女萎質(zhì)量標準研究

朱琳，周謐，楚楚

(1.南通市食品藥品監(jiān)督檢驗中心，江蘇 南通 226006；2.浙江工業(yè)大學 藥學院，浙江 杭州 310032)

女萎為毛茛科植物女萎ClematisapiifoliaDC.的干燥地上部分，生于海拔150～1000 m的山野林邊。在我國分布于江蘇南部、浙江、安徽大別山以南、江西、福建，朝鮮、日本亦有產(chǎn)出[1]。女萎始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[2]，列為草部上品。唐《新修本草》中將女萎列為草部中品，謂：“其葉似白蘞，蔓生，花白，子細。荊襄之間名為女萎，亦名蔓楚”[3]。女萎具有舒筋活血、祛風止痛、消食止痢、利尿的功效，用于筋骨疼痛、牙痛、喉痛、瀉痢脫肛、驚癇寒熱、妊婦浮腫[4]。女萎藥材為《江蘇省中藥材標準》1989版收載品種，是江蘇省習慣用藥。原有的標準檢驗項目較少，不能科學評價和全面控制女萎的質(zhì)量。為了完善該標準，提高藥材質(zhì)量，保證中醫(yī)臨床用藥的安全有效，本實驗對5批不同產(chǎn)地女萎的藥材性狀、顯微特征、薄層鑒別及各項檢查進行了深入研究，完善了女萎的質(zhì)量控制方法，為女萎藥材質(zhì)量標準的提高提供參考。

1 儀器與試藥

奧林巴斯BX51光學顯微鏡(日本Olympus 公司)；BT125D電子天平(德國賽多利斯公司)；CAMAG ATS4全自動點樣儀(瑞士CAMAG公司)；ZF-7型暗箱三用紫外線分析儀(上海嘉鵬科技有限公司)；UN55通用烘箱(德國Memmert公司)；M110馬弗爐(美國Thermofisher公司)。

槲皮素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100081-200907，使用前不需干燥處理，供HPLC法測定用，按C15H10O7計，純度為96.5%)；硅膠G預制板(德國Merck公司)；水為超純水，其余試劑均為分析純。

5批女萎樣品均收集自產(chǎn)地，經(jīng)江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院胡浩彬主任中藥師鑒定為毛茛科植物女萎ClematisapiifoliaDC.的地上部分，晾干，樣品信息見表1。

表1 采集的女萎樣品信息表

2 方法與結(jié)果

2.1 藥材性狀

老莖呈類方形，嫩莖呈類圓形，長達數(shù)米，直徑1～5 mm。表面灰綠色或棕綠色，通常有6條較明顯的縱棱，被白色柔毛；質(zhì)脆易斷，斷面不平坦，木部黃白色，可見多數(shù)細導管孔，髓部疏松。葉對生，為三出復葉，葉片多皺縮破碎；完整葉片展平后呈卵形或?qū)捖研危斏∪~片較兩側(cè)小葉片大，通常有不明顯的3淺裂，邊緣有缺刻狀粗鋸齒，暗綠色，兩面有短白毛。總?cè)~柄長2～9 cm，常扭曲。有的帶有花果。氣微，味微苦、澀。

2.2 顯微特征

粉末灰綠色。葉上表皮細胞表面觀呈類多角形或不規(guī)則形，垂周壁微彎曲或較平直；下表皮細胞垂周壁波狀彎曲，氣孔不定式，副衛(wèi)細胞4～6個。非腺毛多見，單細胞，長約170～520 μm，壁較厚，基部略膨大。螺紋導管及具緣紋孔導管多見。花粉粒淡黃色，呈類圓形，直徑18～25 μm，外壁表面有細顆粒狀雕紋，具3個萌發(fā)孔。結(jié)果見圖1。

