不同修復(fù)劑對(duì)二氯喹啉酸致害煙株及其土壤微生物和酶活性的影響

周小會(huì) 舒然 黃化剛 代園鳳 楊森 龍友華 劉文濤 尹顯慧

摘要：【目的】探討不同修復(fù)劑對(duì)二氯喹啉酸致害煙株的修復(fù)效果及其對(duì)土壤微生物數(shù)量和酶活性的影響，為預(yù)防和修復(fù)二氯喹啉酸污染土壤及其致害煙株提供參考?！痉椒ā恳栽茻?7為試驗(yàn)材料，采用盆栽試驗(yàn)，探究不同濃度二氯喹啉酸土壤殘留對(duì)植煙土壤真菌、細(xì)菌和放線菌數(shù)量的影響;模擬植煙土壤二氯喹啉酸殘留濃度0.200 mg/kg進(jìn)行致害煙株修復(fù)試驗(yàn)，待煙株出現(xiàn)典型藥害癥狀后，施入不同修復(fù)劑或組合配方，測(cè)定不同處理煙草農(nóng)藝性狀及其根際土壤微生物數(shù)量和酶活性。【結(jié)果】二氯喹啉酸土壤殘留對(duì)煙草根際土壤微生物數(shù)量有明顯影響，煙苗移栽15 d—30 d—45 d—60 d后，細(xì)菌數(shù)量主要呈抑制—激活—抑制—激活的態(tài)勢(shì)，真菌數(shù)量主要呈抑制—激活—激活—激活的態(tài)勢(shì)，放線菌數(shù)量主要呈抑制—抑制—激活—抑制的態(tài)勢(shì);不同修復(fù)劑處理中以T2（0.135%赤霉酸+0.0031%云苔素內(nèi)酯+格芙）處理對(duì)二氯喹啉酸致害煙株的修復(fù)效果最佳，對(duì)煙株株高、葉長(zhǎng)、葉寬和莖圍的抑制率最低，分別為9.40%、8.86%、1.71%和7.19%;與藥劑對(duì)照處理（CK2）相比，不同修復(fù)劑對(duì)土壤中微生物數(shù)量和酶活性有較好的改善作用，其中T2處理可顯著增加二氯喹啉酸殘留土壤中的細(xì)菌數(shù)量（P<0.05，下同），并顯著增加致害煙株根際土壤脲酶、過氧化氫酶和蔗糖酶活性?！窘Y(jié)論】0.135%赤霉酸+0.0031%云苔素內(nèi)酯葉面噴施+格芙200倍液灌根可增加二氯喹啉酸致害煙株根際土壤的微生物數(shù)量，提高土壤酶活性，對(duì)二氯喹啉酸致害煙株有較好的修復(fù)效果。

關(guān)鍵詞： 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑：二氯喹啉酸;煙草;土壤微生物;土壤酶活性;修復(fù)

中圖分類號(hào)： S572? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2018）11-2210-08

Effects of different remediate agents on tobacco plants caused phytotoxicity by quinclorac and its soil microorganisms and enzyme activities

ZHOU Xiao-hui1， SHU Ran1， HUANG Hua-gang2， DAI Yuan-feng2， YANG Sen1，

LONG You-hua1， LIU Wen-tao1， YIN Xian-hui1*

（1Institute of Crop Protection，Guizhou University， Guiyang? 550025， China; 2Bijie Branch， Guizhou Tobacco

