開(kāi)窗減壓術(shù)對(duì)成釉細(xì)胞瘤術(shù)前術(shù)后Ki-67蛋白表達(dá)的影響及意義

澈力格爾，夏軼超，李佳樂(lè)，王雨萌，王寧寧，孫靜淳，文 靜，韓 冰*

(1.吉林大學(xué)口腔醫(yī)院 口腔頜面外科，吉林 長(zhǎng)春130021；2．吉林省牙發(fā)育及頜骨重塑與再生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

成釉細(xì)胞瘤(AM)是一種牙源性上皮性腫瘤，約占牙源性腫瘤的60%以上，頭頸部腫瘤的1%左右[1]。大多數(shù)腫瘤發(fā)生于頜骨內(nèi)且多發(fā)生于下頜磨牙區(qū)，常導(dǎo)致頜骨膨大和面部變形[2]。雖屬良性腫瘤但是其局部侵襲性和復(fù)發(fā)率較高。開(kāi)窗減壓術(shù)是一種保守的治療方法，它可以減少囊腔內(nèi)的壓力，促進(jìn)骨骼形成，迅速消除頜面畸形，有利于保存鄰近結(jié)構(gòu)和骨的連續(xù)性，術(shù)后并發(fā)癥少，治療效果好[3]。但目前對(duì)于該方法治療成釉細(xì)胞瘤的分子生物學(xué)機(jī)制尚不明確。Ki-67是一種增殖細(xì)胞相關(guān)抗原[4,5]，高表達(dá)于成釉細(xì)胞瘤中。本研究旨在探究開(kāi)窗減壓治療術(shù)對(duì)成釉細(xì)胞瘤中Ki-67表達(dá)情況改變的影響及意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

病例取自2013-2017年在吉林大學(xué)口腔醫(yī)院就診接受開(kāi)窗減壓術(shù)治療的4名成釉細(xì)胞瘤患者，其中3名男性1名女性患者，年齡分布在22至44歲，平均年齡31歲。本研究中全部病損發(fā)生于下頜骨，無(wú)發(fā)生于上頜骨的病例。所有患者術(shù)后隨訪(fǎng)時(shí)間均在12個(gè)月以上。所有標(biāo)本均用10%中性甲醛溶液固定并石蠟包埋，4 μm 連續(xù)切片，由2 名病理專(zhuān)家確診，根據(jù)2005 年WHO制定的組織學(xué)分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)確診為成釉細(xì)胞瘤[6]。所有患者一期均行開(kāi)窗減壓，并附有術(shù)前術(shù)后隨訪(fǎng)，曲面斷層和CT影像記錄。另取4名來(lái)我院做阻生齒拔除患者正常黏膜和4名接受根治術(shù)的成釉細(xì)胞瘤患者組織作為對(duì)照組。見(jiàn)表1。

表1 開(kāi)窗減壓術(shù)治療的四名患者基本信息

(M：男性，F(xiàn):女性，m:月)

1.2 方法

1.2.1治療方法 經(jīng)過(guò)吉林大學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，治療方案經(jīng)患者同意簽字，根據(jù)患者實(shí)際情況判斷選擇在全麻下進(jìn)行手術(shù)。病變區(qū)切口，顯露囊性腫物，見(jiàn)腫物成囊性，摘除。切取標(biāo)本做術(shù)中快速冷凍活檢及常規(guī)組織病理學(xué)檢查。沖洗，止血，放置油紗布包裹碘仿紗條，置于創(chuàng)腔，組織瓣復(fù)位，嚴(yán)密縫合創(chuàng)口。術(shù)后第7天拆除縫線(xiàn)，去除碘仿油紗條，徹底沖洗，放置新碘仿油紗條。出院后教會(huì)患者沖洗創(chuàng)口，一周換一次紗條，連續(xù)更換3至4次后做塞制器。2至3個(gè)月定期復(fù)查，拍攝曲面斷層及CT。當(dāng)術(shù)后復(fù)查發(fā)現(xiàn)患者有囊腔已經(jīng)無(wú)法縮小，或開(kāi)窗口已經(jīng)閉塞，需做二期手術(shù)。對(duì)于對(duì)照組4個(gè)根治性手術(shù)患者，根據(jù)病變范圍，縱行向下頜骨下緣方向鋸開(kāi)，將腫瘤完整摘除，取出重建夾板彎制，與下頜骨體貼合后螺絲固定于下頜骨。

