番茄潰瘍病防治藥劑的篩選

高娃 張冬梅 劉丹

摘要 [目的]通過2種方法預(yù)防和防治番茄潰瘍病。[方法]一種方法是對(duì)已檢測攜帶番茄潰瘍病菌的番茄種子進(jìn)行浸種，分別調(diào)查種子內(nèi)部和種子表面的孢子負(fù)荷量；另一種方法是通過單劑初篩和藥劑混配試驗(yàn)研究生物農(nóng)藥對(duì)番茄潰瘍病的防治效果。[結(jié)果]種子處理試驗(yàn)表明，種子內(nèi)部及表面的孢子負(fù)荷量最低的是通過55 ℃恒溫水浴處理過的種子，其次是0.01%醋酸溶液處理的番茄種子。藥劑篩選試驗(yàn)表明，中生菌素混配氫氧化銅防治番茄潰瘍病的效果最佳。[結(jié)論]該研究結(jié)果為番茄潰瘍病的有效防治提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞 番茄潰瘍??；種子處理；藥劑防治

中圖分類號(hào) S436.412.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2018）20-0137-04

Abstract [Objective] The aim was to prevent and control bacterial canker of tomato by two methods. [Method] One method was seed treatment. Seven seeds were treated by seedling tomato seeds that had been tested for tomato ulcer pathogens. The spores of seeds and seeds were investigated separately. The control effects of biological pesticides against bacterial canker of tomato were studied by single agent screening and mixing test. [Result] Seed treatment experiment showed that the minimum amount of spore load on the inside and the surface of the seed was the seed treated by 55 ℃ constant temperature water bath， followed by 0.01% acetic acid solution. Drug screening experiment showed that the control of mesocin mixed with copper hydroxide was the best. [Conclusion] The result provides theoretical basis for control of bacterial canker of tomato.

Key words Bacterial canker of tomato；Seed treatment；Chemical control

番茄潰瘍病是一種毀滅性種傳維管束病害，是番茄（Lycopersicon esculentum Mill）生產(chǎn)中很嚴(yán)重的細(xì)菌病害之一，其病原菌為密執(zhí)安棒狀桿菌密執(zhí)安亞種（Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis）。自1910年在美國首次報(bào)道以來，我國在20世紀(jì)80年代中期在北京首先發(fā)現(xiàn)該病，隨后遼寧、內(nèi)蒙古、山西、河北等地均有發(fā)生，至今該病從黑龍江至海南、從上海到新疆已有12?。ㄖ陛犑?、自治區(qū)）的局部地塊發(fā)生[1-3]。因此，我國1995年將該病原菌列入《全國植物檢疫對(duì)象名單》[4]，1997年列入《中國進(jìn)境植物檢疫潛在的植物危險(xiǎn)性病、蟲、雜草（三類有害生物）名錄》。隨著保護(hù)地蔬菜的大范圍蔓延，該病勢態(tài)越來越不容樂觀。國外和國內(nèi)對(duì)該病都做了一定的研究，但是由于該病的病原菌屬于細(xì)菌性病害，一旦發(fā)生，控制起來尤其困難。目前，研究的熱點(diǎn)是番茄抗病品種的研究，但目前尚未培育出具有商業(yè)價(jià)值的抗?jié)儾〉姆哑贩N。

我國番茄種植面積大，分布區(qū)域廣，主栽品種或品系多，遺傳背景相對(duì)復(fù)雜，但關(guān)于該病害的研究基礎(chǔ)十分薄弱，局限于病原菌初步鑒定[5]。近年來該病害在我國發(fā)生危害加劇，對(duì)種子繁育和大田生產(chǎn)構(gòu)成直接威脅。番茄潰瘍病遠(yuǎn)距離廣泛傳播最主要的途徑是種子攜帶的番茄潰瘍病菌，研究表明，0.01%的種子傳病率就能引起該病的大面積流行，導(dǎo)致病害在田間流行并造成較大經(jīng)濟(jì)損失的最主要原因是初侵染，而初侵染最重要的來源是種子帶菌[6-8]。至今，尚無成功防治該病害的抗病品種和特效藥劑。

一味地采取化學(xué)防治，使得作物的抗藥性增強(qiáng)，如此反復(fù)，最終造成崩潰的態(tài)勢。此外，化學(xué)農(nóng)藥的過多使用造成土壤和環(huán)境污染。鑒于此，筆者選用生物型農(nóng)藥，進(jìn)行了番茄潰瘍病的藥劑篩選試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試番茄品種為CM966，為本地區(qū)栽培面積最廣的品種。供試培養(yǎng)基為523液體培養(yǎng)基：蔗糖10 g，胰蛋白胨8 g，酵母提取物 4 g，K2HPO4 2 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，加水至1 000 mL，pH 6.8～7.1。

