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    Nrf2介導姜黃素對四氯化碳誘導鯽魚肝損傷的保護作用

    2018-03-07 06:34:07張春云曹麗萍杜金梁顧?quán)嶇?/span>殷國俊GalinaJeney
    江蘇農(nóng)業(yè)學報 2018年1期
    關(guān)鍵詞:素處理共培養(yǎng)鯽魚

    張春云, 曹麗萍 , 杜金梁, 賈 睿, 顧?quán)嶇?殷國俊,, Galina Jeney

    (1.南京農(nóng)業(yè)大學無錫漁業(yè)學院,江蘇 無錫 214081; 2.中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心,農(nóng)業(yè)部淡水漁業(yè)和種質(zhì)資源利用重點實驗室,江蘇 無錫 214081; 3.中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心,農(nóng)業(yè)部魚類免疫藥理學國際聯(lián)合實驗室,江蘇 無錫 214081; 4.Research Institute for Fisheries, Aquaculture and Irrigation, Anna light 8, Szarvas H-4440, Hungary)

    近年來中國集約化水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)模不斷提高,但也隨之產(chǎn)生諸多問題,如養(yǎng)殖密度過高、過度投喂、養(yǎng)殖水體污染、藥物濫用、飼料營養(yǎng)組分不平衡等,造成魚類病害頻發(fā),其中以肝損傷為特征的疾病尤為頻繁,給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來極大的經(jīng)濟損失[1]。肝臟是魚類物質(zhì)和能量代謝的重要器官[2],肝損傷或病變往往導致魚類機體代謝機能紊亂和抗病力降低,甚至導致死亡。魚類肝損傷致病因素很多,但其共同點為均伴隨著嚴重的氧化應激,產(chǎn)生大量的活性氧自由基(ROS),引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應,破壞細胞膜的正常結(jié)構(gòu)和功能。因此,有研究者認為可通過抑制肝組織內(nèi)氧化應激或提高抗氧化能力來防治肝損傷[3]。

    中草藥由于其毒副作用小,不易在魚體內(nèi)富集,在水產(chǎn)動物病害防治中被廣泛應用。已有研究結(jié)果表明,一些中草藥提取物具有抗氧化作用,對魚類肝膽綜合征肝損傷有一定的治療作用[4-5]。姜黃為常用中草藥,主要來源于姜科植物姜黃(CurcumalongaL.)的干燥根莖。姜黃素為姜黃中主要藥用活性成分,是一種酸性多酚類物質(zhì)。在哺乳動物中,研究證實姜黃素具有抗炎[6]、抗氧化[7]、抗突變[8]、護肝[9-10]等功效。在水生動物中,研究發(fā)現(xiàn)姜黃素可促進魚類生長,改變腸道酶活性[11-12]。

    精密肝切片(Precision-cut liver slices,PCLS)技術(shù)是一種新的介于器官與細胞水平間的肝臟體外實驗技術(shù)。該技術(shù)無需使用膠原酶,避免了細胞分離過程中膠原酶對細胞造成的損傷,且能夠保存較完整的組織結(jié)構(gòu),維持細胞間及細胞與基質(zhì)間的聯(lián)系,既保留了游離肝細胞的功能特點,又維持了組織的完整性,因而能最大限度地模擬體內(nèi)狀態(tài),被廣泛應用于哺乳動物藥理學和毒理學研究[13-15]。而在水產(chǎn)動物中,通過該技術(shù)研究姜黃素保肝機理的報道還未發(fā)現(xiàn)。

