小枝玫瑰總黃酮提取工藝研究

劉寰宇， 王 瑩， 嚴(yán)文平， 劉 勇， 蘭 衛(wèi)

(新疆醫(yī)科大學(xué)1中醫(yī)學(xué)院， 烏魯木齊 830011; 2附屬中醫(yī)醫(yī)院， 烏魯木齊 830002; 3新疆鴻德堂永盛藥業(yè)有限公司， 烏魯木齊 830011)

小枝玫瑰為薔薇科植物玫瑰(RosarugosaThunb)中紫紅花重瓣玫瑰(R.rugosaf.plenaByhouwer)中的小枝玫瑰(BranchletRose)干燥花蕾，為中華人民共和國(guó)藥典收載品種[1]。 玫瑰具有抗心肌缺血[2]、抑菌[3]、調(diào)節(jié)血脂[4]、抗抑郁[5]等作用。小枝玫瑰具有芳香開(kāi)竅、安神止痛、軟腸通便、滋補(bǔ)腸胃、改善消化、驅(qū)風(fēng)消炎、潤(rùn)膚生輝功能[6]。主要含有木犀草素、槲皮素和沒(méi)食子酸等成分[7]。本研究以乙醇體積分?jǐn)?shù)、乙醇用量和提取時(shí)間為考察因素，以蘆丁為對(duì)照品，通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，最后確定小枝玫瑰總黃酮最佳提取工藝，為小枝玫瑰黃酮的質(zhì)量控制和工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器DHG-9240A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，UV2550型紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)，EYELA SB-1000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛(ài)朗儀器有限公司) ，UV-2550型紫外光譜儀(日本島津) ，AL 104型電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)，SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)。

1.2試劑蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：20160530)， 95%乙醇(天津富宇化工廠，批號(hào)：20160826)，硝酸鋁(天津富宇化工廠，批號(hào)：20151009)、氫氧化鈉(天津富宇化工廠，批號(hào)：20160415)、亞硝酸鈉(天津富宇化工廠，批號(hào)：20160823)，試劑均為分析純；蒸餾水為去離子水。

1.3藥材小枝玫瑰2017年3月購(gòu)買(mǎi)于新疆鴻德堂永盛藥業(yè)有限公司(批號(hào)：20161012)，經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中藥資源教研室主任盛萍教授鑒定為薔薇科植物玫瑰(RosarugosaThunb)中紫紅花重瓣玫瑰(R.rugosaf.plenaByhouwer)中的小枝玫瑰(branchlet rose)的干燥花蕾。

2 方法與結(jié)果

2.1對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品2.95 mg，用乙醇定容至25 mL容量瓶中，得到濃度為0.118 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2線性關(guān)系考察吸取“2.1”項(xiàng)下蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液1、2、3、4、5 mL，分別加入5%亞硝酸鈉0.3 mL，反應(yīng)6 min，加入10%硝酸鋁0.3 mL，反應(yīng)6 min，加入4%氫氧化鈉3 mL，充分搖勻，定容至10 mL容量瓶中反應(yīng)15 min，測(cè)定500 nm處吸光度。以濃度為縱坐標(biāo)(Y)，吸光度值為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=9.449 2X-0.005 1，r=0.999 3，蘆丁濃度在0.011 8～0.059 0 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3單因素試驗(yàn)

2.3.1 乙醇濃度對(duì)玫瑰總黃酮含量的影響 稱(chēng)取小枝玫瑰粉5份，每份1 g，溫度80℃ ，次數(shù)1次，料液比1∶12，時(shí)間60 min，加熱回流提取，提取溶劑分別為30%、40%、50%、70%、90%乙醇，測(cè)定500 nm處吸光度，吸光度(A) 分別為0.288、0.427、0.517、0.485、0.187，總黃酮含量分別為37.24、54.91、66.35、62.28、24.40 mg/g。選擇40%、50%、70%乙醇作為正交試驗(yàn)考察因素。

