淺談食品檢測中高效液相色譜法的應用

白琴

摘要：食品安全關乎人民生命安全，為了提升食品檢測的水平，就要有效、合理地應用高效液相色譜法。此種方式是通過分離分子量大以及沸點高的化合物進行檢測。本文主要對食品檢測中高效液相色譜法的應用進行了論述分析。

關鍵詞：食品檢測;高效液相色譜法;防腐劑

通過高效液相色譜法進行食品檢測是一種有效的技術手段。高效液相色譜法分為流動相以及固定相兩種，在一般狀況之下液體是流動相，多數(shù)的檢測樣品均為液體狀態(tài)。在食品中應用的防腐劑主要有苯甲酸、山梨酸、丙酸鈣、脫氫乙酸等，通過高效液相色譜的方式可以了解這些防腐劑的具體應用數(shù)量以及范圍是否符合國家標準要求。

一、高效液相色譜法概述分析

高效液相色譜檢測方式法也稱為“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”以及“高分離度液相色譜”等。隨著科技技術的不斷發(fā)展，快速檢測食品領域快速發(fā)展，高效液相色譜法更是得到充分利用。高效液相色譜法的基礎就是液相柱層析，后來在優(yōu)化創(chuàng)新中逐漸完善。相對于液相柱層析方式來說，高效液相色譜方式主要把顆粒直徑在5m-10m的高效層析柱作為主要的填充劑，在高壓輸液泵以及自動進樣器等儀器設備的配合下應用，此種技術手段在實踐中可以對多種試樣進行檢測分析，可以在根本上保持液相色譜的應用廣泛性，深受各個行業(yè)的認可。

二、材料與方法

儀器設備。安捷倫高效液相色譜儀、自動凝膠凈化儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、渦旋振蕩器、離心機等設備。

試劑與材料。主要有苯甲酸（ben-zoic acid，BA） 、山梨酸（sorbic acid，SA）、對羥基苯甲酸甲酯（methy1paraben，MP）、脫氫乙酸（DHA）、β-苯丙烯醛、對羥基苯甲酸異丙酯（尼泊金異丙酯，Isopropy1 paraben）、對羥基苯甲酸丙酯（尼泊金丙酯）、4-羥基苯甲酸異丁酯（IBP）、芐基4-羥基苯甲酸酯（BPB）、苯基苯（biphen-yl）、對羥基苯甲酸庚酯（Heptyl Paraben，HP）、對羥基苯甲酸乙酯（ethyl paraben，EP）等。

其中乙酸試劑、C₂H₃N試劑、C₆H₁₄試劑、甲醇試劑均為色譜純;水為Milli- Q超純水;而NaCl、H₃PO₄等均為分析純。

標準液配制主要就是應用0.05000g防腐劑標準品，再將乙醇定容到50mL，就會獲得1000mg/L單標儲備液，將標準液配置在0℃-4℃的溫度中存儲，重視避光處理。要基于防腐劑的具體響應狀態(tài)，合理地進行配置，科學配制不同分析物濃度不等的混標。

飽和NaCl（pH=2）：稱取400.0gNaCl放置在一升的燒杯中，再加入一升的水;超聲20分鐘，然后再將上清液放置在另一個一升的燒杯之中，利用磷酸調(diào)整酸堿度為2。

樣品前處理。對于液態(tài)樣品直接混合，對于非均勻的液態(tài)一半固態(tài)的樣品通過組織均漿機將樣品處理之后打碎，充分攪拌，保證混合的均勻性。對于一些奶酪等通過50℃60℃的溫度加熱熔融，攪拌。然后提取1.00g的樣品進行處理，將提取的樣品放置在50mL的離心管中，再添加5mL的飽和NaCl溶液，其PH為2。在上述操作完成之后，再進行渦旋振蕩1min。完成之后，把樣品放在飽和NaCl水溶液中，觀察樣品，在樣品充分分散的狀態(tài)之下，再添加10mL的C₆H₁₄以及C₂H₃N，將其振蕩15min。再通過1000r/min離心5min，將C₂H₃N層放置在10mL的離心管之中，將7mL的C₆H₁₄放在兩一個10mL的離心管之中，通過氮氣將C₆H₁₄吹干處理。然后，將7mL的環(huán)己烷一乙酸乙酯根據(jù)1：1v/v的比例進行處理，待充分溶解之后再進行GPC，對其進行凈化處理，然后在1625min內(nèi)收集流出物，在26-30min沖洗凝膠滲透色譜柱，將溫度在35℃狀態(tài)之下的液體進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)處理，待液體到快干的狀態(tài)之下，再通過5mL的C₂H₃N提取液對其進行溶液處理，待其充分溶解之后，利用0.22m濾膜對其處理控制，通過液相色譜對其進行分析^[1]。