    核因子NF-E2相關(guān)因子(Nuclear factor-ery throid 2-related,Nrf2)是機體對抗氧化應激最主要的調(diào)節(jié)因子[16]。正常狀態(tài)下,Nrf2與胞漿蛋白伴侶分子Keap1(Kelch-like ECH-associated protein1)結(jié)合處于相對抑制狀態(tài)。當受到氧化應激刺激時,Nrf2被激活與Keap1解離進入胞質(zhì)啟動Ⅱ相解毒酶及抗氧化基因的表達,隨后Nrf2與抗氧化反應元件(Antioxidant response element, ARE)相結(jié)合,啟動下游相關(guān)抗氧化酶基因表達,使細胞抗氧化應激能力增強[17]。在小鼠中,姜黃素可抑制四氯化碳(CCl4)誘導的肝損傷并促進Nrf2 mRNA、Keap1 mRNA及蛋白質(zhì)表達[18-19]。在水產(chǎn)生物中還未見相關(guān)報道。

    本研究采用PCLS技術(shù)分離鯽魚肝組織,并進行體外培養(yǎng)。以CCl4誘導建立肝組織損傷模型。通過一些肝功能生化指標的變化,評價姜黃素對鯽魚肝組織的保護作用。同時在分子水平探究Nrf2和Keap1基因在姜黃素保肝中的作用,為魚類保肝藥物的研究和開發(fā)提供科學依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗用魚

    鯽魚(Carassiusauratus)取自中國水產(chǎn)科學院淡水漁業(yè)研究中心養(yǎng)魚場。大小規(guī)格為500 g左右,在25 ℃循環(huán)水中飼養(yǎng)7 d。

    1.2 藥品、試劑及儀器

    姜黃素(Curcumin)、二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide, DMSO)、1640培養(yǎng)基、鏈霉素和青霉素購自Sigma公司(美國),胎牛血清(FBS)、48孔板、12孔板購于GIBCOGO公司(美國),CCl4(分析純)購于國藥集團化學試劑有限公司(上海),谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、超氧化物歧化酶(SOD)、堿性磷酸酶(AKP)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、乳酸脫氫酶(LDH)、過氧化氫酶(CAT)、總抗氧化能力(T-AOC)及谷胱甘肽(GSH)試劑盒購自南京建成生物工程研究所科技有限公司,Nrf2 mRNA、Keap1 mRNA總RNA抽提試劑盒及實時熒光定量PCR試劑盒購于TaKaRa公司(大連)。

    1.3 鯽魚肝切片的制備和培養(yǎng)

    將鯽魚消毒麻醉后,無菌條件下于超凈臺內(nèi)取肝組織,置于含青鏈霉素混合液(Penicillin-Streptomycin solution)的磷酸鹽緩沖夜(Phosphate buffered solution, PBS)中,持續(xù)通入含95% O2和5% CO2的混合氣體。將肝組織在PBS中清洗3遍,修整肝組織成體積為 0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm大小,包埋于低熔點膠內(nèi)進行切片操作,切片厚度為300 μm。選取完整切片置于含5%新生小牛血清(FCS)1640培養(yǎng)基的48孔培養(yǎng)板中,每組4孔,每孔6片,于27 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)備用。

    1.4 肝切片分組與處理

    將肝組織切片放置48孔板內(nèi),預培養(yǎng)1 h后,吸出培養(yǎng)基。加入CCl4和不同濃度的姜黃素培養(yǎng)基,觀察姜黃素對四氯化碳致肝損傷的保護作用。分組如下:空白對照組,加入1640培養(yǎng)基培養(yǎng)8 h,棄培養(yǎng)基,用1640培養(yǎng)基洗1遍,加入新的1640培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4 h,收集上清液及肝組織切片。CCl4損傷對照組,用1640培養(yǎng)基培養(yǎng)8 h,棄培養(yǎng)基,用1640培養(yǎng)基洗1遍,加入12 mmol/L CCl4繼續(xù)培養(yǎng)4 h,收集上清液及肝組織切片。姜黃素對照組,加入1640培養(yǎng)基養(yǎng)8 h后,棄培養(yǎng)基,用1640培養(yǎng)基洗1遍,換10 μg/ml姜黃素繼續(xù)培養(yǎng)4 h,收集上清液與組織切片。姜黃素處理組,用1640培養(yǎng)基培養(yǎng)4 h后,棄培養(yǎng)基,加入含不同濃度(1 μg/ml、5 μg/ml和10 μg/ml)姜黃素的1640培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4 h,用1640培養(yǎng)基洗1遍后,再加入含12 mmol/L CCl4的1640培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)4 h,收集上清液與組織切片。每組設4個重復。

