復(fù)發(fā)性鼻息肉患者PLUNC、TLR2和HO-1蛋白表達(dá)及意義

司遠(yuǎn)征，張 俊，馬 賽

(南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附院 耳鼻喉頭頸外科，河南 南陽473000)

復(fù)發(fā)性鼻息肉是臨床上較為常見的耳鼻咽喉科疾病，流行病學(xué)研究顯示，復(fù)發(fā)性鼻息肉發(fā)病率可達(dá)233-555/10萬左右[1]。臨床上，復(fù)發(fā)性鼻息肉能夠?qū)е禄颊呱钯|(zhì)量下降，提高惡性上皮惡性腫瘤的發(fā)生風(fēng)險[2]。不同的因素均能夠?qū)е律掀ぜ?xì)胞病變，增加上皮黏膜增生和息肉的發(fā)生風(fēng)險。其中腭、肺及鼻咽上皮克隆(palate-lung-nasal epithelium clone，PLUNC)的表達(dá)是維持上皮細(xì)胞膜完整性的重要因子，其表達(dá)濃度的穩(wěn)定能夠降低局部炎癥反應(yīng)的發(fā)生，降低上皮間質(zhì)細(xì)胞的增生風(fēng)險[3]；Toll樣受體2(Toll like receptor 2 ，TLR-2)蛋白表達(dá)濃度的增加,能夠促進(jìn)局部粘液的阻塞及繼發(fā)性上皮增生的發(fā)生[4]；血紅素加氧酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)能夠通過誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞浸潤，促進(jìn)上皮細(xì)胞增殖，提高息肉發(fā)生率[5]。為進(jìn)一步揭示復(fù)發(fā)性鼻息肉患者PLUNC、TLR2和HO-1蛋白表達(dá)及意義，本研究選取2016年1月至2017年10月在我院治療的鼻息肉患者為研究對象，探討PLUNC、TLR2和HO-1蛋白表達(dá)及其內(nèi)在關(guān)系，以期為臨床上復(fù)發(fā)性息肉的治療及預(yù)防提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2016年1月至2017年10月在我院治療的鼻息肉患者75例，其中初發(fā)性鼻息肉患者40例為初發(fā)組、復(fù)發(fā)性鼻息肉患者35例(復(fù)發(fā)組)，初發(fā)組男25例，女15例，平均年齡(28.03±8.10)歲；復(fù)發(fā)組男20例，女15例，平均年齡(28.11±7.84)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均經(jīng)鼻內(nèi)鏡及鼻竇CT確診；(2)術(shù)后病理結(jié)果證實；(3)在我院行手術(shù)切除治療；(4)患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有變應(yīng)性鼻炎、阿司匹林三聯(lián)征、支氣管哮喘、免疫功能缺陷和囊性纖維化疾病等；(2)術(shù)前2周使用過免疫抑制劑、抗生素及糖皮質(zhì)激素類藥物。同時選取40例行鼻中隔矯正術(shù)患者中的正常中鼻甲黏膜者作為對照組，其中男27例，女13例，平均年齡(27.93±7.28)歲。三組對象性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，均衡可比。

1.2 方法

PLUNC、TLR2和HO-1蛋白檢測均采用免疫組化進(jìn)行：每位患者均于手術(shù)過程中去少量的鼻息肉組織，4%甲醛固定，石蠟切片脫蠟至水，過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧化物酶：3%H2O2，室溫10 min(避光)，10 mMpH 6.0 枸櫞酸鈉緩沖液)，PBS沖洗5 min，滴加正常山羊或兔血清封閉處理，37℃，15 min。用濾紙吸去血清，不洗，直接滴加PLUNC、TLR2和HO-1蛋白抗體，37℃ 2 h，滴加生物素化的二抗，37℃，40 min，PBS沖洗5 min，DAB 顯色，蘇木素復(fù)染，加拿大樹膠(或中性樹膠)封片。

