法測定鹽酸小檗堿的色譜峰面積。計算RSD為1.60%，表明此方法重現(xiàn)性良好。

2.2.3.5 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24h，在“2.2.1”項下方法測定鹽酸小檗堿色譜峰面積。計算RSD為2.58%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.3.6 加樣回收試驗 精密稱取已知含量（11.7136 mg/g）供試品共 6 份，各1 g，按“2.2.2”項下方法制備供試溶液，再分別精密加入鹽酸小檗堿對照品適量，適當(dāng)稀釋后按“2.2.1”項下條件測定峰面積，計算加樣回收率[6-7]。平均回收率為99.45%，RSD為1.28%。結(jié)果見表1。

2.3 正交試驗優(yōu)選工藝 根據(jù)單因素實驗結(jié)果分析得出清膏相對密度、起模的粉水比例、干燥溫度、干燥時間對溶散時限、小檗堿含量的影響更為顯著，故選擇這4個因素做正交試驗，以溶散時限、小檗堿含量為評價指標(biāo)，按照L9（34）表進行正交實驗[8-9]，并按0.6∶0.4的權(quán)重系數(shù)對這 2個指標(biāo)進行綜合評分。結(jié)果見表2、3、4。

由表3的結(jié)果可知，各考察因素對益腎滌濁丸制備工藝影響依次為：干燥時間>相對密度>干燥溫度>粉水比例，且干燥時間對工藝影響較大。從表4看出各因素影響不顯著（P>0.05）。從K值可知通過正交實驗優(yōu)選的益腎滌濁丸制備工藝的最優(yōu)水平搭配為A3B2C1D1，即干燥溫度為80℃，清膏相對密度為1.15，起模的粉水比例為1∶1，干燥時間為8h。

2.4 驗證實驗 按實驗所確定益腎滌濁丸的最優(yōu)制備工藝為干燥溫度為80℃，清膏相對密度為1.15，起模的粉水比例為1∶1，干燥時間8h的條件下進行驗證試驗，結(jié)果測溶散時限均符合2015版中國藥典規(guī)定，均在1h內(nèi)溶散，水丸光滑圓整，色澤鮮亮，大小均一，鹽酸小檗堿含量（mg·g-1）分別為11.8925、11.2398、12.0078，平均為11.7134，RSD為1.54%。

3 討論

泛丸的制備工序主要為粉碎、起模、成型、蓋面、干燥[10]。益腎滌濁丸的原制備工藝也是用此工序，制備的成品符合中國藥典中有關(guān)丸劑的規(guī)定，但沒有進行最佳工藝優(yōu)選研究，本次實驗用正交實驗篩選最佳工藝，以期得到高效實用的制備工藝。實驗以溶散時限為考察指標(biāo)[11-12]，溶散時限是丸劑檢查的必要項目，合理的溶散時限既能保證丸劑的穩(wěn)定性，又能保證丸劑的吸收利用度。本次的實驗結(jié)果表明本次所制水丸的溶散時限全部符合規(guī)定。

從組方中可知小檗堿是其主要有效成分之一，其中黃柏中的小檗堿有抗病原微生物、抗炎、抗腫瘤、抗過敏、免疫調(diào)節(jié)、抗心律失常等藥理作用。因此本實驗同時以小檗堿含量為考察指標(biāo)。由驗證實驗可看出該工藝所得的小檗堿含量也較高。實驗結(jié)果表明益腎滌濁丸制備工藝的最優(yōu)水平搭配為A3B2C1D1，即粉水比例為1∶1，相對密度為1.15，干燥溫度為80℃，干燥時間8h。且各考察因素對益腎滌濁丸制備工藝影響依次為：干燥時間>相對密度>干燥溫度>粉水比例。干燥時間與相對密度對工藝影響較大，二者有無相關(guān)性有待進一步研究。

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（收稿日期：2018-03-14 編輯：陶希睿）