肝脂溶顆粒對非酒精性脂肪肝模型大鼠血清Leptin表達的影響※

隋曉丹

（長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院肝脾胃病科，吉林 長春 130021）

本實驗通過觀察肝脂溶顆粒對NAFLD大鼠血清瘦素（Leptin） 表達的影響，及Leptin抵抗在NAFLD中的作用并探明調(diào)節(jié)其作用的傳導途徑，為中醫(yī)臨床干預治療非酒精性脂肪肝提供理論依據(jù)和新的思路。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 Wistar大鼠60只，雄性，體重（200±20）g。

1.2 藥物 肝脂溶顆粒：長春中醫(yī)學院附屬醫(yī)院制劑室，批準文號：長衛(wèi)制藥字 (96)1367號。多烯磷脂酰膽堿膠囊：賽諾非安萬特（北京）制藥有限公司，批準文號：國藥準字H20059010。

2 實驗方法

2.1 非酒精性脂肪肝模型復制方法 大鼠適應環(huán)境1周后隨機分為正常組9只、高脂組51只。正常組予普通飼料喂養(yǎng)，高脂組予高脂飼料（88%基礎飼料、10%豬油、2%膽固醇）喂養(yǎng)，自由飲水。12周后隨機選出7只大鼠（正常組1只，高脂組6只），處死后取肝臟組織進行HE染色，驗證造模情況。

2.2 實驗動物分組及給藥方法 12周后，正常組大鼠普通飼料喂養(yǎng)同時每日給予生理鹽水灌胃。高脂組大鼠隨機分為模型組、多烯磷脂酰膽堿膠囊對照組（簡稱：對照組）、肝脂溶顆粒高、中、低劑量組（簡稱：高、中、低劑量組）。繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)同時每日給予不同藥物進行灌胃（模型組：生理鹽水灌胃1 mL/100 g；對照組：多烯磷脂酰膽堿膠囊水溶液灌胃，按0.14 g/kg體重給藥；高劑量組：100%濃度肝脂溶顆粒水溶液灌胃，按3 g/kg體重給藥；中劑量組：70%濃度肝脂溶顆粒水溶液灌胃，按2.1 g/kg體重給藥；低劑量組：30%濃度肝脂溶顆粒水溶液灌胃，按0.9 g/kg體重給藥），連續(xù)灌胃4周后取材。

2.3 血標本采集 以2%戊巴比妥鈉溶液腹腔內(nèi)注射麻醉，腹主動脈采血4～5 mL，分離血清，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4 觀察指標 血清Leptin采用ELISA法定量測定，按試劑盒說明書規(guī)范操作，并用酶聯(lián)儀在450 nm波長依次測量各孔樣品的光密度 (OD)值。

2.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標準差（）表示。

3 實驗結(jié)果

實驗16周末各組NAFLD大鼠血清Leptin的含量均明顯高于正常組（P＜0.01），差異有顯著統(tǒng)計學意義；模型組大鼠血清Leptin的含量最高，與其它藥物干預組相比有顯著差異（P＜0.01）；高劑量組大鼠血清Leptin的含量明顯低于對照組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義；中劑量組大鼠血清Leptin的含量與對照組相比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；低劑量組大鼠血清Leptin的含量高于高、中劑量組及對照組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義。說明肝脂溶顆粒具有一定降低NAFLD大鼠血清Leptin含量的作用。見表1。

表1 各組大鼠16周末血清Leptin結(jié)果比較 （，ng/mL）

表1 各組大鼠16周末血清Leptin結(jié)果比較 （，ng/mL）

注：與正常組相比，*P＜0.01，**P＜0.05；與模型組相比，ΔP＜0.01，ΔΔP＜0.05；與對照組相比，#P＜0.05，##P〉0.05

1.51±0.27 4.96±0.75*2.50±0.31*△1.93±0.54*△#2.46±0.92*△##3.32±0.16*△#組別 只數(shù) Leptin正常組模型組對照組高劑量組中劑量組低劑量組8 9 8 9 8 9

4 討論

Leptin主要由脂肪細胞合成分泌，主要通過控制食欲、抑制脂肪合成、增加能量消耗3種途徑來調(diào)節(jié)機體脂肪代謝[1]。Leptin參與肝臟內(nèi)的糖代謝及脂肪代謝，如刺激肝糖原的產(chǎn)生，限制合成甘油三酯，提高肝臟及外周組織對胰島素的敏感性[2]。目前廣泛認為存在瘦素-胰島素軸的相互作用，即Leptin通過對胰島β細胞超極化狀態(tài)來控制胰島素的分泌[3]，進而使脂肪的合成及儲存減少，同時胰島素又能夠刺激Leptin的合成，而形成Leptin與胰島素之間的雙向調(diào)節(jié)作用[4]。當Leptin抵抗時，雙向調(diào)節(jié)被破壞，便會導致高胰島素血癥、胰島素抵抗，產(chǎn)生與胰島素相關(guān)的肝內(nèi)脂肪儲積，同時又通過改變胰島素信號的傳遞，而使肝細胞內(nèi)脂肪酸的濃度提高，三酰甘油的合成增加，促使脂肪肝形成。此外，Leptin還作為炎癥-壞死的致病因子之一[5]，參與NAFLD的“二次打擊”，調(diào)節(jié)脂肪肝的炎癥反應，促使脂肪肝發(fā)展為脂肪性肝炎。Leptin還是肝纖維化的啟動因子之一[6]，參與“三次打擊”或“多重打擊”，激發(fā)肝纖維化，促進其最終發(fā)展為肝硬化。

劉鐵軍教授總結(jié)多年治療非酒精性脂肪肝的臨床經(jīng)驗，依據(jù)《臨證指南醫(yī)案·濕》云：“而但濕從內(nèi)生者，必其人膏粱酒醴必度”，非酒精性脂肪肝的發(fā)病多因嗜食肥甘厚味導致?lián)p傷脾胃，運化失司，濕熱內(nèi)蘊，傷及肝膽，疏泄失職，導致氣機郁滯，血脈瘀阻，痰濁瘀積，肝臟脈絡受阻，濕熱瘀積互結(jié)于肝而成脂肪肝。自研肝脂溶顆粒，由決明子、枳椇子、澤瀉等組成。諸藥合用，消而不伐，補而不滯，寒溫并用，藥性平和，共奏清熱利濕、化瘀消積之功效。本實驗結(jié)果表明：肝脂溶顆粒能夠顯著降低血清Leptin表達，有助于改善胰島素抵抗，減少脂肪酸含量，減輕肝臟脂肪變性，從而達到治療脂肪肝的目的。其療效與劑量呈正相關(guān)，且對降低血清Leptin表達效果優(yōu)于多烯磷脂酰膽堿膠囊。高脂飲食誘導致NAFLD大鼠血清Leptin表達顯著增高，這可能是大鼠引起非酒精性脂肪肝的機制之一，肝脂溶顆粒顯著降低了血清Leptin表達，因此，肝脂溶顆粒對非酒精性脂肪肝的防治作用，可能是通過降低血清Leptin表達而完成。

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