注：A.葉上表皮細胞；B.葉下表皮細胞；C.非腺毛；D.花粉粒；E.螺紋導管；F.具緣紋孔導管。圖1 女萎粉末顯微特征圖

2.3 薄層色譜鑒別

取本品粉末1 g，加80%甲醇50 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水-乙醚(1∶1)混合溶液60 mL使溶解，靜置分層，棄去乙醚液，水液加乙醚提取2次，每次20 mL，棄去乙醚液，水液加鹽酸5 mL，置水浴中水解1 h，取出，迅速冷卻，用乙醚提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，用水30 mL洗滌，棄去水液，乙醚液揮干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。取槲皮素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則502)試驗，吸取供試品溶液及對照品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(25∶20∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，在105 ℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，見圖2。

注：S.槲皮素；1～5.女萎供試品。圖2 女萎薄層色譜圖(12 ℃，相對濕度：50%)

2.4 檢查及浸出物

按《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則對5批樣品進行水分、總灰分和浸出物測定，結(jié)果見表2。

表2 不同批次女萎水分、總灰分和浸出物的測定結(jié)果(n=2) %

3 討論

3.1 薄層色譜鑒別

實驗研究中，對不同提取方式(鹽酸水解后乙酸乙酯萃取、甲醇提取后鹽酸水解)進行了考察，確定了最佳樣品前處理方法。經(jīng)考察，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定，所得薄層色譜斑點清晰、一致。

另對不同展開系統(tǒng)[甲苯-乙酸乙酯-甲酸(25∶20∶1)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)的上層溶液、正己烷-乙酸乙酯-甲酸(7∶5∶0.8)]、不同薄層板(默克硅膠G薄層板、自制硅膠G薄層板)等薄層色譜條件進行考察，結(jié)果表明，按上述2.3項下描述的薄層色譜條件實驗，分離效果佳，重現(xiàn)性好，斑點顯色穩(wěn)定、清晰一致。本實驗還考察了不同溫、濕度條件(10 ℃，相對濕度：70%；19℃，相對濕度：70%；19 ℃，相對濕度：20%)的展開效果，結(jié)果表明本薄層實驗的耐藥性很好。

3.2 浸出物的測定

文獻調(diào)研表明，女萎化學成分報道較少，僅《中藥大辭典》第二版中簡要提及到根含乙酰齊墩果酸(acetyl oleanolic acid)、齊墩果酸(oleanolic acid)、常春藤皂苷元(hederagenin)、豆甾醇(stigmasterol)、β-谷甾醇(β-sitosterol)等成分，花、葉含槲皮素(quercetin)、山柰酚(kaempferol)等黃酮類化合物[5]。另含棕櫚酸、植醇、9(Z)，12(Z)-十八碳二烯酸、亞麻酸等揮發(fā)性成分[6]。綜合上述化學成分的特性，建立浸出物檢查項作為控制藥品質(zhì)量的指標之一。本實驗考察了不同浸出方法(熱浸法、冷浸法)、不同溶劑(水、乙醇)，結(jié)果表明各種溶劑采用熱浸法浸出量均高于冷浸法，水和乙醇兩種溶劑熱浸法的浸出量無明顯差異，但考慮到女萎有效化學成分的特性，因此，確定以乙醇為溶劑，采用熱浸法測定女萎的浸出物。

[1] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志：第28卷[M].北京：科學出版社，1980：193.

[2] 孫星衍，孫馮翼.神農(nóng)本草經(jīng)[M].輯佚本.太原：山西科學技術(shù)出版社，1991：14-15.

[3] 蘇敬.新修本草[M].輯復本.合肥：安徽科學技術(shù)出版社，1981：225.

[4] 江蘇省衛(wèi)生廳.江蘇省中藥材標準[M].南京：江蘇科學技術(shù)出版社，1989：96.

[5] 南京中醫(yī)藥大學.中藥大辭典：上冊[M].2版.上海：上海科學技術(shù)出版社，2006：320-321.

[6] 宋龍，張雯，吳靳榮，等.女萎揮發(fā)油成分分析[J].上海中醫(yī)藥大學學報，2006，20(4)：83-84.