1.3 結(jié)果判斷

采用陽性細(xì)胞半定量積分法進(jìn)行判斷，選取5個高倍鏡視野，以細(xì)胞核和(或)細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒為陽性，染色強度評分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，褐色為3分；陽性細(xì)胞比例：<5%為0分，6-25%為1分，26%-75%為2分，>75%為3分。染色強度得分和陽性細(xì)胞比例得分之和為最終得分，分?jǐn)?shù)≥3分為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 三組PLUNC蛋白表達(dá)情況比較

復(fù)發(fā)組PLUNC蛋白陽性表達(dá)率明顯低于初發(fā)組和對照組(χ2=6.657、43.333，P<0.05)；初發(fā)組PLUNC蛋白陽性表達(dá)率明顯低于對照組(χ2=21.004，P<0.05)，見表1和圖1。

表1 三組PLUNC蛋白表達(dá)情況

注：a與對照組比較P<0.05；b與初發(fā)組比較P<0.05。

×400，A：正常組；B：初發(fā)組；C：復(fù)發(fā)組

2.2 三組TLR-2蛋白表達(dá)情況

復(fù)發(fā)組TLR-2蛋白陽性表達(dá)率明顯高于初發(fā)組和對照組(χ2=13.647、46.524，P<0.05)；初發(fā)組TLR-2蛋白陽性表達(dá)率明顯高于對照組(χ2=14.587，P<0.05)，見表2和圖2。

表3 三組TLR-2蛋白表達(dá)情況

注：a與對照組比較P<0.05；b與初發(fā)組比較P<0.05。

×400，A：正常組；B：初發(fā)組；C：復(fù)發(fā)組

2.3 三組HO-1蛋白表達(dá)情況

復(fù)發(fā)組HO-1蛋白陽性表達(dá)率明顯高于初發(fā)組和對照組(χ2=8.282、37.397，P<0.05)；初發(fā)組HO-1蛋白陽性表達(dá)率明顯高于對照組(χ2=14.066，P<0.05)，見表3和圖3。

表3 三組HO-1蛋白表達(dá)情況

注：a與對照組比較P<0.05；b與初發(fā)組比較P<0.05。

×400，A：正常組；B：初發(fā)組；C：復(fù)發(fā)組

2.4 相關(guān)性分析

將鼻息肉患者PLUNC、TLR2和HO-1蛋白表達(dá)進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：PLUNC與TLR2、HO-1蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.622和-0.534，P<0.05)，TLR2和HO-1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.466，P<0.05)。

3 討論

復(fù)發(fā)性鼻息肉的發(fā)生是患者鼻黏膜惡性病變的風(fēng)險因素，特別是在治療病程較長、治療后復(fù)發(fā)次數(shù)較多的人群中，復(fù)發(fā)性鼻息肉對于遠(yuǎn)期惡性病變的發(fā)生風(fēng)險具有更為顯著的增加作用[2]。臨床上治療復(fù)發(fā)性鼻息肉的過程中，常規(guī)治療措施如糖皮質(zhì)激素等治療后疾病的復(fù)發(fā)率仍然較高[6,7]。本研究通過對復(fù)發(fā)性鼻息肉發(fā)病過程中的相關(guān)生物學(xué)機制進(jìn)行研究，可以為揭示復(fù)發(fā)性鼻息肉的發(fā)病機制、為鼻息肉的生物學(xué)治療等提供理論參考。