Company， Bijie， Guizhou? 551700， China）

Abstract：【Objective】The remediation effects of different remediate agents on tobacco plants which were caused phytotoxicity by quinclorac and the effects on soil microorganisms and enzyme activities were explored in order to provide scien-tific reference for preventing and remediating soil and tobacco plants which were contaminated and caused phytotoxicity byquinclorac. 【Method】Yunyan 87 tobacco was used as tested material in pot experiments to investigate the effects of different concentrations of quinclorac residues in soil on the quantity of fungi， bacteria and actinomycetes in tobacco-growing soil. The repairing test on tobacco plants which were caused phytotoxicity was conducted and the simulated concentration of quinclorac residues in tobacco-growing soil was 0.200 mg/kg. After the typical symptoms of phytotoxicity occurred in tobacco plants， different remediate agents and combination formulas were used to determine the agronomic traits of tobacco plants and the quantity of microorganisms and enzyme activities in rhizosphere soil of tobacco plants in different treatments. 【Result】The quinclorac residuesin soil had relativelygreat effects on the quantity of microorganisms in rhizosphere soil of tobacco plants. After 15 d-30 d-45 d-60 d of tobacco seedling transplanting， the quantity of bacteria mainly exhibited a state of inhibition-activation-inhibition-activation， the quantity of fungi showed a state of inhibition-activation-activation-activation， and the quantity of actinomycetes exhibited a state of inhibition-inhibition-activation-inhibition.Among different remediate agents treatment，T2 treatment（0.135% gibberellic acid+0.0031% brassinolide+Gefu）had the best remediation effect on tobacco plants which were caused phytotoxicity by quinclorac.Under T2 treatment， inhibition rate of the plant height， leaf length， leaf width and stem girth of tobacco plants were the lowest and were 9.40%， 8.86%，1.71% and 7.19% respectively.Compared with agent control treatment（CK2）， different remediate agents all had ameliorative effects on the quantity of soil microorganisms and enzyme activities. Among them， T2 treatment had significantly（P<0.05， the same below）increased the quantity of bacteriain soil with quinclorac residues， and it also significantly increased the urease， catalase and sucrase enzyme activities in rhizosphere soil of tobacco plants which were caused phytotoxicity.【Conclusion】Foliage spray（0.135% gibberellic acid+0.0031% brassinolide） +root-irrigation of 200 times Gefu can increase the quantity of microorganisms in the rhizosphere soilof tobaccoplants which were caused phytotoxicity by quinclorac，and improve soil enzymes activities. Sofoliage spray（0.135% gibberellic acid + 0.0031% brassinolide）+root-irrigation of 200 times Gefu has fine remediation effect on tobacco plants which are caused phytotoxicity by quinclorac.

Key words： plant growth regulator; quinclorac; tobacco; soil microorganisms; soil enzyme activity; remediation

