硒結(jié)合蛋白1在肝癌中的表達(dá)及其臨床意義

楊子榮，劉 城，張 孟，于慶功

(大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院 消化內(nèi)科，遼寧 大連116001)

硒(Se)是維持人體健康的一種重要微量元素，主要以硒代半胱氨酸形式存在并在多種蛋白質(zhì)翻譯過(guò)程中起關(guān)鍵作用[1,2]，主要以其抗氧化活性、化學(xué)防護(hù)、抗炎以及抗病毒性質(zhì)等治療作用而被廣泛認(rèn)知[3,4]，硒的攝入量不足可增加患癌風(fēng)險(xiǎn)。研究表明存在一種特殊的含硒蛋白質(zhì)即硒結(jié)合蛋白(selenium binding protein,SBP)，目前已知SBP家族包括SBP1、SBP2和SBP3[5]。其中SBP1的表達(dá)下調(diào)與多種癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[6-11]，但SBP1與肝癌臨床病理因素的關(guān)系尚未見(jiàn)報(bào)道。本文通過(guò)檢測(cè)SBP1在肝癌及非癌肝組織芯片中的表達(dá)，并分析肝癌組織中SBP1表達(dá)與其臨床病理因素的關(guān)系，進(jìn)而探討其在肝癌發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

組織芯片(LVC1501+LVC1502)購(gòu)自于桂林泛普生物技術(shù)有限公司，共包括118例肝細(xì)胞肝癌組織和10例非癌肝組織，均雙芯布陣，同時(shí)經(jīng)過(guò)公司病理專業(yè)人員進(jìn)行檢查證實(shí)。在118例肝癌組織中，女18例，男100例，年齡21-79歲，平均年齡(47.21±12.08) 歲。組織標(biāo)本在10%中性甲醛緩沖液中固定24 h，按照統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)加工，固定于美國(guó)Superfrost Plus防脫載玻片上，4℃保存。

1.2 免疫組化染色

鼠抗人SBP1單克隆抗體(產(chǎn)品編號(hào)M061-3)購(gòu)自于日本MBL公司，有效工作濃度為2 μg/ml。SP免疫組化染色按照SP試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作?？瞻讓?duì)照采用PBS液代替一抗，陰性對(duì)照使用非免疫血清代替一抗，采用已知陽(yáng)性標(biāo)本作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

SBP1的表達(dá)部位主要在細(xì)胞漿和細(xì)胞核，非特異性著色的細(xì)小棕黃色顆粒并且染色強(qiáng)度高于背景的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞，與陰性對(duì)照一致或無(wú)染色的細(xì)胞為陰性細(xì)胞。每張切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍鏡視野(400×)進(jìn)行閱片，計(jì)算出每1000個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)和染色強(qiáng)度對(duì)每張切片進(jìn)行分級(jí)：細(xì)胞數(shù)計(jì)分0分(<5%)，1分(<5%-25%)，2分(<26%-50%)，3分(<51%-75%)，4分(>75%)；染色強(qiáng)度0分(不著色)，1分(弱)，2分(中)，3分(強(qiáng))；組織化學(xué)染色積分(細(xì)胞數(shù)計(jì)分和染色強(qiáng)度計(jì)分的乘積)：≤1分為陰性，>1分為陽(yáng)性(2-4分為弱陽(yáng)性，6-8分為陽(yáng)性，9-12分為強(qiáng)陽(yáng)性)[12]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 肝癌及非癌肝組織中SBP1的表達(dá)

SBP1主要表達(dá)于肝癌細(xì)胞的胞漿和胞核，呈淡黃色至棕黃色顆粒沉淀，SBP1在肝癌組織中表達(dá)的陽(yáng)性率為50.85%(60/118)，而在10例非癌肝組織中的9例為陽(yáng)性表達(dá)(見(jiàn)圖1)。

A：SBP1在非癌肝組織中的陰性表達(dá)；B：SBP1在非癌肝組織中的陽(yáng)性表達(dá)；C：SBP1在高分化肝癌中的陰性表達(dá)；D：SBP1在高分化肝癌中的陽(yáng)性表達(dá)；E：SBP1在低分化肝癌中的陰性表達(dá)；F：SBP1在低分化肝癌中的陽(yáng)性表達(dá)

圖1肝癌及非癌肝組織中SBP1的表達(dá)(SP200×)

2.2 SBP1與肝癌臨床病理特征的關(guān)系

SBP1蛋白的表達(dá)與肝癌的腫瘤大小、浸潤(rùn)深度以及TNM分期顯著相關(guān)(P<0.05)，而與年齡、性別、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 SBP1與肝癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系

