瘧原蟲膠體金快速檢測試劑盒在加蓬的臨床應(yīng)用研究

李世佳，NGANIANGA Chailina

1.天津市第四中心醫(yī)院檢驗科，天津 300143；2.加蓬弗朗斯維爾中加友誼醫(yī)院檢驗科，弗朗斯維爾 3725

瘧疾是一種嚴(yán)重危害人類身體健康的寄生蟲病，瘧原蟲主要分為惡性瘧原蟲、間日瘧原蟲、三日瘧原蟲和卵型瘧原蟲。目前瘧疾在世界范圍內(nèi)廣為流行，其中以非洲最為嚴(yán)重，全球近90%的瘧疾病例發(fā)生于非洲，且以惡性瘧為主[1-2]。加蓬地處非洲西南部，氣候多雨濕熱，增大了瘧疾經(jīng)蚊蟲傳播可能[3-4]。近年來，隨著全球經(jīng)濟(jì)一體化進(jìn)程，我國外出到加蓬務(wù)工人員逐年增加，且多在林場、礦區(qū)等易于蚊蟲生長繁殖地區(qū)工作，加之當(dāng)?shù)啬c道疾病發(fā)病率也較高，很多瘧疾患者發(fā)熱后自行服用退熱、消炎藥治療，不易被及時發(fā)現(xiàn)，常常延誤最佳治療時機(jī)。

瘧疾的早期診斷是防治的關(guān)鍵[5]，目前常用的檢測方法為瘧原蟲鏡檢法、抗原快速檢測和核酸檢測[6]。但受經(jīng)濟(jì)條件所限，非洲當(dāng)?shù)責(zé)o法廣泛開展瘧疾核酸檢測項目，故多以顯微鏡鏡檢法作為瘧疾檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，輔以抗原快速檢測。萬孚瘧原蟲快速檢測試劑盒是我國唯一可同時檢測人體4種瘧原蟲的試劑盒[7]。本研究旨在分析瘧原蟲膠體金快速檢測試劑盒法(RDTs法)對加蓬地區(qū)瘧疾的檢測效果，為RDTs法在非洲地區(qū)的推廣應(yīng)用提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集加蓬弗朗斯維爾市中加友誼醫(yī)院2020年9月至2021年6月105例疑似瘧疾患者(中國人25例，加蓬人80例)的乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝全血標(biāo)本。105疑似瘧疾患者中男63例，女42例。

1.2儀器與試劑 奧利巴斯顯微鏡；瘧原蟲檢測試劑盒(廣州萬孚生物技術(shù)有限公司，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號：YZB/國4201-2011)。

1.3方法

1.3.1RDTs法 參照試劑盒說明書，吸取5 μL全血標(biāo)本垂直滴加于加樣區(qū)，同時滴加3滴裂解液于加裂解液區(qū)，15 min內(nèi)觀察顯示結(jié)果。對照區(qū)(C)和檢測區(qū)(T1)同時出現(xiàn)紅色條帶提示感染惡性瘧原蟲。對照區(qū)(C)和檢測區(qū)(T1、T2)同時出現(xiàn)紅色條帶提示感染惡性瘧原蟲合并其他3種瘧原蟲的一種或幾種。對照區(qū)(C)和檢測區(qū)(T2)同時出現(xiàn)紅色條帶提示感染間日瘧原蟲、三日瘧原蟲或卵形瘧原蟲的一種或幾種。僅對照區(qū)(C)出現(xiàn)紅色條帶提示檢測結(jié)果為陰性。對照區(qū)(C)無紅色條帶出現(xiàn)，提示檢測結(jié)果無效。

1.3.2顯微鏡鏡檢法 參照WS259-2015《瘧疾的診斷》[8]制作厚、薄血涂片，100倍油鏡下觀察厚血膜，發(fā)現(xiàn)瘧原蟲后，以薄血膜進(jìn)行蟲種分類。以顯微鏡鏡檢結(jié)果作為瘧疾檢測的金標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.3RDTs法檢測綜合推廣能效分析 將顯微鏡鏡檢法與RDTs法進(jìn)行多角度推廣能效比對，根據(jù)10項因素給予高、中、低3檔評定，依不同檔次賦值3、2、1分，總分30分，計算綜合推廣率，綜合推廣率越高表示綜合推廣能效越好。