0 引言

【研究意義】二氯喹啉酸（Quinlorac）是20世紀(jì)80年代德國(guó)BASF公司開發(fā)的一種激素型喹啉酸類除草劑，對(duì)水稻田稗草有特效，具有用量少、持效期長(zhǎng)、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)（Grossmann，2010），因而備受農(nóng)戶青睞。但二氯喹啉酸在土壤中自然降解十分緩慢（孫揚(yáng)等，2017），半衰期長(zhǎng)（張倩等，2013a），且不易被吸附而容易造成環(huán)境污染（王靜等，2007;Chahil et al.，2011）。近年來(lái)，隨著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展，土地耕作制度也逐漸發(fā)生改變，烤煙與稻、玉米和高粱輪作模式在許多地區(qū)推廣（何京亮等，2016;楊晶等，2016），但因前茬作物使用二氯喹啉酸不當(dāng)而導(dǎo)致后茬煙草產(chǎn)生藥害的現(xiàn)象頻繁發(fā)生（李儒海和褚世海，2013），嚴(yán)重影響煙葉的質(zhì)量和產(chǎn)量（王靜等，2007），給煙農(nóng)帶來(lái)了較大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，研究二氯喹啉酸對(duì)煙草根際微生物的影響，篩選出二氯喹啉酸致煙株藥害的有效修復(fù)劑或組合配方，初步從微生物特性方向摸清不同修復(fù)劑對(duì)二氯喹啉酸污染土壤及其致害煙株的修復(fù)機(jī)理，對(duì)煙草除草劑藥害的預(yù)防和修復(fù)具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】前人針對(duì)二氯喹啉酸致害煙株的修復(fù)已進(jìn)行了大量研究。陳澤鵬等（2007）研究發(fā)現(xiàn)，生石灰和活性炭對(duì)二氯喹啉酸致煙草畸形生長(zhǎng)有很好的緩解作用。鄭雄志等（2013）通過盆栽和田間試驗(yàn)研究了幾種解毒劑對(duì)煙田二氯喹啉酸次生藥害的修復(fù)效果，發(fā)現(xiàn)使用赤霉酸（0.135%）+吲哚乙酸（0.0052%）+云苔素內(nèi)酯（0.0031%）能使二氯喹啉酸藥害煙株的葉寬、葉長(zhǎng)和株高均顯著高于藥劑對(duì)照，對(duì)致畸煙株有較好的緩解效果。劉華山等（2014）報(bào)道于二氯喹啉酸污染土壤中加入復(fù)合微生物菌劑可增加土壤微生物數(shù)量，促進(jìn)相關(guān)土壤酶活性的提高?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】生物法修復(fù)除草劑土壤殘留致煙草藥害具有綠色安全且無(wú)二次污染的優(yōu)點(diǎn)。目前，微生物菌劑與植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配施對(duì)二氯喹啉酸土壤殘留致煙株藥害及其污染土壤的修復(fù)效應(yīng)鮮有報(bào)道。【擬解決的關(guān)鍵問題】采用盆栽試驗(yàn)，研究不同修復(fù)劑或組合配方對(duì)二氯喹啉酸土壤殘留致煙株藥害的修復(fù)作用及其對(duì)煙草根際微生物數(shù)量和土壤酶活性的影響，篩選出對(duì)二氯喹啉酸致害煙株及土壤微生物數(shù)量有較好修復(fù)和改善效果的修復(fù)劑或組合配方，為不同輪作煙區(qū)預(yù)防和修復(fù)除草劑污染土壤及其致害煙株提供參考。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試煙草品種為云煙87，由貴州省畢節(jié)市煙草公司林泉煙草科技園惠贈(zèng);50%二氯喹啉酸可濕性粉劑為江蘇快達(dá)農(nóng)化股份有限公司產(chǎn)品;鋅硼肥為貴州畢節(jié)豐靈復(fù)肥有限公司產(chǎn)品;二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)品（99.07%，國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心）;臘狀芽孢桿菌（Bacillus cereus LY05）由貴州大學(xué)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全教研室提供;天達(dá)2116為山東天達(dá)生物股份有限公司產(chǎn)品;0.135%赤霉酸WP和0.0031%蕓苔素內(nèi)酯WP均為德國(guó)阿格福萊農(nóng)林環(huán)境生物技術(shù)股份有限公司產(chǎn)品;格芙微生物菌劑由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)土壤肥料專家崔正忠教授研制和提供;富必來(lái)微生物酶制劑由中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)潘燦平教授惠贈(zèng)。

細(xì)菌培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，含牛肉膏5.00 g/L、蛋白胨10.00 g/L、NaCl 5.00 g/L，用4 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至7.2～7.4;放線菌和真菌培養(yǎng)基分別用高氏一號(hào)培養(yǎng)基和孟加拉紅培養(yǎng)基，制備工藝參考張世敏等（2012）的方法。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 二氯喹啉酸對(duì)致害煙草根際土壤微生物數(shù)量的影響 試驗(yàn)于2017年4月在貴州大學(xué)南校區(qū)農(nóng)藥試驗(yàn)基地進(jìn)行。試驗(yàn)土壤采自貴陽(yáng)市花溪區(qū)，前茬為荒地，暴曬1個(gè)月后經(jīng)高效液相色譜法（HPLC）檢測(cè)無(wú)二氯喹啉酸殘留后使用。二氯喹啉酸土壤殘留濃度設(shè)9個(gè)處理，每處理稱取6 kg土壤裝于花盆中（寬×高=32.0 cm×20.9 cm），參照張倩等（2013b）的方法，分別向各處理已配好的藥液中加入300 mL水后緩慢均勻灌澆供試盆栽土壤，使土壤二氯喹啉酸殘留濃度分別為0（不施二氯喹啉酸，即清水對(duì)照）、0.001、0.005、0.010、0.050、0.100、0.200、0.500和1.000 mg/kg。每處理重復(fù)10次。1 d后選取長(zhǎng)勢(shì)基本一致的健壯煙苗進(jìn)行移栽，每盆1株。分別在煙苗移栽15、30、45和60 d后取樣測(cè)定土壤中的細(xì)菌、放線菌和真菌數(shù)量。

