海南省高爾夫球場草坪真菌病害調(diào)查及防治

許天委，郝慧華，吳小霞，李國寅

(瓊臺師范學(xué)院 數(shù)理系，海南 ?？?571127)

近年來，海南省高爾夫球場草坪建植已經(jīng)進(jìn)入突飛猛進(jìn)的階段，草坪養(yǎng)護(hù)管理水平不斷提升，但由于高爾夫球場草坪種植密度大，草種單一，管理過程高度人工化，草坪容易發(fā)生病害[1-5]。目前，針對全國高爾夫球場草坪病害的研究報(bào)道不多，且主要研究冷季型草坪的病害，而專門針對海南省高爾夫球場草坪病害的研究則更少。2004年，劉曉妹等[6]對海南草坪草病害進(jìn)行了簡單報(bào)道。Zhang等[7-8]在2012年、2013年分別報(bào)道了紅絲病危害海南省高爾夫球場海濱雀稗草坪及粉斑病危害果嶺雜交狗牙根草坪。為進(jìn)一步研究海南省高爾夫球場草坪病害及其防治措施，自2014年以來，對海南省?？?、三亞、萬寧、儋州和東方的高爾夫球場及練習(xí)場草坪進(jìn)行真菌病害的系統(tǒng)調(diào)查，并測定6種殺菌劑對病原菌的室內(nèi)毒力及防控效果，以期為海南省高爾夫球場提高養(yǎng)護(hù)管理水平、防控真菌病害提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 調(diào)查時(shí)間和地點(diǎn)

從 2014 年 5月開始調(diào)查，至 2016 年 5 月結(jié)束，歷時(shí)2 a。調(diào)查地點(diǎn)分別為?？诿捞m高爾夫球場、三亞紅峽谷高爾夫球場、萬寧康樂園高爾夫球場、儋州古鹽田高爾夫球場、東方海航牧歌高爾夫球場、瓊臺師范學(xué)院高爾夫練習(xí)場。每個(gè)高爾夫球場隨機(jī)選取3～6個(gè)球洞，分別對其發(fā)球臺、果嶺、球道區(qū)域的真菌病害進(jìn)行調(diào)查，確定危害部位及程度。調(diào)查的草種主要有海濱雀稗(PaspalumvaginatiumSw)、雜交狗牙根[Cynodondactylon(Linn.)]。

1.2 病害調(diào)查方法

參考《植病研究方法》[9]進(jìn)行調(diào)查， 整個(gè)調(diào)查過程中，采取踏查與重點(diǎn)調(diào)查相結(jié)合的方式，對調(diào)查到的病害拍照、記錄癥狀、采集標(biāo)本。

1.3 病原菌的分離和鑒定

真菌病害病原菌分離所用培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基[10]，對分離到的病原菌進(jìn)行純培養(yǎng)后再做進(jìn)一步的鑒定[11-14]。

1.4 病害防治試驗(yàn)

1.4.1 供試藥劑 包括70%甲基托布津WP(江蘇龍燈化學(xué)有限公司)、40%五氯硝基苯WP(山西臨汾有機(jī)化工廠)、70%代森錳鋅WP(四川國光農(nóng)化有限公司)、75%福美雙WP(河北冀豐農(nóng)藥化工有限公司)、50%多靈菌WP(河南孟州平原農(nóng)藥廠)、15%粉銹寧WP(四川國光農(nóng)化有限公司)。

1.4.2 藥劑的室內(nèi)毒力測定 采用生長速率法[9]。先用無菌水把每一種藥劑配成1、10、50、100、200 μg/mL 5個(gè)不同質(zhì)量濃度的藥液。在9 mL的熔融狀態(tài)PDA培養(yǎng)基中加入1 mL藥液制成含藥培養(yǎng)基平板,用直徑為0.7 cm的打孔器取已培養(yǎng)4 d的菌落邊緣菌絲塊，接種到不同質(zhì)量濃度的含藥培養(yǎng)基平板中央，于27～29 ℃下培養(yǎng)48 h。同時(shí),在9 mL培養(yǎng)基中加入1 mL無菌水并接入菌絲塊作為對照。用十字交叉法測量菌落直徑，通過凈生長量計(jì)算相對抑制率，求出6種藥劑對11種病害病原菌的毒力回歸方程[9]和半數(shù)有效質(zhì)量濃度(EC50)，比較不同藥劑的抑制效果。

計(jì)算公式:

