廣金錢草提取物對尿石癥大鼠腎功能的保護作用

劉 英 王志勇 楊德慧 劉曉偉 高旭紅 徐 輝

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科，河北 承德 067000)

近年來，泌尿系結(jié)石的發(fā)病率在我國有明顯增加趨勢，發(fā)病年齡也日趨年輕化〔1〕。祖國醫(yī)學(xué)現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，澤瀉、伏苓、金錢草及排石湯顆粒、結(jié)石康膠囊等藥物具有降低尿液中結(jié)晶鹽濃度和增加尿液中抑制劑濃度、預(yù)防或降低結(jié)石形成的功效〔2〕。金錢草為治療泌尿系結(jié)石的首選中藥，具有清熱利濕、通淋排石之功效。現(xiàn)代中藥化學(xué)和藥理學(xué)研究表明,金錢草含有多種有效成分，如黃酮類、酚性成分、膽堿、氨基酸等。體外研究表明，金錢草水煎液對草酸鈣結(jié)晶的成核具有一定的促進作用，進而降低尿液的過飽和狀態(tài)〔3〕。本實驗使用乙二醇+氯化銨制造尿石癥大鼠模型，探討廣金錢草提取物對尿石癥大鼠腎功能的保護作用。

1 材料與方法

1.1動物與藥物 SPF級Wistar雄性、體質(zhì)量(200±20)g大鼠60只，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司〔合格證號：SCXK(京)2016-0064〕，自由飲水和標(biāo)準實驗室飲食。廣金錢草提取物(陜西帕尼爾生物科技有限公司)。

1.2主要試藥與儀器 CX31RBSF型顯微鏡(日本Olympus公司)；Fresco 17型低溫離心機(日本日立公司)；全自動生化分析儀(Hoffmann-La Roche 有限責(zé)任公司)；乙二醇、氯化銨(天津市天力化學(xué)試劑有限公司)；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、還原型谷胱甘肽(GSH)(南京建成生物工程研究所)；染色試劑盒(上海杰美基因醫(yī)藥科技有限公司)

1.3方法

1.3.1動物模型的制備、分組與給藥處理 隨機分為空白對照組、模型組、廣金錢草低、中、高劑量組，每組10只?？瞻讓φ战M自由飲水，其組50只大鼠給予1%乙二醇+1%氯化銨自由飲水，連續(xù)喂食2 w，腎小管出現(xiàn)結(jié)晶，表明模型建立成功。2 w后，低、中、高劑量組給予廣金錢草提取物80、160、320 mg·kg-1·d-1灌胃，連續(xù)4 w。

1.3.2觀察指標(biāo) ①尿量及尿生化指標(biāo)：給藥3 w后，收集24 h尿液,采用鉻酸鉀氧化甲基紅催化光度法測定尿草酸〔計算公式：C(mmol/L)=(Ab-Au)/(Ab-As)×0.01〕，采用漠丙酮硫脈比色法測定尿檸檬酸〔計算公式為尿檸檬(mmol)=樣品光密度/標(biāo)準吸光度×1.038〕，將100 μl尿液均勻滴至干凈載玻片，置于偏光顯微鏡檢測尿結(jié)晶。

②給藥4 w后，腹腔注射10%水合氯醛4 ml/kg麻醉大鼠，經(jīng)腹部下腔靜脈采集血液，3 500 r/min低溫離心10 min，取上清液。采用AU800全自動生化分析儀檢測大鼠血液中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、鈣(Ca2+)、磷(P)的水平；摘取各組大鼠腎臟，采用硫代巴比妥酸法測定MDA，利用黃嘌呤氧化酶-氮藍四唑還原法測定SOD，GSH；取大鼠左腎，4%多聚甲醛固定，石蠟包埋后，切片，用蘇木素-伊紅(HE)染色，置于光學(xué)顯微鏡下觀察腎組織草酸鈣結(jié)晶形態(tài)、沉積分布及腎組織病理變化。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS14.0軟件，多組比較采用LSD法。