    1.5 生化指標測定

    按照試劑盒操作說明分別測定培養(yǎng)上清液中GPT、GOT、LDH、AKP活性,以及肝組織勻漿中SOD、GSH-Px活性和腺苷三磷酸(ATP)、MDA、GSH、TP、Alb含量。

    1.6 實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測Nrf2 mRNA和Keap1 mRNA表達

    收集肝切片組織,加入適量TRIZOL試劑(TaKaRa公司產(chǎn)品)進行勻漿,參照RNAiso Reagent (TaKaRa公司產(chǎn)品)說明書提取總RNA。

    采用紫外-可見分光光度計(Gene Quant1300),測定RNA濃度和純度(OD260/OD280值達到 1.8~2.0為符合標準),用DEPC水調(diào)至適當濃度。RT-PCR反應體系:總RNA 10 μg,OligodT(50 μmol/L) 2 μl,反轉(zhuǎn)錄緩沖液8 μl,dNTP(10 mmol/L) 4 μl,RNase inhibitor(40 U/μl) 1 μl,M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶(200 U/μl) 1 μl,其余為RNase free dH2O,反應體系總體積40 μl。實時熒光定量PCR反應按照ExScriptTMRT-PCR Kit(TaKaRa公司產(chǎn)品)說明書,在熒光定量PCR檢測系統(tǒng)(ABI PRISM7500 sequence detection system)上進行。反應條件:95 ℃ 30 s;95 ℃ 30 s,62 ℃ 34 s,72 ℃ 45 s,33個循環(huán);72 ℃延伸5 min。PCR產(chǎn)物進行2.5%瓊脂糖凝膠電泳分析。內(nèi)參引物及基因特異引物采用Primer premier 5.0軟件設計,由上海杰瑞生物技術(shù)有限公司合成。目的基因引物序列如下:Nrf2基因正向引物為5′-GCGAGCGTAGCTCCAGTCTGA-3′,反向引物5′-AAGGCTTGCCGTGCTCGTCT-3′;Keap1基因正向引物為5′-TGCGTGTTGTTCGGGCTCCT-3′,反向引物TCTGGGCGTGTTGAGCGGAG-3′;β-actin基因正向引物為5′-TTGAGCAGGAGATGGAACCG-3′,反向引物5′-AGAGCCTCAGGGCAACGGAAA-3′。

    1.7 數(shù)據(jù)分析

    試驗數(shù)據(jù)用SPSS19.0進行處理分析。采用One-Way ANOVA檢驗法進行顯著性分析,結(jié)果以平均值±標準差表示。

    2 結(jié) 果

    2.1 姜黃素對鯽魚肝切片活力的影響

    圖1顯示,鯽魚肝切片經(jīng)CCl4處理后ATP含量明顯降低,僅為空白對照的60.8% (P<0.01)。加入不同濃度姜黃素后,肝切片ATP活力明顯上升,姜黃素濃度為1 μg/ml和5 μg/ml時,肝切片ATP活力活性顯著提高(P<0.05)。

    2.2 姜黃素對鯽魚肝切片中GPT、GOT、LDH及AKP活性的影響

    鯽魚肝切片經(jīng)過CCl4損傷后,引起細胞內(nèi)酶的釋放,培養(yǎng)上清液中GPT、GOT、LDH及AKP的活性明顯增加(P<0.01)(圖2)。姜黃素處理組中,GPT、GOT、AKP及LDH酶活性較CCl4對照組降低,其中1 μg/ml和5 μg/ml姜黃素處理組中,4種酶的活性被顯著抑制(P<0.01或P<0.05),但10 μg/ml姜黃素對4種酶活性的影響不顯著。