相對抑制率=

1.4.3 球場草坪病害的防治 試驗(yàn)地為東方海航牧歌高爾夫球場,草坪草種為海濱雀稗。各藥劑使用時(shí)稀釋倍數(shù)分別為甲基托布津600倍、五氯硝基苯500倍、代森錳鋅1 200倍、福美雙600倍、多靈菌600倍、粉銹寧1 000倍。以噴霧的方式在球道進(jìn)行施藥,每種藥劑施藥面積為667 m2，施液量為45 kg，設(shè)3個(gè)重復(fù)，以清水為對照,各試驗(yàn)區(qū)四周設(shè)保護(hù)。施藥時(shí)間為2016年7月，每隔7 d噴藥1次,共噴藥3次。在第3次噴藥后20 d 進(jìn)行調(diào)查，采用5點(diǎn)取樣[9],每點(diǎn)調(diào)查100株草,根據(jù)不同病害在海濱雀稗草不同部位的危害表現(xiàn)，統(tǒng)計(jì)病情指數(shù)，評價(jià)防治效果[15-16]。

根部病害分級標(biāo)準(zhǔn)：0級，健根；1級，根部壞死面積占根總面積的0.1%～10%；2級，根部壞死面積占根總面積的11%～25%；3級，根部壞死面積占根總面積的26%～50%；4級，根部壞死面積占根總面積的51%～75%；5級，根部壞死面積占根總面積的76%～100%。葉部病害分級標(biāo)準(zhǔn)：0級，全葉無病斑；1級，葉片僅現(xiàn)小斑點(diǎn),病斑面積在5%以下；2級，葉部的病斑面積占整葉的6%～15%；3級，葉部的病斑面積占整葉的16%～30%；4級，葉部的病斑面積占整葉的31%～50%；5級，葉部的病斑面積占整葉的51%以上。

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用DPS 7.05統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理與分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同球場真菌病害種類統(tǒng)計(jì)

2.1.1 ?？诿捞m高爾夫球場草坪真菌病害分布 ?？诿捞m高爾夫球場主要種植草坪草為海濱雀稗和雜交狗牙根，共有真菌病害6種(表1)。其中，對草坪葉片危害為重度的有幣斑病、鐮刀菌枯萎病、炭疽??；對根部危害為重度的有全蝕病、鐮刀菌枯萎病、仙環(huán)??；對莖危害為重度的有鐮刀菌枯萎病。

表1 ?？诿捞m高爾夫球場草坪真菌病害分布情況

注：病害的危害程度中，+表示輕度，++表示中度，+++表示重度，下同。

2.1.2 三亞紅峽谷高爾夫球場草坪真菌病害分布 三亞紅峽谷高爾夫球場主要功能區(qū)發(fā)球臺、球道和果嶺種植草坪草均為海濱雀稗。在發(fā)球臺和球道上均有鐮刀菌枯萎病，該病對海濱雀稗的根、莖、葉均有危害，危害程度為重度(表2)。在8種病害中，全蝕病只對海濱雀稗的根部產(chǎn)生危害，危害程度為重度；幣斑病、黑痣病、條銹病及炭疽病只對海濱雀稗草的葉片產(chǎn)生危害，在發(fā)球臺上，幣斑病對海濱雀稗草葉片的危害程度為中度，而在果嶺上對海濱雀稗草葉片的危害程度為重度；仙環(huán)病對海濱雀稗草根和莖的危害程度均為中度。

表2 三亞紅峽谷高爾夫球場草坪真菌病害分布情況

2.1.3 萬寧康樂園高爾夫球場草坪真菌病害分布 調(diào)查結(jié)果表明，康樂園高爾夫球場發(fā)球臺和球道種植的草坪草為雜交狗牙根，果嶺為海濱雀稗。根據(jù)表3，發(fā)球臺和球道均有鐮刀菌枯萎病，其在雜交狗牙根草根、莖、葉上的危害程度均為重度。在該球場的主要功能區(qū)共調(diào)查到7種病害，其中6種病害對葉片都有危害，程度均為重度。仙環(huán)病只發(fā)生在種植雜交狗牙根草種的球道上，危害草坪的部位為根和莖，程度為重度。

表3 萬寧康樂園高爾夫球場草坪真菌病害分布情況

2.1.4 儋州古鹽田高爾夫球場草坪真菌病害分布 調(diào)查結(jié)果表明，古鹽田高爾夫球場發(fā)球臺和球道種植的草坪草為雜交狗牙根，果嶺種植的草坪草為海濱雀稗。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，雜交狗牙根草坪上發(fā)生的病害有8種，對葉片危害為重度的有鐮刀菌枯萎病、黑孢霉枯萎病、粉斑病、炭疽?。蝗g病只對雜交狗牙根草的根有危害，程度為中度(表4)。在海濱雀稗草坪中發(fā)現(xiàn)3種病害，分別是全蝕病、幣斑病和炭疽病，其中炭疽病的危害程度為重度，其余的危害程度均為中度。