PLUNC是糖蛋白家族成員，其表達(dá)濃度的上升能夠通過激活下游的生理性信號通路的激活維持上皮細(xì)胞活性，降低因為炎癥因子浸潤下導(dǎo)致上皮細(xì)胞增生和息肉的形成。PLUNC對局部鼻黏膜上皮細(xì)胞擺動能力的維持，能夠降低因為纖毛生理功能異常導(dǎo)致的粘液阻塞，降低局部炎性細(xì)胞富集，減輕局部上皮細(xì)胞堆積和間質(zhì)細(xì)胞纖維化改變[8]；TLR對體內(nèi)TOLL受體的激活，能夠誘導(dǎo)下游單核細(xì)胞或者嗜酸性粒細(xì)胞的激活，增強下游IL-6或者IL-10等激活導(dǎo)致鼻息肉的復(fù)發(fā)[9,10]；HO-1作為過氧化物酶指標(biāo)，其對局部鼻黏膜局部氧化應(yīng)激反應(yīng)的上調(diào)作用，能夠?qū)е戮植炕啄ぜ?xì)胞的浸潤和新生血管的形成，為息肉復(fù)發(fā)提供條件[11]。有研究探討TLR2、HO-1等在息肉患者病灶組織中的差異性表達(dá)情況，認(rèn)為TLR2和HO-1的高表達(dá)是影響息肉病變、發(fā)生和治療結(jié)局的重要因素，但缺少對PLUNC等在復(fù)發(fā)性息肉中左右的探討。

本研究通過相關(guān)蛋白的檢測結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，PLUNC蛋白在復(fù)發(fā)性息肉患者中的表達(dá)濃度明顯下降，低于初次發(fā)生息肉患者和正常對照者的鼻黏膜組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示PLUNC蛋白可能顯著參與到了復(fù)發(fā)性鼻息肉的發(fā)生過程中，從機制上考慮，PLUNC蛋白的低表達(dá)可能通過以下因素促進(jìn)鼻息肉的發(fā)生[12,13]：(1)PLUNC蛋白的低表達(dá)失去了其對患者鼻黏膜組織的炎癥抑制作用，導(dǎo)致炎癥因子的富集較為明顯，PLUNC蛋白的表達(dá)下降還影響到了鼻黏膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞周期，導(dǎo)致G1/S期細(xì)胞比例的上升，增加了鼻黏膜細(xì)胞的增殖速度；(2)PLUNC蛋白的低表達(dá)導(dǎo)致鼻黏膜上皮細(xì)胞間質(zhì)成分特別是成纖維蛋白成分的增生增加和息肉發(fā)生率增高。陸奇勝等[14]在探討復(fù)發(fā)性鼻息肉發(fā)病機制的過程中發(fā)現(xiàn),PLUNC蛋白在復(fù)發(fā)性鼻息肉患者中的陽性表達(dá)率可上升25%以上，且患者的復(fù)發(fā)次數(shù)越多、治療后病情緩解率越低，PLUNC蛋白的表達(dá)濃度越低。TLR2和HO-1蛋白在復(fù)發(fā)性鼻息肉患者中表達(dá)濃度明顯上升，提示二者同樣參與到了鼻息肉的發(fā)生過程中，TLR2和HO-1蛋白的高表達(dá)對鼻息肉復(fù)發(fā)的影響，主要考慮與TLR2和HO-1蛋白的表達(dá)增加了局部單核細(xì)胞浸潤，增加了局部鼻黏膜粘液阻塞、鼻黏膜纖毛擺動異常和繼發(fā)性上皮纖維化的發(fā)生。

免疫組化分析結(jié)果顯示：TLR2和HO-1蛋白的表達(dá)主要局限于上皮細(xì)胞間質(zhì)成分中，提示TLR2和HO-1蛋白可能主要通過影響到上皮間質(zhì)成分特別是新生血管的增生等促進(jìn)鼻息肉的復(fù)發(fā)。內(nèi)在關(guān)系研究顯示，PLUNC與TLR2、HO-1蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，而TLR2、HO-1的表達(dá)具有內(nèi)在的正性相關(guān)關(guān)系，但具體的機制仍然不清楚，需要后續(xù)研究進(jìn)一步探討。本研究的創(chuàng)新性在于探討了PLUNC蛋白的表達(dá)及其與TLR2和HO-1蛋白的關(guān)系。綜上所述，鼻息肉中PLUNC蛋白表達(dá)下調(diào)，而TLR2和HO-1蛋白表達(dá)上調(diào)，三種蛋白的表達(dá)與鼻息肉復(fù)發(fā)有一定的相關(guān)性，且三者之間存在相關(guān)關(guān)系。

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