    1:空白對照組;2:CCl4損傷對照組(肝切片與12 mmol/L CCl4共培養(yǎng));3:姜黃素對照組(肝切片與10 μg/ml姜黃素共培養(yǎng));4:1 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組;5:5 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組;6:10 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組。*、**分別表示與CCl4對照組相比差異顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)。圖1 姜黃素對CCl4損傷的鯽魚肝切片中ATP含量的影響Fig.1 Effects of curcumin on ATP content in CCl4-treated precision-cut liver slices in Carassius auratus

    2.3 姜黃素對鯽魚肝切片中Alb、TP含量的影響

    圖3表明,與空白對照組相比,鯽魚肝組織中TP、Alb含量因CCl4的作用而明顯下降(P<0.01)。用5 μg/ml姜黃素處理后, 鯽魚肝切片中TP、Alb含量顯著高于CCl4對照組。

    2.4 姜黃素對鯽魚肝切片中SOD、CAT、POD活性及總抗氧化能力(T-AOC)的影響

    CCl4可顯著降低鯽魚肝組織中SOD、CAT、POD活性和T-AOC(圖4)。而1 μg/ml姜黃素處理后,SOD、CAT、POD活性及T-AOC均明顯升高(P<0.05), 同時5 μg/ml姜黃素處理后,POD和CAT活性也顯著提高。

    1:空白對照組;2:CCl4損傷對照組(肝切片與12 mmol/L CCl4共培養(yǎng));3:姜黃素對照組(肝切片與10 μg/ml姜黃素共培養(yǎng));4:1 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組;5:5 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組;6:10 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組。*、**分別表示與CCl4對照組相比差異顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)。圖2 姜黃素對CCl4損傷的鯽魚肝切片中GPT、GOT、LDH及AKP酶活性的影響Fig.2 Effects of curcumin on GPT, GOT, LDH and AKP activities in CCl4-treated precision-cut liver slices in Carassius auratus

    1:空白對照組;2:CCl4損傷對照組(肝切片與12 mmol/L CCl4共培養(yǎng));3:姜黃素對照組(肝切片與10 μg/ml姜黃素共培養(yǎng));4:1 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組;5:5 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組;6:10 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組。*、**分別表示與CCl4對照組相比差異顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)。圖3 姜黃素對CCl4損傷的鯽魚肝切片中Alb和TP含量的影響Fig.3 Effects of curcumin on contents of Alb and TP in CCl4-treated precision-cut liver slices in Carassius auratus

    1:空白對照組;2:CCl4損傷對照組(肝切片與12 mmol/L CCl4共培養(yǎng));3:姜黃素對照組(肝切片與10 μg/ml姜黃素共培養(yǎng));4:1 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組;5:5 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組;6:10 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組。*、**分別表示與CCl4對照組相比差異顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)。圖4 姜黃素對CCl4損傷的鯽魚肝切片中SOD、CAT、POD活性及總抗氧化能力(T-AOC)的影響Fig.4 Effects of curcumin on the activities of SOD, CAT and POD and total antioxidant capacity (T-AOC) in CCl4-treated precision-cut liver slices in Carassius auratus

    2.5 姜黃素對鯽魚肝切片中GSH-Px活性及GSH和MDA含量的影響

    圖5顯示,CCl4可顯著降低GSH-Px活性和GSH含量,導致MDA大量生成(P<0.05)。與CCl4對照組相比,1 μg/ml姜黃素顯著抑制GSH-Px活性和GSH含量的降低。MDA含量在不同濃度姜黃素處理組中也顯著降低(P<0.05)。

    1:空白對照組;2:CCl4損傷對照組(肝切片與12 mmol/L CCl4共培養(yǎng));3:姜黃素對照組(肝切片與10 μg/ml姜黃素共培養(yǎng));4:1 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組;5:5 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組;6:10 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組。*、**分別表示與CCl4對照組相比差異顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)。圖5 姜黃素對CCl4損傷的鯽魚肝切片中GSH-Px活性及GSH和MDA含量的影響Fig.5 Effects of curcumin on GSH-Px activity and contents of GSH and MDA in CCl4-treated precision-cut liver slices in Carassius auratus