表4 儋州古鹽田高爾夫球場草坪真菌病害分布情況

2.1.5 東方海航牧歌高爾夫球場草坪真菌病害分布 東方海航牧歌高爾夫球場發(fā)球臺種植的草坪草為雜交狗牙根，球道和果嶺種植的草坪草為海濱雀稗。根據(jù)表5，該球場真菌病害有7種，只有仙環(huán)病對海濱雀稗草坪根系的危害程度為重度，其他病害對根系的危害程度為中度，同時(shí)鐮刀菌枯萎病對海濱雀稗草坪和雜交狗牙根草坪的根、莖、葉均有危害，其中對葉片的危害程度為重度，對根和莖的危害程度均為中度。

表5 東方海航牧歌高爾夫球場草坪真菌病害分布情況

2.1.6 瓊臺師范學(xué)院練習(xí)場草坪真菌病害分布 據(jù)調(diào)查，瓊臺師范學(xué)院練習(xí)場種植草坪草為海濱雀稗，病害有4種(表6)。全蝕病只危害根部，危害程度為中度；幣斑病和炭疽病危害部位均為葉片，危害程度分別是中度和重度；鐮刀菌枯萎病則對海濱雀稗草坪的根、莖、葉都有危害，其中對根和莖的危害程度為中度，對葉片的危害程度為重度。

表6 瓊臺師范學(xué)院練習(xí)場草坪真菌病害分布情況

2.2 化學(xué)藥劑室內(nèi)毒力測定結(jié)果

通過對1個(gè)高爾夫練習(xí)場和5個(gè)高爾夫球場的發(fā)球臺、球道和果嶺進(jìn)行病害調(diào)查，在海濱雀稗草坪和雜交狗牙根草坪上共發(fā)現(xiàn)11種真菌病害，因此，分別測定6種藥劑對這11種病原菌的室內(nèi)毒力。

2.2.1 甲基托布津?qū)Σ煌≡L的抑制情況 從表7可以看出，甲基托布津?qū)?1種病菌的EC50值均小于15 μg/mL，其中最小值為鐮刀菌枯萎病菌0.02 μg/mL，最大值為褐斑病菌12.80 μg/mL，說明其對不同病原菌的生長抑制作用明顯。甲基托布津?qū)Σ【鶨C50值小于0.1 μg/mL的有鐮刀菌枯萎病菌0.02 μg/mL和全蝕病菌0.09 μg/mL，EC50值大于0.1 μg/mL且小于1 μg/mL的有幣斑病菌0.13 μg/mL和仙環(huán)病菌0.55 μg/mL。

表7 甲基托布津?qū)Σ煌≡L的抑制情況

2.2.2 五氯硝基苯對不同病原菌生長的抑制情況 根據(jù)表8的測定結(jié)果，五氯硝基苯對11種不同病原菌生長抑制作用的EC50值由小到大依次為鐮刀菌枯萎病菌、全蝕病菌、幣斑病菌、紅絲病菌、炭疽病菌、仙環(huán)病菌、條銹病菌、褐斑病菌、黑孢霉枯萎病菌、黑痣病菌、粉斑病菌，最小值為鐮刀菌枯萎病菌0.08 μg/mL，最大值為粉斑病菌51.61 μg/mL。

表8 五氯硝基苯對不同病原菌生長的抑制情況

2.2.3 代森錳鋅對不同病原菌生長的抑制情況 根據(jù)表9，代森錳鋅對11種病菌的生長都有抑制作用。該藥劑對不同病菌的毒力由大到小依次為仙環(huán)病菌、炭疽病菌、幣斑病菌、紅絲病菌、黑孢霉枯萎病菌、全蝕病菌、鐮刀菌枯萎病菌、條銹病菌、褐斑病菌、黑痣病菌、粉斑病菌。EC50值大于50 μg/mL的有黑痣病菌51.81 μg/mL和粉斑病菌52.23 μg/mL，其余的EC50值都小于10 μg/mL，最小的為仙環(huán)病菌0.10 μg/mL。

2.2.4 福美雙對不同病原菌生長的抑制情況 由表10的測定結(jié)果可知，藥劑福美雙對11種病菌的EC50值最小值為炭疽病菌0.37 μg/mL，最高值為粉斑病菌30.12 μg/mL。該藥劑對11種病菌的生長均有一定的抑制作用，EC50值由小到大依次為炭疽病菌、幣斑病菌、鐮刀菌枯萎病菌、仙環(huán)病菌、條銹病菌、黑孢霉枯萎病菌、紅絲病菌、黑痣病菌、全蝕病菌、褐斑病菌、粉斑病菌。