超高效液相色譜條件。色譜柱：為Waters ACQUITY UPLCTMBEH C18柱（150mm×2.lmm，1.7 μm）。柱溫：為30'C，保證樣品室的溫度為4℃。在進樣中其體積為10μL。流動相A就是2mmol的乙酸銨水溶液，在實驗中通過乙酸進行處理，酸堿度為4.0。流動相B為C₂H₃N，其具體的流速為0.2mL/min。

在試驗中，通過采用梯度的洗脫方式進行處理，在0min-2 min的區(qū)間內(nèi)為20%B;而在2min-5min的區(qū)間中為20%B-40%B;在5min-10min的區(qū)間內(nèi)為40% B;在10min-12min的區(qū)間中為40%B-60%B;在12min-14min的區(qū)間內(nèi)為60%B;在14min-20min的區(qū)間內(nèi)為60%B-85%B;在20min-22min的區(qū)間內(nèi)為85%B;在20min-22.5min的區(qū)間內(nèi)為85%B-20%B;在22.5min-25min的區(qū)間內(nèi)為20%B。通過檢測獲得其波長為280nm。

三、實驗結(jié)果分析

優(yōu)化萃取溶劑。在試驗中發(fā)現(xiàn)多數(shù)的分析物在乙醇溶劑、C₂H₃N溶劑以及乙醚溶劑溶解性良好，其中苯甲酸以及山梨酸溶液具有微溶于水的特征。其中含有長鏈烴的苯基苯以及β-苯丙烯醛等物質(zhì)則在弱極性溶劑中溶解。在研究中為了去除水溶性以及油溶性的雜質(zhì)再進行對比分析，通過對比分析可以發(fā)現(xiàn)，在對C₆H₁₄—C₂H₃N液分配提取的過程中，出現(xiàn)了兩相間的分配狀況。而通過5mg/L的混合標準溶液配置，通過用酸堿度為2的5mL的飽和NaC₁溶液、SmLC₂H₃N，5mL C₆H₁₄、5mLC₂H₃N渦旋震蕩10min之后，再進行化合物含量測定分析，通過C₂H₃N-飽和NaCl溶液分配處理，產(chǎn)生的化合物在C₂H₃N相上分配，而C₂H₃N-C₆H₁₄溶液在分配的過程中，僅僅β-苯丙烯醛、苯基苯及對羥基苯甲酸庚酯的1/3數(shù)量在C₆H₁₄相中分配，而剩下化合物主要分配在C₂H₃N相上。

對此，在研究中通過飽和NaCl-C₂H₃N -C₆H₁₄三相液進行分配萃取，在除β-苯丙烯醛以及苯基苯、對羥基苯甲酸庚酯之外其他的化合物是可以將其萃取到C2H3N層之中的，而水溶性雜質(zhì)多數(shù)都保存在飽和NaCl層中，而C₆H₁₄層中主要是通過凝膠滲透色譜的方式凈化存在的油溶性雜質(zhì)，再對C₆H₁₄層以及C₂H₃N層中存在的分析物進行合并處理。

防腐劑的凝膠滲透色譜凈化。在萃取處理中，C₆H₁₄溶液進行液液萃取的過程中，萃取率相對較低。要想提升其整體的回收率，可以通過凝膠滲透色譜凈化的方式對C₆H₁₄提取液進行處理，這樣可以去除大分子的干擾物。

方法的線性實驗以及定量限。通過配制混合標準溶液處理，其具體的防腐劑質(zhì)量濃度數(shù)值為0.04mg/L-80.0mg/L。基于目標組分的峰面積Y以及對應的質(zhì)量濃度繪制標準曲線，相關系數(shù)（r）要高于0.99，這些防腐劑的分離狀態(tài)良好^[2]。

方法的準確度和精密度。對食品進行回收實驗分析，分別在線性范圍低、中以及高三種不同的添加水平中進行實驗分析。在每個添加水平中要對其進行測定分析，獲得目標分析物的回收率為63.4% - 99.5%，而其相對標準偏差（RSD）數(shù)值的范圍則在0.49% - 16.3%。

四、討論分析

在測定過程中，試劑的溫度、色譜柱的溫度以及室溫狀態(tài)下的保留時間均在不同程度上影響液相色譜的效果，在處理過程中，要保持室溫的溫度性，加強對試劑溫度的控制，這樣才可以提升實驗精準性。通過保溫項，設定穩(wěn)定合理的柱溫，保障溫度的恒定性，可以避免柱溫波動導致保留時間變動，無法對其進行精準定性。

在測定過程中流動相是直接影響因素，在實踐中要對其進行每天配置，如果無法每天配置要通過冷柜進行存儲，加強對酸堿度的控制，保障平穩(wěn)性。而在流動相中要保障有機溶劑以及緩沖鹽的比例，進而提升精準度。

參考文獻：

[1]楊獻珍.淺談食品檢測中高效液相色譜法的應用[J].食品安全導刊，2018（18）：83.

[2]盧瀟鯤.探討高效液相色譜法在食品檢測中的應用[J].食品安全導刊，2016（03）：86.