    2.6 姜黃素對鯽魚肝切片中Nrf2、Keap1 mRNA表達的影響

    與空白對照相比,CCl4顯著抑制了Nrf2、Keap1基因表達(圖6)。而姜黃素處理后,Nrf2基因表達量明顯提升,但姜黃素對Keap1基因表達量無明顯影響。

    1:空白對照組;2:CCl4損傷對照組(肝切片與12 mmol/L CCl4共培養(yǎng));3:姜黃素對照組(肝切片與10 μg/ml姜黃素共培養(yǎng));4:1 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組;5:5 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組;6:10 μg/ml姜黃素+12 mmol/L CCl4處理組。*、**分別表示與CCl4對照組相比差異顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)。圖6 姜黃素對CCl4損傷的鯽魚肝切片中Nrf2及Keap1基因表達量的影響Fig.6 Effects of curcumin on Nrf2 and Keap1 gene expression in CCl4-treated precision-cut liver slices in Carassius auratus

    3 討 論

    CCl4是一種常見的肝臟毒物,可誘導肝細胞或組織構(gòu)建損傷模型[20-21]。本實驗室前期的研究結(jié)果顯示,CCl4也適用于魚類肝損傷模型的構(gòu)建[22]。 CCl4主要是經(jīng)過細胞色素P450酶進行代謝,產(chǎn)生三氯甲基和氯自由基,引起脂質(zhì)過氧化,最終導致肝細胞壞死[23]。本試驗通過CCl4損傷鯽魚肝切片,探討姜黃素對肝組織的保護作及對Nrf2-ARE抗氧化通路的影響。

    腺苷三磷酸(Adenosine triphosphate, ATP) 是生物體內(nèi)組織細胞生命活動所需能量的直接來源,ATP含量的變化直接影響器官的能量代謝[24]。細胞內(nèi)缺少ATP,會導致?lián)p傷甚至死亡。因此,ATP含量常作為評價器官活力的重要指標[25]。本試驗中,CCl4處理后,肝切片活力明顯降低,而經(jīng)不同濃度的姜黃素處理后,肝切片活力有所上升。表明姜黃素可有效抑制四氯化碳對肝組織的損傷。

    GPT和GOT為肝臟內(nèi)兩種轉(zhuǎn)氨酶,當肝細胞受到損傷或膜通透性增大時,該酶就會從肝細胞漿中逸出細胞外[26]。GPT活性升高表明胞漿受損,細胞膜通透性增加,GOT活性升高表明肝細胞線粒體受損[27-28]。本試驗中,經(jīng)CCl4處理后,肝切片培養(yǎng)上清液中GPT、GOT、LDH及AKP活性明顯上升,表明肝細胞受到損傷。而用姜黃素干預后,這些酶活性顯著降低,表明姜黃素可促進鯽魚肝細胞膜系統(tǒng)的修復。在小鼠的研究中也發(fā)現(xiàn)了類似的結(jié)果,Naik等[29]用酒精誘導小鼠肝組織損傷后,GPT、GOT和LDH活性顯著升高,而用姜黃素處理后,這些酶活性顯著降低。

    白蛋白(Albumin, Alb)的合成與分泌是由肝臟實質(zhì)部分完成的。當肝臟受到自由基(ROS)損害時,機體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的完整性被破壞[30],蛋白質(zhì)的合成速率降低。試驗結(jié)果表明CCl4可明顯降低蛋白質(zhì) (Alb、TP) 含量,這與Folmar等[31]研究結(jié)果一致。姜黃素處理顯著抑制CCl4誘導的Alb和TP含量降低,與寧康健等[32]研究結(jié)果類似,說明姜黃素可以促進蛋白質(zhì)合成,保護受損傷的肝組織。