1.2.2免疫組化技術(shù)檢測(cè)Ki-67的表達(dá) 采用免疫組化SP染色法。在染色前，切片置于60 ℃ 烤箱中烤片60 min，脫蠟水化后，置于枸櫞酸緩沖液(0.01 mol/L,pH 6.0 ) 中，進(jìn)行抗原修復(fù)。3%過(guò)氧化氫37℃孵育15 min后，一抗(Anti-MKI67 Rabbit Ployclonal Antibody，上海生工公司)，羊抗小鼠IgG二抗(北京中杉金橋公司)，按說(shuō)明滴加。室溫孵育30 min，DAB 顯色。其余均嚴(yán)格遵循試劑盒使用說(shuō)明操作。應(yīng)用PBS 代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用Image-Pro Plus 軟件進(jìn)行各組Ki-67的定量分析，所得的數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS 22.0軟件行配對(duì)t檢驗(yàn)分析開(kāi)窗減壓術(shù)前術(shù)后成釉細(xì)胞瘤中Ki-67表達(dá)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 影像學(xué)表現(xiàn)

三名開(kāi)窗手術(shù)療效好的患者，其囊腔明顯縮小，囊腫周?chē)行鹿切纬?，從曲面斷層和CT影像可知囊腔縮小，病損周?chē)蛑行挠懈呙芏裙切纬?圖1)。

圖1A和C是同一患者術(shù)前曲面斷層片和CT照片。B和D是患者術(shù)后20月復(fù)診曲面斷層片和CT照片?？芍仪蛔冃?，囊腫周?chē)行鹿切纬伞?/p>

2.2 免疫組化結(jié)果

Ki-67在所有8名成釉細(xì)胞瘤患者組織中的表達(dá)量為80.85%±8.36%，而在正常組織中其表達(dá)量?jī)H為60.33%±6.3%。Ki-67在成釉細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)高于正常組織中表達(dá)，且差異顯著(P<0.01)。在4名接受開(kāi)窗減壓治療的成釉細(xì)胞瘤患者組織中表達(dá)量為65.72%±11.45%，開(kāi)窗減壓治療一段時(shí)間后，開(kāi)窗減壓療效好的3名患者組織中表達(dá)量明顯降低到55.06%±5.04%，且較開(kāi)窗治療前有顯著差異(P<0.01)。而開(kāi)窗減壓療效不好的1名患者其表達(dá)量為67.35%±2.6%，較開(kāi)窗治療前無(wú)明顯改變，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。4名進(jìn)行根治性手術(shù)的成釉細(xì)胞瘤患者組織中Ki-67表達(dá)量為82.11%±7.33%，這比開(kāi)窗減壓療效好的三名患者開(kāi)窗減壓治療一段時(shí)間后組織中Ki-67表達(dá)量高，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖2。

圖2A是正常黏膜染色結(jié)果，B是根治術(shù)患者組織染色結(jié)果，C和D開(kāi)窗減壓治療有效患者術(shù)前術(shù)后組織染色結(jié)果，E和F是開(kāi)窗減壓術(shù)治療無(wú)效果術(shù)前術(shù)后組織染色結(jié)果。LsABX400

3 討論

WHO 分類(lèi)將成釉細(xì)胞瘤根據(jù)其臨床病理行為不同分為實(shí)性/多囊型、骨外/外周型、促結(jié)締組織增生型和單囊型[7]。其生長(zhǎng)具有輕微的男性?xún)A向性，大多數(shù)腫瘤發(fā)生于頜骨內(nèi)并且多發(fā)生于下頜骨磨牙區(qū)，常導(dǎo)致頜骨的膨大以及面部變形。雖屬于良性腫瘤，但其局部侵襲性，術(shù)后復(fù)發(fā)率高，也有惡變、甚至遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的零星報(bào)道[2,8]。