2 結(jié) 果

2.1廣金錢草提取物對尿量及尿生化指標(biāo)的影響 與空白對照組相比,模型組尿草酸水平及尿鈣水平顯著升高(P<0.05)。模型組24 h尿量明顯高于空白對照組，廣金錢草提取物低、中、高劑量組24 h尿量明顯高于空白對照組和模型組(P<0.05)。模型組、廣金錢草提取物低劑量組尿Ca2+明顯高于空白對照組(P<0.05)；廣金錢草提取物中、高劑量組尿Ca2+明顯低于模型組(P<0.05)，廣金錢草提取物高劑量組的尿草酸低于模型組(P<0.05)。與空白對照組相比，廣金錢草提取物高劑量組尿檸檬酸明顯升高(P<0.05)；各組尿Mg2+水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2廣金錢草提取物對血生化指標(biāo)的影響 與空白對照組相比，模型組血BUN、Cr水平顯著升高(P<0.05)；與模型組比較，廣金錢草提取物低、中、高劑量組大鼠血BUN、Cr水平明顯下降(P<0.05)；而各組大鼠血P、Mg2+、Ca2+水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表1 各組尿量及尿生化指標(biāo)檢測結(jié)果

與空白對照組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05；下表同

表2 各組血生化指標(biāo)檢測結(jié)果

2.3廣金錢草提取物對腎組織SOD活力及MDA含量的影響 與空白對照組大鼠相比，模型組腎臟組織GSH、SOD水平顯著降低(P<0.05)；而與模型組比較，廣金錢草提取物低、中、高組GSH、SOD含量顯著升高(P<0.05)；模型組腎臟組織中MDA水平顯著高于空白對照組(P<0.05)，與模型組相比，廣金錢草提取物各劑量組MDA含量明顯下降(P<0.05)。廣金錢草提取物各劑量組大鼠腎臟草酸鈣結(jié)晶評分明顯高于空白對照組，但顯著低于模型組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 各組血生化指標(biāo)檢測結(jié)果

2.4廣金錢草提取物對腎組織草酸鈣沉積的影響 顯微鏡觀察結(jié)果顯示，HE染色的草酸鈣晶體為淡灰色至白色透明狀晶體(圖1)；Von Kossa染色的草酸鈣晶體呈黑色(圖2)。腎臟組織病理學(xué)分析顯示，空白對照組無明顯病理變化和草酸鈣晶體沉積。模型組腎組織內(nèi)有大量草酸鈣晶體形成及沉積(圖2)，主要存在于腎髓質(zhì)內(nèi)，腎乳頭及腎皮質(zhì)、腎小管上皮細胞腫脹、變性、壞死顯著，管腔擴張，管腔內(nèi)存在草酸鈣晶體沉積，腎間質(zhì)發(fā)生明顯的慢性間質(zhì)性炎癥。與模型組比較，廣金錢草中、高劑量組腎組織中草酸鈣晶體沉積顯著減少，結(jié)構(gòu)破壞減輕，管腔擴張程度較輕，病理損傷明顯減輕。

圖1 各組腎組織HE染色結(jié)果(×100)

圖2 各組腎組織Von Kossa染色結(jié)果(×100)

3 討 論

隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展與進步，泌尿系結(jié)石微創(chuàng)和無創(chuàng)技術(shù)在臨床中應(yīng)用廣泛，但手術(shù)易引起急性腎損傷，導(dǎo)致腎功能減退的發(fā)生，出現(xiàn)多種并發(fā)癥，如穿孔、出血、結(jié)石殘余等。泌尿系結(jié)石模型是研究結(jié)石形成及防治的重要方法〔4〕，采用1%乙二醇+1%氯化銨飲水飼養(yǎng)，建模時間短，自由飲水4 w?？捎行Ыistar大鼠腎草酸鈣模型。病理切片HE和Von Kossa染色證明有效建立了大鼠草酸鈣腎結(jié)石模型。本研究結(jié)果表明廣金錢草提取物有利尿作用，增加尿量，利于草酸鈣結(jié)晶排出，降低尿液飽和度，一方面可以沖刷腎盂，另一方法也避免結(jié)晶的形成或滯留。廣金錢草提取物組尿Ca2+明顯降低，推測是尿鈣與草酸結(jié)合形成結(jié)晶。BUN、Cr是評價腎功能常用指標(biāo)，可以提示腎功能損害程度〔5〕。本實驗結(jié)果顯示，廣金錢草提取物可以保護腎功能，減輕腎臟損傷。MDA是ROS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激的最常見脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物〔6,7〕，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，廣金錢草提取物還具有抗氧化和預(yù)防結(jié)石復(fù)發(fā)等作用。腎臟組織病理學(xué)分析也顯示，廣金錢草提取物可以有效緩解造模導(dǎo)致的腎損害。

4 參考文獻

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