    諸多研究結(jié)果表明,魚類肝損傷與抗氧化系統(tǒng)的破壞以及脂質(zhì)過氧化有關(guān)[32-33]。在魚類中,CCl4可誘導大量ROS形成,導致抗氧化物質(zhì)如SOD、CAT和GSH等的大量消耗。同時ROS還可以攻擊細胞膜,引起脂質(zhì)過氧化,導致細胞膜結(jié)構(gòu)和功能的變化[34]。本試驗中也有類似現(xiàn)象,當鯽魚肝切片在CCl4中暴露4 h后,其抗氧化物質(zhì)(SOD、CAT、POD、GSH-Px活性及GSH含量和T-AOC)顯著降低,同時脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量顯著升高,這些變化反映了肝細胞受自由基損壞的程度[35]。在哺乳動物中,姜黃素的保肝作用主要與其抗氧化能力相關(guān)[36]。姜黃素通過提高機體抗氧化能力,減少細胞膜受到的損傷,同時改善脂質(zhì)過氧化作用,發(fā)揮保護肝臟的作用[37-38]。Magda等[39]研究發(fā)現(xiàn)姜黃素可以顯著抑制酒精誘導的肝細胞損傷中抗氧化酶(SOD、CAT及GSH-Px)活力的降低。鐘越等[37]也報道姜黃素對CCl4誘導的脂質(zhì)過氧化物MDA的產(chǎn)生具有顯著的抑制作用。本試驗結(jié)果顯示,1 μg/ml和5 μg/ml姜黃素可抑制鯽魚肝組織中抗氧化酶(SOD、CAT、POD和GSH-Px)活性以及GSH含量的降低,有利于清除由CCl4誘導產(chǎn)生的自由基,進而降低脂質(zhì)過氧化物的形成,保護肝細胞。

    Keap1-Nrf2/ARE信號通路對抗氧化酶表達起著調(diào)控的作用[39-40],其中Nrf2是該通路中的關(guān)鍵因子。在細胞質(zhì)中Nrf2與其負調(diào)控蛋白Keap1偶聯(lián)后以失活狀態(tài)固定于胞質(zhì)內(nèi),在自由基的作用下,Keap1結(jié)構(gòu)改變,與Nrf2解偶聯(lián)通過氧化應激調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)錄活性,激活抗氧化反應元件(ARE)和抗氧化酶Ⅱ相解毒酶,啟動下游抗氧化酶基因的轉(zhuǎn)錄[41-43],調(diào)控細胞內(nèi)抗氧化酶的表達,因而Keap1-Nrf2信號通路是抗氧化應激機制中較為重要的通路[44-45]。CCl4誘導大鼠肝損傷中,增強Nrf2蛋白表達可顯著提高抗氧化酶活性,有效改善肝組織損傷程度[46-47]。本試驗結(jié)果顯示,CCl4損傷后,鯽魚肝組織Nrf2 mRNA、Keap1 mRNA相對含量明顯低于空白對照,同時對應的抗氧化酶(SOD、GSH-Px、POD及CAT)活性也明顯降低,表明CCl4誘導的自由基,抑制Keap1基因表達,同時促使Nrf2移出細胞核,導致機體中抗氧化酶表達水平降低[48]。用姜黃素處理后,肝細胞中Nrf2 mRNA水平升高,其效果隨著劑量升高而增加,而Keap1 mRNA增加趨勢不明顯,說明姜黃素主要通過促進Nrf2基因表達,促進抗氧化酶產(chǎn)生,抑制肝細胞受損。

    總之,本研究中1 μg/ml和5 μg/ml姜黃素對CCl4致鯽魚肝損傷具有保護作用,其作用機制可能與姜黃素激活Keap1/Nrf2-ARE通路,促進抗氧化蛋白生成,增強機體對自由基清除能力有關(guān)。但是,高濃度(10 μg/ml)的姜黃素保肝作用不明顯,其原因還需進一步研究。

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