1. 2. 2 不同修復(fù)劑對(duì)二氯喹啉酸致害煙株及其根際土壤微生物特性的修復(fù)效果 參考楊森等（2018a）報(bào)道的植煙土壤二氯喹啉酸殘留濃度0.200 mg/kg對(duì)煙株有明顯影響，結(jié)合1.2.1的試驗(yàn)結(jié)果，本研究修復(fù)效應(yīng)試驗(yàn)在模擬土壤殘留二氯喹啉酸濃度0.200 mg/kg（廠家推薦常規(guī)用量的2倍）的環(huán)境下進(jìn)行，每盆裝土10 kg，1 d后每盆移栽1株長(zhǎng)勢(shì)基本一致的健康煙苗，每處理10次重復(fù);設(shè)8個(gè)處理（表1）。煙苗移栽后，觀察煙苗初步出現(xiàn)二氯喹啉酸典型藥害癥狀（煙葉新葉變厚且具有明顯毛絨狀、生長(zhǎng)點(diǎn)被抑制或葉片黃化）后，立即采用不同修復(fù)劑或組合配方對(duì)受害煙株進(jìn)行處理，隨后分別測(cè)定不同處理煙草根際土壤微生物數(shù)量（施藥后15和30 d）、土壤酶活性和煙草農(nóng)藝性狀（施藥后30 d）。水肥管理按當(dāng)?shù)靥镩g煙苗優(yōu)質(zhì)生產(chǎn)管理進(jìn)行。

1. 3 測(cè)定項(xiàng)目及方法

1. 3. 1 微生物數(shù)量測(cè)定 取盆栽煙株0～20 cm土層土壤，除去草根及石塊等雜物，采用平板稀釋培養(yǎng)法測(cè)定土壤中的微生物數(shù)量。細(xì)菌數(shù)量測(cè)定：稱取10 g土樣放入裝有90 mL無(wú)菌水的三角瓶中，振蕩1 h左右使微生物細(xì)胞分散，靜置20～30 s，然后逐級(jí)10倍稀釋至1×10-4 g/L，無(wú)菌條件下吸取100 mL的1×10-4 g/L稀釋液至細(xì)菌培養(yǎng)基中，用涂布器將稀釋液涂抹均勻，封口膜封口后放入37 ℃恒溫箱倒置培養(yǎng)24～48 h后計(jì)數(shù)，每處理3次重復(fù)。放線菌和真菌測(cè)定稀釋方法同上，放線菌取100 mL的1×10-3 g/L稀釋液接種至高氏一號(hào)培養(yǎng)基中，于28～30 ℃恒溫箱倒置培養(yǎng)96～120 h后計(jì)數(shù);真菌取100 mL的1×10-2 g/L稀釋液接種至孟加拉紅培養(yǎng)基中，于28 ℃恒溫箱倒置培養(yǎng)72～120 h后計(jì)數(shù)。