1.2 方法

1.2.1 不同種子處理方法對(duì)番茄潰瘍病的影響。共設(shè)7個(gè)處理：①溫湯浸種：55 ℃ 30 min。②0.01%優(yōu)質(zhì)醋酸浸種24 h后，用清水沖洗。③600倍液農(nóng)用鏈霉素浸種24 h后，用清水沖洗。④500 mg/kg寡糖浸種12 h后，用清水沖洗。⑤3%中生菌素浸種2 h后，用清水沖洗。⑥46%氫氧化銅可濕性粉劑800倍液浸種20 min后，用清水沖洗。⑦清水浸種30 min，作為空白對(duì)照。每個(gè)處理隨機(jī)選取100粒種子，使用濃度為1×108～1×109 CFU/mL的菌懸液浸泡種子，接種24 h，取出，待種子干燥后，用不同的處理對(duì)種子進(jìn)行處理，隨后進(jìn)行種子表面帶菌檢測和種子內(nèi)部帶菌檢測。

1.2.1.1 種子表面帶菌檢測。

先用 0.01%醋酸溶液浸泡番茄種子 24 h 進(jìn)行消毒處理，再用1×108～1×109 CFU/mL菌懸液浸種24 h取出，晾干，待用。

將表面消毒處理的種子放入滅菌的250 mL三角瓶中，加20 mL無菌水后充分振蕩，吸取200 μL懸浮液涂抹到直徑9 cm的523平板上，涂勻。3次重復(fù)。相同操作條件下設(shè)無菌水空白對(duì)照。放入28 ℃溫箱中黑暗條件下培養(yǎng) 3～5 d觀察，進(jìn)行分子鑒定，并統(tǒng)計(jì)每處理的病原菌數(shù)量，換算為每粒的帶菌個(gè)數(shù)。

每粒種子帶菌個(gè)數(shù)=3皿菌落總數(shù)/0.6 mL×20 mL/100粒

1.2.1.2 種子內(nèi)部帶菌檢測。

在無菌操作下，將“1.2.1.1”晾干的種子置于5%次氯酸鈉溶液中，浸泡5 min，然后用無菌水沖洗3次，再將種子移至無菌研缽中進(jìn)行研磨，加入20 mL無菌水混勻，吸取200 μL懸浮液涂抹到直徑9 cm的523平板上，涂勻。3次重復(fù)。相同操作條件下設(shè)無菌水空白對(duì)照。放入28 ℃溫箱中黑暗條件下培養(yǎng)3～5 d觀察，進(jìn)行分子鑒定，并統(tǒng)計(jì)每處理的病原菌數(shù)量，換算為每粒的帶菌個(gè)數(shù)。

1.2.2 藥劑防治試驗(yàn)。

1.2.2.1 藥劑初篩試驗(yàn)。

設(shè)7個(gè)處理：①中生菌素；②辛菌胺；③奧力克細(xì)截；④農(nóng)用鏈霉素；⑤葉枯唑?yàn)閷?duì)照藥劑；⑥空白對(duì)照；⑦葉枯·噻唑鋅+農(nóng)用鏈霉素，該處理為農(nóng)戶自行施用的農(nóng)藥。

試驗(yàn)地點(diǎn)為麻池番茄重茬地，發(fā)病初期開始藥劑防治，7 d用藥1次（選擇無風(fēng)或微風(fēng)天氣），連續(xù)施用4次。用藥前調(diào)查1次病情指數(shù)，施藥后，每隔7 d進(jìn)行1次病情指數(shù)調(diào)查，共計(jì)調(diào)查4次。

1.2.2.2 藥劑混配試驗(yàn)。

共設(shè)7個(gè)藥劑處理：①中生菌素+氫氧化銅；②多粘類芽孢桿菌；③多粘類芽孢桿菌+寡糖+S-誘抗素；④奧力克細(xì)截+大蒜油+中生菌素；⑤寡糖+S-誘抗素+中生菌素；⑥氫氧化銅；⑦空白對(duì)照。試驗(yàn)地點(diǎn)為麻池番茄重茬地，發(fā)病初期開始藥劑防治，7 d用藥1次（選擇無風(fēng)或微風(fēng)天氣），連續(xù)施用4次。用藥前調(diào)查1次病情指數(shù)，施藥后，每隔7 d進(jìn)行1次病情指數(shù)調(diào)查，共計(jì)調(diào)查4次，注意氫氧化銅和中生菌素混配時(shí)，應(yīng)用二次稀釋液。