2 結(jié) 果

2.12種方法檢測陽性率比較 105例疑似瘧疾患者中，顯微鏡鏡檢法檢出陽性92例，陽性率87.6%(92/105)，其中惡性瘧陽性率81.9%(86/105)，間日瘧陽性率3.8%(4/105)，卵形瘧陽性率1.9%(2/105)。采用RDTs法檢出陽性91例，陽性率86.7%(91/105)，其中惡性瘧87例，非惡性瘧4例。顯微鏡鏡檢法、RDTs法檢測陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2RDTs法對惡性瘧、非惡性瘧的診斷指標(biāo)分析 以顯微鏡鏡檢法為金標(biāo)準(zhǔn)，對惡性瘧檢測結(jié)果分析得出：RDTs法檢測靈敏度為100.0%，特異度為94.7%。對非惡性瘧檢測結(jié)果分析得出：RDTs法檢測靈敏度為66.7%，特異度為100.0%。2種方法檢測結(jié)果比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 RDTs法對惡性瘧、非惡性瘧的診斷指標(biāo)(%)

2.32種檢測方法在加蓬的綜合推廣能效分析 根據(jù)10項因素評定得分顯示，顯微鏡鏡檢法合計得分為19分，綜合推廣率為63.3%(19/30)，而RDTs法檢測合計得分為26分，綜合推廣率為86.7%(26/30)。見表2。

表2 2種檢測方法的綜合推廣能效分析

2.42種方法檢出時間比較 顯微鏡鏡檢法經(jīng)制作厚、薄血膜及鏡檢過程，平均檢出時間為(40.0±5.2)min，RDTs法平均檢出時間為(12.6±1.5)min，2種方法檢出時間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

2021年6月30日，世界衛(wèi)生組織認(rèn)證中國已消除瘧疾[9]。但隨著經(jīng)濟(jì)一體化帶來的人口流動，我國輸入性瘧疾的風(fēng)險依舊存在，主要由非洲及東南亞國家歸國務(wù)工人員輸入[10]。據(jù)報道，全球每年感染瘧疾病例近2億，其中引起死亡的多為惡性瘧疾[11]。因此，提高瘧疾的早期診斷率是救治的關(guān)鍵。

目前，瘧疾診斷方法包括顯微鏡鏡檢法、RDTs法和PCR法。其中傳統(tǒng)血涂片顯微鏡鏡檢法是檢測瘧原蟲的金標(biāo)準(zhǔn)，此方法成本較低且能鑒定蟲種，但受檢驗人員水平限制，在血液中瘧原蟲密度較低的情況下極易造成漏檢，而且制作厚、薄血膜步驟煩瑣、用時較長。PCR核酸檢測技術(shù)因其高靈敏度和特異度等優(yōu)勢，在瘧疾診斷中應(yīng)用前景廣泛，但受非洲環(huán)境、經(jīng)濟(jì)等條件所限，在當(dāng)?shù)剌^難開展。本研究結(jié)果顯示，RDTs法靈敏度較高，可以減少漏診。與鏡檢法不同，RDTs法檢測操作更為簡便，1 min內(nèi)即可觀察結(jié)果且更加直觀，易于基層檢驗醫(yī)生甚至非專業(yè)人士操作使用，已廣泛應(yīng)用于瘧疾篩選[12]。萬孚瘧原蟲快速檢測試劑盒采用惡性瘧原蟲抗組氨酸富集蛋白Ⅱ(HRP-Ⅱ)單克隆抗體和抗鼠IgG多克隆抗體。膠體金標(biāo)記抗HRP-Ⅱ單克隆抗體，應(yīng)用層析式雙抗體夾心法的原理定性檢測全血中的瘧原蟲抗原。HRP-Ⅱ是瘧原蟲消化血紅蛋白的產(chǎn)物，屬于血溶性抗原，包含大量組氨酸，在瘧疾患者血、尿中均可檢出，在惡性瘧疾及間日瘧診斷中特異度高[7]。本研究中，鏡檢法所示的86份惡性瘧原蟲陽性標(biāo)本，應(yīng)用RDTs法全部檢出。一般認(rèn)為，當(dāng)瘧原蟲密度<50個/μL時鏡檢法難以檢出，RDTs法可檢出瘧原蟲>10個/μL，本研究中RDTs法檢測靈敏度為100.0%，較鏡檢法多檢出1例惡性瘧病例，正是因患者血液中瘧原蟲密度低所致。但RDTs法漏診了2例非惡性瘧患者，提示其對非惡性瘧的檢測靈敏度不佳，這與MALTHA等[13]的研究結(jié)果一致。本研究結(jié)果顯示，采用鏡檢法與RDTs法檢測瘧疾的陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，這與張欣等[14]研究結(jié)果一致。此外，RDTs法檢出時間明顯短于顯微鏡鏡檢法，達(dá)到了臨床快速診斷的要求。

綜上所述，該試劑盒能夠快速準(zhǔn)確地檢測瘧原蟲，特別是非洲地區(qū)高發(fā)的惡性瘧，檢出質(zhì)量和效率與顯微鏡鏡檢法相當(dāng)，且綜合推廣能效優(yōu)于顯微鏡鏡檢法。因此，RDTs法可作為顯微鏡鏡檢法的輔助檢測工具，在醫(yī)療條件落后的非洲加蓬地區(qū)推廣使用。