表10 福美雙對不同病原菌生長的抑制情況

2.2.5 多菌靈對不同病原菌生長的抑制情況 根據(jù)表11，多菌靈對高爾夫球場草坪上11種病菌的生長都有一定的抑制作用，EC50值最低的為紅絲病菌0.93 μg/mL，最高的為條銹病菌11.53 μg/mL。多菌靈對11種病菌的毒力由大到小依次為紅絲病菌、鐮刀菌枯萎病菌、全蝕病菌、黑痣病菌、炭疽病菌、幣斑病菌、黑孢霉枯萎病菌、褐斑病菌、仙環(huán)病菌、粉斑病菌、條銹病菌。

表11 多菌靈對不同病原菌生長的抑制情況

2.2.6 粉銹寧對不同病原菌生長的抑制情況 根據(jù)表12的測定結(jié)果可知，粉銹寧對11種病菌生長的抑制效果差異較大，EC50值最小值為0.06 μg/mL，最大值為320.13 μg/mL。其中，EC50值高于100 μg/mL的有黑痣病菌182.03 μg/mL和紅絲病菌320.13 μg/mL，粉銹寧對這2種病菌的毒力較小。EC50值小于5 μg/mL的有粉斑病菌0.06 μg/mL和褐斑病菌4.63 μg/mL，粉銹寧對這2種病菌的毒力較大。

表12 粉銹寧對不同病原菌生長的抑制情況

2.3 化學(xué)藥劑對病害的防治效果

從表13可以看出，各藥劑處理與對照的病情指數(shù)存在顯著差異。防治效果最好的是甲基托布津，達(dá)到66.0%；其次是五氯硝基苯，防治效果達(dá)57.6%；代森錳鋅防治效果為52.2%；粉銹寧防治效果最差，為34.3%。除代森錳鋅與福美雙的防治效果差異不顯著外，其余各處理之間均存在顯著差異。

表13 不同藥劑對高爾夫球場真菌病害防治效果

注：同行不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

3 結(jié)論與討論

通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，目前海南省高爾夫球場種植的草坪草主要有海濱雀稗和雜交狗牙根。從對球場的發(fā)球臺、球道及果嶺病害調(diào)查結(jié)果來看，危害海濱雀稗和雜交狗牙根草坪的病害共有11種，分別為幣斑病、鐮刀菌枯萎病、全蝕病、仙環(huán)病、條銹病、炭疽病、褐斑病、黑痣病、粉斑病、紅絲病、黑孢霉枯萎病,病害種類及病原菌與前人報(bào)道基本一致[6，17]。

經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，萬寧康樂園高爾夫球場球道上的雜交狗牙根草坪有粉斑病，果嶺上的海濱雀稗草坪有紅絲病，而儋州古鹽田高爾夫球場、東方海航牧歌高爾夫球場也有粉斑病，與Zhang等[18]認(rèn)為這2種病害在海南省廣泛分布相一致，其曾被認(rèn)為是世界范圍內(nèi)冷季型、暖季型草坪的常見病害[19]。根據(jù)對6個(gè)球場和練習(xí)場的病害調(diào)查，黑孢霉枯萎病只在儋州古鹽田高爾夫球場發(fā)球臺上發(fā)現(xiàn)，可能與該球場草坪草種單一、草坪種植時(shí)間短、調(diào)查期間的氣候特點(diǎn)有關(guān)。

根據(jù)藥劑對不同病原菌生長的毒力測定結(jié)果，6種藥劑對11種真菌病害病原菌的生長均具有一定的抑制效果。甲基托布津和五氯硝基苯對鐮刀菌枯萎病病原菌的抑制作用最強(qiáng)，EC50分別為0.02 μg/mL和0.08 μg/mL；代森錳鋅對仙環(huán)病病原菌的抑制作用最強(qiáng)，EC50為0.10 μg/mL；福美雙對炭疽病病原菌的抑制作用最強(qiáng)，EC50為0.37 μg/mL；多菌靈對紅絲病病原菌的抑制作用最強(qiáng)，EC50為0.93 μg/mL；粉銹寧對粉斑病病原菌的抑制作用最強(qiáng)，EC50為0.06 μg/mL。同時(shí)球場防治試驗(yàn)結(jié)果顯示,甲基托布津?qū)Σ萜翰『Φ姆乐涡Ч詈?達(dá)66.0%,值得在球場管理上推廣應(yīng)用；另外,五氯硝基苯和代森錳鋅也有一定的防治效果,分別為57.6%和52.2%。為了避免病菌抗藥性的產(chǎn)生,在球場草坪養(yǎng)護(hù)過程中，可將上述幾種藥物交替使用或混合使用。

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