對(duì)于成釉細(xì)胞瘤這類(lèi)骨質(zhì)破壞嚴(yán)重的頜骨囊腫，常規(guī)的治療方法是將病變處骨質(zhì)完全切除，用自體骨移植或金屬材料進(jìn)行修復(fù)，但手術(shù)復(fù)雜，對(duì)患者損傷較大。而開(kāi)窗減壓術(shù)雖然療程長(zhǎng)，但能有效避免可能造成的骨折或缺損，可降低手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)與難度，減輕患者痛苦與經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[9]。同時(shí)在治療牙源性腫瘤的優(yōu)點(diǎn)是可以在局部麻醉下進(jìn)行手術(shù)，并且可以保護(hù)所涉及的牙齒免于拔除和大面積的手術(shù)切除，從而避免神經(jīng)損傷和可能造成的畸形[10]。然而有關(guān)開(kāi)窗減壓術(shù)治療成釉細(xì)胞瘤的機(jī)制研究較少。

以往的研究表明，在開(kāi)窗減壓術(shù)后，牙源性疾病的內(nèi)層似乎變得更厚，組織學(xué)上的襯里細(xì)胞層發(fā)生改變并且類(lèi)似于正常的口腔黏膜[11]。有關(guān)開(kāi)窗減壓術(shù)在其他類(lèi)型牙源性腫瘤中的作用顯示，開(kāi)窗后腫瘤中上皮層及纖維囊壁層細(xì)胞形態(tài)，層次結(jié)構(gòu)等均發(fā)生改變[12]。細(xì)胞的增殖、分化、衰老和凋亡均是細(xì)胞周期依賴(lài)性。幾乎所有的腫瘤都有細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制的破壞導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)失控、分化受阻、凋亡異常的特征[13]。細(xì)胞增殖在一個(gè)活體生物的細(xì)胞生長(zhǎng)和組織的新陳代謝動(dòng)態(tài)平衡中起到關(guān)鍵作用。關(guān)于成釉細(xì)胞瘤的研究發(fā)現(xiàn)，許多因子參與腫瘤進(jìn)展，包括參與細(xì)胞粘附的蛋白質(zhì)、骨重建，凋亡調(diào)節(jié)，細(xì)胞周期/細(xì)胞增殖和表皮生長(zhǎng)因子基因等的突變等[14]。

Ki-67是一種細(xì)胞增殖相關(guān)抗原，它的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。它是一種耐久性抗原，可以方便，經(jīng)濟(jì)地進(jìn)行從石蠟包埋的腫瘤組織切片取回，許多研究應(yīng)用其作為預(yù)后的價(jià)值標(biāo)志物[15]。之前的研究表明Ki-67高表達(dá)于成釉細(xì)胞瘤中[16]。有學(xué)者認(rèn)為在其他腫瘤中Ki-67表達(dá)與WNT-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)[17]，而與此同時(shí)WNT信號(hào)通路又參與成骨細(xì)胞的調(diào)控[18]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在3名開(kāi)窗減壓療效好的患者中，Ki-67術(shù)后表達(dá)較術(shù)前降低。開(kāi)窗前Ki-67的高表達(dá)解釋了成釉細(xì)胞瘤的侵襲性及浸潤(rùn)性生長(zhǎng)的特點(diǎn)。而開(kāi)窗有效果時(shí)，內(nèi)環(huán)境的改變，包括囊腔壓力的改變，可能是導(dǎo)致Ki-67表達(dá)降低的原因之一。同時(shí)Ki-67的表達(dá)降低可能調(diào)節(jié)了WNT信號(hào)通路對(duì)于成骨細(xì)胞的調(diào)控，從而影響了開(kāi)窗后局部囊腔變小和新骨的形成，并最終達(dá)到治療效果。

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