1. 3. 2 土壤酶活性測(cè)定 施入修復(fù)劑30 d后，各處理取0～20 cm土層土壤，風(fēng)干后過3 mm篩，各取30 g分別測(cè)定其土壤脲酶、蔗糖酶和過氧化氫酶活性。其中，土壤脲酶測(cè)定參考苯酚鈉—次氯酸鈉比色法，過氧化氫酶活性測(cè)定參考高錳酸鉀滴定法，土壤蔗糖酶活性測(cè)定參考3，5-二硝基水楊酸比色法（關(guān)松蔭，1986）。

1. 3. 3 煙草農(nóng)藝性狀測(cè)定 施用不同修復(fù)劑30 d后，測(cè)量各修復(fù)處理煙株株高、葉長(zhǎng)、葉寬（煙株至頂葉下第4片有效葉）、莖圍和葉片數(shù)，計(jì)算株高、葉長(zhǎng)、葉寬和莖圍抑制率。

1. 4 統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2010和DPS v7.05進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，利用Duncans新復(fù)極差法對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 不同濃度二氯喹啉酸對(duì)煙草根際土壤微生物數(shù)量的影響

2. 1. 1 對(duì)煙草根際土壤細(xì)菌數(shù)量的影響 由表2可知，不同濃度二氯喹啉酸對(duì)土壤中的細(xì)菌數(shù)量有一定影響。煙苗移栽15 d后，0.010～1.000 mg/kg二氯喹啉酸濃度處理的細(xì)菌數(shù)量受到明顯抑制，且與清水對(duì)照（CK）存在顯著差異（P<0.05，下同）;至移栽30 d后，除0.005 mg/hg處理外，其他二氯喹啉酸處理的細(xì)菌數(shù)量有一定增加趨勢(shì)，但0.200 mg/kg處理的細(xì)菌數(shù)量仍低于CK，較CK少67.67%;至移栽45 d后，各處理土壤細(xì)菌數(shù)量除0.050 mg/kg處理外均低于CK;至移栽60 d后，除高濃度（1.000 mg/kg）處理對(duì)植煙土壤細(xì)菌數(shù)量有明顯抑制作用外，其他處理的細(xì)菌數(shù)量均高于CK?？傮w來(lái)看，煙苗移栽15、30、45和60 d后，二氯喹啉酸土壤殘留對(duì)植煙土壤細(xì)菌數(shù)量的影響主要呈抑制—激活—抑制—激活的態(tài)勢(shì)。

2. 1. 2 對(duì)煙草根際土壤真菌數(shù)量的影響 由表3可知，煙苗移栽15 d后，不同濃度二氯喹啉酸處理的真菌數(shù)量均顯著少于CK，說(shuō)明二氯喹啉酸對(duì)土壤中真菌數(shù)量有明顯影響;移栽30 d后，除0.010和1.000 mg/kg處理外，其他濃度處理的真菌數(shù)量均少于CK;移栽45 d后，除高濃度（1.000 mg/kg）處理的真菌數(shù)量顯著高于CK外，其余濃度處理與CK差異不顯著（P>0.05，下同）;至移栽60 d后，不同濃度處理的真菌數(shù)量均高于CK，但差異不顯著。從二氯喹啉酸最高濃度（1.000 mg/kg）處理來(lái)看，煙苗移栽15、30、45和60 d后，土壤中的真菌數(shù)量呈抑制—激活—激活—激活的態(tài)勢(shì)。

2. 1. 3 對(duì)煙草根際土壤放線菌數(shù)量的影響 由表4可知，煙苗移栽15和30 d后，除移栽30 d時(shí)0.001 mg/kg二氯喹啉酸處理外，其余濃度處理植煙土壤中的放線菌數(shù)量均低于CK，其中移栽15 d后高濃度（0.500和1.000 mg/kg）處理未分離出放線菌，說(shuō)明二氯喹啉酸對(duì)植煙土壤放線菌有明顯影響;移栽45 d后，除0.100和0.500 mg/kg處理外，其余濃度處理的放線菌數(shù)量均高于CK;至移栽60 d后，除0.010 mg/kg處理外，其余濃度處理的放線菌數(shù)量均低于CK。可見，煙苗移栽15、30、45和60 d后，二氯喹啉酸土壤殘留對(duì)植煙土壤中的放線菌數(shù)量主要呈抑制—抑制—激活—抑制的態(tài)勢(shì)。