2 結(jié)果與分析

2.1 番茄潰瘍病不同種子處理方法的比較

由圖1可知，7個(gè)處理中，種子表面帶菌個(gè)數(shù)和孢子負(fù)荷量最低的是通過55 ℃恒溫水浴處理過的種子，其次是0.01%醋酸，中生菌素、農(nóng)用鏈霉素、氫氧化銅和寡糖處理的種子表面帶菌個(gè)數(shù)均很高，與空白對(duì)照相比，帶菌個(gè)數(shù)略低，殺菌的功效一般。最可取的方法是采取55 ℃恒溫水浴浸種，可降低種子表面的帶菌個(gè)數(shù)，從而降低番茄潰瘍病發(fā)生的概率。

由圖2可知，通過7種處理，種子內(nèi)部帶菌個(gè)數(shù)和孢子負(fù)荷量最低的是通過55 ℃恒溫水浴處理過的種子，其次是0.01%醋酸，中生菌素、農(nóng)用鏈霉素、氫氧化銅和氨基酸寡糖處理的種子，表面帶菌個(gè)數(shù)均很高，與空白對(duì)照相比，帶菌個(gè)數(shù)略低，無顯著差異。

由此可知，種子內(nèi)部帶菌個(gè)數(shù)較表面帶菌個(gè)數(shù)要低，應(yīng)以種子表面消毒為主，最適方法是采取55 ℃恒溫水浴浸種，既可降低種子表面的帶菌個(gè)數(shù)，又可降低種子內(nèi)部的帶菌個(gè)數(shù)，整體降低番茄潰瘍病發(fā)生的概率。

2.2 藥劑試驗(yàn)結(jié)果

方差分析表明，不同處理間存在極顯著差異。由圖3可知，施用中生菌素處理與其他藥劑處理相比病情指數(shù)最低，且與其他藥劑處理之間存在極顯著差異，其次是奧力克細(xì)截和葉枯唑，與空白對(duì)照之間存在極顯著差異，與其他處理之間存在顯著差異，辛菌胺、農(nóng)用鏈霉素和混配農(nóng)藥與空白對(duì)照差異顯著。

由表1可知，通過一系列生物農(nóng)藥試驗(yàn)，由病情指數(shù)可知，6種藥劑處理與空白之間均存在顯著差異。其中，中生菌素混配氫氧化銅的病情指數(shù)最低為33.75，其次是奧力克細(xì)截、大蒜油和中生菌素混配效果較好，再次為寡糖、S-誘抗素和中生菌素混配的效果稍好，再次是多粘枯草芽孢桿菌混配寡糖和誘抗素，單獨(dú)使用多粘枯草芽孢桿菌的效果最差。由于自然發(fā)病的番茄田塊發(fā)病不均勻，氫氧化銅處理的番茄小區(qū)，調(diào)查初期的病情指數(shù)相對(duì)其他較高，所以可從防治效果進(jìn)行比較。其中，中生菌素與氫氧化銅進(jìn)行混配，防治番茄潰瘍病的防治效果最佳，達(dá)43.53%，由高到低依次是氫氧化銅處理、奧力克細(xì)截+大蒜油+中生菌素混配、寡糖+S-誘抗素+中生菌素、多粘+寡糖+S-誘抗素、多粘枯草芽孢桿菌。

通過藥劑處理，番茄潰瘍病的病情呈加重態(tài)勢，藥劑的使用只能減緩病情的發(fā)展，但不能徹底殺滅病原菌，因此，在沒有番茄潰瘍病特效藥存在的情況下，只能選用防治效果相對(duì)較好的藥劑。另外，使用藥劑越早，對(duì)病情的控制效果越明顯。

圖4為自然條件下番茄潰瘍病藥劑試驗(yàn)成株期的癥狀，葉柄和側(cè)枝上產(chǎn)生灰褐色條狀枯斑，剖開莖部可見維管束褐變，髓部開始變空。果實(shí)染病，致幼果空癟或畸形，生長停滯，成熟度差，染病果實(shí)上產(chǎn)生特征性的鳥眼斑，中央暗褐色瘡痂狀隆起，四周乳白，多個(gè)病斑融合使果實(shí)表面粗糙。

3 結(jié)論與討論

番茄種子的帶菌率普遍較低，一般不足1%[9]。帶菌種子長出病苗后，通過田間再侵染可引起50%以上的植株發(fā)病。因此，種子處理是防治番茄潰瘍病的最有效手段。筆者從病株上收集病果，采種后，PCR檢測，檢測模板為1 g的種子，少于1 g便無法檢測出攜帶的病原菌。因此，該研究采用菌液浸種的方法模擬自然攜帶潰瘍病菌的種子進(jìn)行試驗(yàn)。 通過幾種常見的種子處理方法，發(fā)現(xiàn)最有效、最簡單的方法就是浸種。55 ℃恒溫水浴處理過的種子殺菌效果最佳，其次是0.01%醋酸，因此在日常生產(chǎn)上，可采用浸種或醋酸消毒的方法減輕潰瘍病的發(fā)生。