3 討論

微量元素硒(Se)最早是在1817由瑞典化學(xué)家Berzelius發(fā)現(xiàn)，并把它命名為Selene，希臘語(yǔ)，月亮女神的意思。硒(Se)是人體必需的必需微量元素，參與多種生物過(guò)程，主要以硒代半胱氨酸形式參與多種蛋白質(zhì)翻譯，并在細(xì)胞防御和激素調(diào)節(jié)中起到關(guān)鍵作用[13]。研究表明存在一種特殊含硒蛋白質(zhì)即硒結(jié)合蛋白(seleniun binding protein,SBP)，目前已知SBP家族包括SBP1、SBP2和SBP3[5]。SBP1 (Selenium-binding protein 1，硒結(jié)合蛋白1)為SBP家族成員之一，最初是在利用Se識(shí)別硒蛋白的實(shí)驗(yàn)中從小鼠肝臟中首次被發(fā)現(xiàn)[14]，人SBP1(或稱hSP56)的編碼基因位于lq21-22，分子量56 kD，與鼠SP56基因同源[1,15]。SBPl在肝、肺、胰、甲狀腺的正常組織中高表達(dá)，其參與高爾基體晚期蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)，并有抑制細(xì)胞增殖作用；SBP1的轉(zhuǎn)錄隨硒元素含量增加上升，增加硒元素?cái)z入量可增強(qiáng)機(jī)體對(duì)癌癥的抵抗力[1,15]。

SBP1同樣也是SBP家族中比較特殊的一員，同相應(yīng)正常組織相比，它在很多腫瘤組織中表達(dá)減少，SBP1可能是作為一種抑癌基因在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[15]。Chen等[6]研究顯示，SBP1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平與肺腺癌分化程度、浸潤(rùn)深度、部位有關(guān)，低分化與中高分化相比、T2-T4與T1相比、支氣管源性與支氣管肺泡源性相比，SBP1 mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著降低，低水平的SBP1蛋白表達(dá)與患者低生存率相關(guān)顯著。Huang[7]等通過(guò)膜蛋白質(zhì)組分析的方法，發(fā)現(xiàn)SBP1在卵巢癌中的表達(dá)明顯減少，推測(cè)SBP1表達(dá)下調(diào)是卵巢癌發(fā)生的早期事件，具有成為判斷卵巢癌患者不良預(yù)后標(biāo)志物的可能性。Kim[9]等則推測(cè)SBP1表達(dá)抑制可能是結(jié)直腸癌發(fā)生的頻繁和晚期事件，SBP1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)顯著下調(diào)，SBP1低表達(dá)的結(jié)直腸癌患者的生存率明顯減低。不同的是，張錦等[16,17]研究發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌組織中SBP1表達(dá)水平明顯低于癌旁組織(P=0.000)，SBP1的表達(dá)與ESCC患者的年齡、性別、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)深度均無(wú)關(guān)(P>0.05)；SBP1蛋白表達(dá)減少與胃癌患者臨床分期相關(guān)(P<0.05)，而與患者的年齡、性別、腫瘤組織學(xué)分型、分化程度、浸潤(rùn)深度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P>0.05)。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)組織芯片和免疫組化染色技術(shù)，顯示在118例肝癌組織中，SBP1有60例陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為50.85%，與以往研究結(jié)果基本一致。通過(guò)臨床病理參數(shù)分組及組間χ2檢驗(yàn)，顯示肝癌組織中SBP1的表達(dá)與腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、腫瘤TNM分期顯著相關(guān)，與分化程度(P=0.079)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.059)邊緣性相關(guān)，而與年齡、性別無(wú)關(guān)。其中，腫瘤(直徑)大于等于5厘米的SBP1陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于腫瘤小于5厘米的SBP1陽(yáng)性表達(dá)率。此外，腫瘤的TNM分期在I和II期的SBP1陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于III和IV期的SBP1陽(yáng)性表達(dá)率。另外，腫瘤的浸潤(rùn)深度處于未穿透臟腹膜的SBP1陽(yáng)性表達(dá)率顯著地高于腫瘤的浸潤(rùn)深度處于穿透臟腹膜的SBP1陽(yáng)性表達(dá)率。

目前SBP1在機(jī)體內(nèi)影響肝癌的生物學(xué)機(jī)制仍不清楚，具體是否通過(guò)上游調(diào)控因子調(diào)控，以及其量的改變發(fā)生于轉(zhuǎn)錄之前或之后等一系列問(wèn)題，還需要我們進(jìn)一步研究。

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