2. 2 不同修復(fù)劑對(duì)二氯喹啉酸致害煙株農(nóng)藝性狀的影響

由表5可知，二氯喹啉酸土壤殘留易導(dǎo)致煙株畸形生長(zhǎng)，施用修復(fù)劑30 d后，藥劑對(duì)照（CK2）處理的煙株株高、葉長(zhǎng)和葉寬均受到抑制，抑制率分別為30.76%、32.91%和42.73%，其中二氯喹啉酸土壤殘留對(duì)煙株葉寬抑制較明顯。經(jīng)不同修復(fù)劑處理30 d后，各處理中以T2處理的修復(fù)效果最佳，煙株的株高、葉長(zhǎng)、葉寬和莖圍的抑制率最低，分別為9.40%、8.86%、1.71%和7.19%，表明0.135%赤霉酸+0.0031%云苔素內(nèi)酯葉面噴施+格鞭200倍液灌根對(duì)二氯喹啉酸致害煙株具有良好的修復(fù)效果。

2. 3 不同修復(fù)劑對(duì)二氯喹啉酸致害煙株根際土壤微生物特性的影響

2. 3. 1 對(duì)土壤中微生物數(shù)量的影響 由表6可知，二氯喹啉酸土壤殘留對(duì)煙草根際土壤微生物數(shù)量有一定影響，而施入修復(fù)劑后對(duì)植煙土壤微生物數(shù)量及其多樣性有促進(jìn)和改善作用。施用修復(fù)劑15 d后，植煙土壤中真菌數(shù)量最多的為T3處理，較CK2增加了266.50%，差異達(dá)顯著水平;細(xì)菌數(shù)量最多的為T2處理，為68.67×104 CFU/g，其次為T3處理，二者差異不顯著。施用修復(fù)劑30 d后，植煙土壤真菌數(shù)量除T4處理增多外，其余處理均逐漸減少，其中以CK2的真菌數(shù)量最多，達(dá)1.50×102 CFU/g，說(shuō)明隨時(shí)間延長(zhǎng)二氯喹啉酸對(duì)土壤真菌繁殖起到刺激作用，以促其數(shù)量增加;植煙土壤細(xì)菌數(shù)量除T6處理、CK1和CK2外，其他處理均較修復(fù)15 d時(shí)減少;放線菌的數(shù)量較穩(wěn)定，變化不明顯。

2. 3. 2 不同修復(fù)劑對(duì)二氯喹啉酸致害煙株根際土壤酶活性的影響

2. 3. 2. 1 對(duì)脲酶活性的影響 如圖1所示，不同修復(fù)劑處理對(duì)二氯喹啉酸致害煙株根際土壤脲酶活性存在顯著影響。施入修復(fù)劑30 d后，各修復(fù)劑處理脲酶活性均顯著高于CK2，各處理脲酶活性排序?yàn)門3>T2>T5>T4>T1>T6>CK1>CK2，其中以T3處理的土壤脲酶活性最高，為0.3765 mg/g，顯著高于其他處理。

2. 3. 2. 2 對(duì)過氧化氫酶活性的影響 由圖3可知，不同修復(fù)劑處理對(duì)二氯喹啉酸致害煙株根際土壤過氧化氫酶活性存在一定影響，其中以T2處理的過氧化氫酶活性最高，顯著高于CK1、T6和CK2處理，與T1、T3、T4和T5處理差異不顯著?？梢?，除T6處理外，其余修復(fù)劑處理對(duì)二氯喹啉酸致害煙株根際土壤過氧化氫酶活性均有一定的促進(jìn)作用。