研究表明，活化酯等藥劑可誘導(dǎo)番茄抗?jié)儾?，銅制劑如可殺得等保護(hù)性殺菌劑應(yīng)用于生產(chǎn)中預(yù)防潰瘍病，但目前世界范圍內(nèi)尚無理想的防治該病害的有效藥劑[10]。

國內(nèi)報(bào)道的有關(guān)番茄潰瘍病的防治藥劑主要有銅制劑、代森錳鋅、琥膠肥酸銅（DT）和農(nóng)用鏈霉素等，以上幾種藥劑均能在一定程度上有效控制番茄潰瘍病的危害，并且不同藥劑混用的效果要優(yōu)于單一藥劑[6]。

通過對(duì)露地番茄細(xì)菌性潰瘍病菌的藥效試驗(yàn)比較，市場上收集到的標(biāo)有對(duì)細(xì)菌病害有防治效果的7種藥劑對(duì)番茄細(xì)菌性潰瘍病菌均有防治效果。單劑使用時(shí)，中生菌素防治效果最好，效果較差的是辛菌胺和農(nóng)用鏈霉素。葉枯唑和奧力克細(xì)截的效果居中。 混合使用時(shí)，中生菌素和氫氧化銅的防治效果最好，其次是氫氧化銅，奧力克細(xì)截、大蒜油與中生菌素的混合使用與單獨(dú)使用氫氧化銅的防治效果無顯著差異。司天桃等[11]研究表明，53.8%氫氧化銅、46%氫氧化銅（可殺得三千）這2種藥劑可作為加工番茄細(xì)菌性潰瘍病的防治藥劑，與該試驗(yàn)結(jié)果類似。另有研究表明，3%中生菌素可濕性粉劑對(duì)番茄青枯病的防效，防效可達(dá) 86.4%，與46%可殺得可濕性粉劑500倍液的防效相當(dāng)，且安全性較好，可在生產(chǎn)上進(jìn)一步示范及推廣應(yīng)用[12]。番茄青枯病和番茄潰瘍病均是番茄上的細(xì)菌性病害，二者在選擇用藥上也基本一致，該試驗(yàn)結(jié)果也一致，因此，3%中生菌素可以作為防治番茄潰瘍病的有效藥劑。但是在實(shí)際應(yīng)用農(nóng)藥時(shí)，由于單獨(dú)、長時(shí)間施用同一種（一類）藥劑，使得病害易產(chǎn)生抗藥性。這時(shí)可選擇中生菌素、氫氧化銅和奧力克細(xì)截（加大蒜油）輪番混合使用，不僅可提高藥效還不易產(chǎn)生抗藥性。

賀春娟等[13]在桃樹上噴施5%氨基寡糖素水劑防治桃細(xì)菌性穿孔病，防效在63%以上，與單獨(dú)使用常規(guī)化學(xué)藥劑防效基本相等。該試驗(yàn)中，寡糖和誘抗素的防治效果卻不顯著，與該2種藥劑的屬性有關(guān)，二者均可提高植物的抗性，增加作物的抗逆性，但是使用時(shí)必須提早使用，才能達(dá)到預(yù)期的效果。在番茄已表現(xiàn)初期病害時(shí)，病情擴(kuò)展速度快，使用該種藥劑，不能很好地發(fā)揮其藥效。多粘類芽孢桿菌對(duì)黃瓜和番茄枯萎病不僅具有較好的防治效果[14]，而且具有明顯的促進(jìn)生長作用，但是對(duì)番茄潰瘍病的防治效果不明顯。

農(nóng)用鏈霉素是一類常用的防治細(xì)菌性病害的藥劑，該試驗(yàn)也選用了這種藥劑，但試驗(yàn)結(jié)果表明，它對(duì)番茄潰瘍病的防治效果一般，這可能與抗藥性的產(chǎn)生有關(guān)。有研究者檢測了云南省43株煙草野火病菌對(duì)鏈霉素的敏感性，發(fā)現(xiàn) 25 株表現(xiàn)出中到高水平的耐藥性[15]。由于不科學(xué)使用，鏈霉素很容易產(chǎn)生抗藥性。這可能是導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果不理想的主要原因。

防治細(xì)菌性潰瘍的有效藥劑有抗生素和銅制劑等，但是長期使用抗生素，容易造成細(xì)菌對(duì)抗生素產(chǎn)生抗藥性，以及抗生素在農(nóng)產(chǎn)品和動(dòng)物制品中的富集從而威脅人類健康，人們越來越關(guān)注其潛在風(fēng)險(xiǎn)。結(jié)合該試驗(yàn)結(jié)果，可采用奧力克細(xì)截、多粘枯草芽孢桿菌、寡糖、誘抗素這些生物藥劑，最好混配中生菌素，且要提前施用，越早越好。同時(shí)注意不可長期使用相同的藥劑，注意藥劑的交替使用。

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