2.3.2 料液比對(duì)玫瑰總黃酮含量的影響 稱(chēng)取小枝玫瑰粉5份，每份1 g，溫度80℃，提取次數(shù)1次，乙醇濃度50%，時(shí)間60 min，加熱回流提取，料液比分別為1∶8、1∶12、1∶16、1∶20、1∶25，測(cè)定500 nm處吸光度，吸光度(A) 分別為0.480、0.517、0.361、0.347、0.293，總黃酮含量分別為51.37、66.35、70.86、74.57、78.91 mg/g。選擇料液比1∶8、1∶12、1∶16作為正交試驗(yàn)考察因素。

2.3.3 提取時(shí)間對(duì)玫瑰總黃酮含量的影響 稱(chēng)取小枝玫瑰粉5份，每份1 g，溫度80℃，提取次數(shù)1次，乙醇濃度50%，料液比1∶12，加熱回流提取，時(shí)間分別為30、60、90、120、150 min，測(cè)定500 nm處吸光度，吸光度(A) 分別為0.491、0.517、0.498、0.473、0.435，總黃酮含量分別為63.05、66.35、63.40、60.76、55.93 mg/g。選擇提取時(shí)間30、60、90 min作為正交試驗(yàn)考察因素。

2.4正交試驗(yàn)根據(jù)單因素預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果，選擇溶劑濃度(A)、料液比(B)、提取時(shí)間(D)3個(gè)因素，每個(gè)因素3個(gè)水平，以小枝玫瑰總黃酮提取量為指標(biāo)，采用L9(33)正交表做正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，見(jiàn)表1。稱(chēng)取小枝玫瑰27份，每份1 g，每種條件平行提取3份樣品，以小枝玫瑰總黃酮提取量為指標(biāo)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行極差分析，以確定最佳提取條件，正交試驗(yàn)安排及含量測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表2。方差分析結(jié)果表明，各因素對(duì)小枝玫瑰中總黃酮含量影響的順序是B>A>C，(即料液比>乙醇濃度>提取時(shí)間)。A、B因素與各因素之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05和P<0.01)，即乙醇濃度和料液比對(duì)小枝玫瑰中總黃酮的含量具有顯著性影響。C因素與各因素間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，即提取時(shí)間對(duì)小枝玫瑰中總黃酮的含量影響不顯著。最佳工藝為A2B3C1，即50%乙醇，料液比1∶16，提取30 min，見(jiàn)表3。

表1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表

2.5驗(yàn)證試驗(yàn)稱(chēng)取干燥小枝玫瑰花粉3份,每份1 g，按照提取工藝A2B3C1進(jìn)行提取，對(duì)正交試驗(yàn)優(yōu)選的條件進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn),得到小枝玫瑰總黃酮提取量分別為66.82、65.99、67.02 mg/g，平均值為66.61 mg/g，表明方法與正交試驗(yàn)結(jié)果基本相同。

表2 正交表及含量測(cè)定結(jié)果(n=27)

表3 方差分析結(jié)果

注：F1-0.05(2,2)=19.00，F(xiàn)1-0.01(2,2)=99.00。

3 討論

近年來(lái)，學(xué)者們對(duì)小枝玫瑰開(kāi)展多方面研究，帕爾哈提·柔孜等[8]報(bào)道玫瑰花瓣總黃酮和總多糖具有體外抗氧化活性；姜君君等[9]測(cè)定了小枝玫瑰花中沒(méi)食子酸含量；郭玉婷等[10]研究了新疆小枝玫瑰對(duì)正常小鼠降糖作用及機(jī)制；蘭衛(wèi)等[11]研究了小枝玫瑰提取物對(duì)四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的降低作用及對(duì)糖耐量的提高作用。小枝玫瑰中主要含有揮發(fā)油、黃酮類(lèi)、多酚、花青素類(lèi)等成分是人體口服產(chǎn)生藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)。黃酮類(lèi)化合物是其主要的活性成分，本研究確定了小枝玫瑰總黃酮最佳提取工藝條件，提取工藝簡(jiǎn)單、實(shí)用，可為大規(guī)模提取小枝玫瑰黃酮提供理論依據(jù)。