2. 3. 2. 3 對(duì)蔗糖酶活性的影響 由圖3可知，不同修復(fù)劑處理對(duì)二氯喹啉酸致害煙株根際土壤蔗糖酶活性存在一定影響，其中以T2處理的蔗糖酶活性最高，為14.6850 mg/g，顯著高于其他處理;T1、T3、T4和T5處理的蔗糖酶活性也顯著高于CK2，但T6與CK2處理差異不顯著。表明T2處理對(duì)二氯喹啉酸致害煙株根際土壤蔗糖酶活性具有顯著的促進(jìn)作用，T1、T3、T4和T5對(duì)二氯喹啉酸致害煙株根際土壤蔗糖酶活性也有一定的促進(jìn)作用。

3 討論

二氯喹啉酸對(duì)稻田稗草有較好的防除效果，且不易對(duì)當(dāng)茬作物產(chǎn)生藥害，備受農(nóng)戶喜愛，但由于在前茬作物防治雜草過程中不合理或不規(guī)范使用，易造成土壤除草劑殘留，常致后茬作物煙草產(chǎn)生藥害，因此修復(fù)二氯喹啉酸污染土壤及其致害煙株對(duì)煙草產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。目前，修復(fù)二氯喹啉酸污染土壤的方法有物理、化學(xué)和生物修復(fù)（滕春紅和蘇少泉，2006;楊森等，2017），其中生物修復(fù)對(duì)環(huán)境友好，不易產(chǎn)生二次污染，應(yīng)用更廣泛（黃國(guó)聯(lián)等，2014）。Gardner等（2011）研究認(rèn)為，土壤微生物多樣性與土壤酶活性存在密切關(guān)系，部分土壤酶活性能象征土壤肥力水平和受污染程度（Pascual et al.，2000;張麗莉等，2003;Kalam et al.，2004），土壤微生物數(shù)量也能反映土壤受農(nóng)藥污染程度，故二者均能作為評(píng)價(jià)土壤生態(tài)質(zhì)量的重要指標(biāo)（Kalam et al.，2004;陳澤鵬等，2007;張妤，2013）。

本研究結(jié)果表明，不同濃度二氯喹啉酸對(duì)煙草根際土壤微生物數(shù)量具有不同程度的影響，其中煙草移栽15、30、45和60 d后，二氯喹啉酸土壤殘留對(duì)植煙土壤細(xì)菌數(shù)量的影響隨時(shí)間延長(zhǎng)呈抑制—激活—抑制—激活的態(tài)勢(shì)，真菌數(shù)量呈抑制—激活—激活—激活的態(tài)勢(shì)，放線菌數(shù)量呈抑制—抑制—激活—抑制的態(tài)勢(shì)。可見，當(dāng)植煙土壤施入二氯喹啉酸后，短時(shí)間內(nèi)土壤中細(xì)菌、真菌和放線菌響應(yīng)較激烈，其數(shù)量迅速下降，均處于被抑制狀態(tài)，說(shuō)明二氯喹啉酸對(duì)土壤微生物數(shù)量及其多樣性具有明顯的負(fù)影響。隨時(shí)間的延長(zhǎng)，二氯喹啉酸土壤殘留對(duì)植煙土壤中不同微生物的影響不同（抑制或激活），可能是不同微生物間功能性差異所致。

張國(guó)賓等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，二氯喹啉酸對(duì)煙草具有明顯的致畸作用。本研究發(fā)現(xiàn)，二氯喹啉酸土壤殘留可致煙株葉片卷縮、葉片黃化、植株矮小等，施用修復(fù)劑30 d后，0.135%赤霉酸+0.0031%云苔素內(nèi)酯葉面噴施+格芙200倍液灌根處理對(duì)受害煙株有較好的修復(fù)效果，受害煙株的株高、葉長(zhǎng)、葉寬和莖圍抑制率最低，基本恢復(fù)到正常水平。

土壤中微生物數(shù)量和酶活性共同影響土壤物質(zhì)的轉(zhuǎn)化和養(yǎng)分循環(huán)，多數(shù)土壤酶也主要來(lái)源于微生物和植物根系分泌物，二者間存在一定的相關(guān)性（楊森等，2018b）。本研究結(jié)果表明，0.135%赤霉酸+0.0031%云苔素內(nèi)酯+格芙200倍液可顯著增加二氯喹啉酸污染植煙土壤細(xì)菌數(shù)量。土壤酶活性反映了土壤質(zhì)量及土壤養(yǎng)分轉(zhuǎn)化能力，其中過氧化氫酶與土壤有機(jī)質(zhì)含量有關(guān);蔗糖酶可水解蔗糖，反映了土壤有機(jī)碳的轉(zhuǎn)化能力;脲酶可水解氮素，影響土壤氮素代謝，其酶促產(chǎn)物是植物氮源之一（吳小虎等，2015）。鄭雄志等（2013）、劉華山等（2014）報(bào)道二氯喹啉酸污染土壤中加入復(fù)合菌劑能增加土壤微生物量，相關(guān)土壤酶活性也得到提高。本研究結(jié)果顯示，二氯喹啉酸污染土壤施入修復(fù)劑后，土壤中過氧化氫酶、脲酶和蔗糖酶活性較CK2增加，其中0.135%赤霉酸+0.0031%云苔素內(nèi)酯+格芙配方組合和單施格芙微生物菌劑處理的效果較好，與毛官杰等（2014）報(bào)道生物菌肥與菌劑混合使用可提高二氯喹啉酸脅迫下土壤中微生物量和酶活性的結(jié)果一致。

綜合來(lái)看，0.135%赤霉酸+0.0031%云苔素內(nèi)酯+格芙200倍液（T2）組合配方可改善二氯喹啉酸污染土壤的生物多樣性，對(duì)二氯喹啉酸污染土壤具有良好的修復(fù)作用，使致害煙株畸形生長(zhǎng)得到較好的修復(fù)。究其原因可能是赤霉酸和蕓苔素內(nèi)酯促進(jìn)了致害煙葉的細(xì)胞分化和生長(zhǎng)，增強(qiáng)了致害煙株的抗逆性，加上格芙微生物菌劑有效降解了二氯喹啉酸，為細(xì)菌提供良好的棲息地，致其數(shù)量顯著增加，隨后其與格芙微生物菌劑協(xié)同作用于二氯喹啉酸，加快了二氯喹啉酸的降解，而促進(jìn)污染土壤生態(tài)環(huán)境的恢復(fù)。本研究利用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和微生物菌劑的共同作用效果，拓展了對(duì)二氯喹啉酸污染土壤及其致害煙株的生物修復(fù)方法，但本研究?jī)H從煙草農(nóng)藝性狀、植煙土壤微生物數(shù)量和酶活性方面初步揭示不同修復(fù)劑對(duì)二氯喹啉酸污染土壤及其致害煙株的修復(fù)機(jī)制，至于修復(fù)劑對(duì)致害煙葉保護(hù)酶活性和煙葉超微結(jié)構(gòu)的影響、土壤酶活與土壤微生物間的相關(guān)性及其降解功能菌等方面均待進(jìn)一步探究。

4 結(jié)論

0.135%赤霉酸+0.0031%云苔素內(nèi)酯葉面噴施+格芙200倍液灌根可增加二氯喹啉酸致害煙株根際土壤的微生物數(shù)量，改善其微生物多樣性，提高土壤脲酶、過氧化氫酶和蔗糖酶活性，促進(jìn)致害煙株生長(zhǎng)，有效緩解二氯喹啉酸致害煙株的畸形癥狀。

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