• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞分選方法研究進(jìn)展

    2018-01-16 14:06:06張軍峰劉博迪郝宏博
    關(guān)鍵詞:微流膠質(zhì)瘤干細(xì)胞

    龐 龍,張軍峰,劉博迪,郝宏博,徐 曦

    (1西安醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部,陜西西安710021;2西安交通大學(xué)能動(dòng)學(xué)院,陜西西安710049)

    0 引言

    腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(glioma stem cells,GSCs)是指存在于腦膠質(zhì)瘤中具有獨(dú)立成瘤能力的一種細(xì)胞[1-3]。相較于其他的腫瘤細(xì)胞,GSCs具有自我更新、無(wú)限增殖、多向分化潛能、耐藥性等特征[4-5]。研究[6-7]表明GSCs是腦膠質(zhì)瘤發(fā)生的“始動(dòng)”細(xì)胞,在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展、維持、轉(zhuǎn)移擴(kuò)散和復(fù)發(fā)過(guò)程中起著關(guān)鍵性作用。但是GSCs在整個(gè)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的含量極其微小,這給它的研究帶來(lái)了很大的困難[8]。目前根據(jù)分選是否需要細(xì)胞表面標(biāo)記物,GSCs的分選主要可以分為細(xì)胞表面標(biāo)志物分選和不依賴細(xì)胞表面標(biāo)記物分選法兩種方式[8-9],利用細(xì)胞表面標(biāo)志物分選的特點(diǎn)是分離得到的GSCs純度高,但缺點(diǎn)是該方法破壞了細(xì)胞的生物化學(xué)性質(zhì)不利于后續(xù)的檢驗(yàn)研究。此外,該方法必須依賴已知的標(biāo)記物,而對(duì)于未知的標(biāo)記物則無(wú)法進(jìn)行檢驗(yàn)[10]。隨著微流控芯片技術(shù)的發(fā)展,不依賴細(xì)胞表面標(biāo)記物分選法得到了長(zhǎng)足的發(fā)展。本文將結(jié)合GSCs的生物學(xué)特性對(duì)目前GSCs分選的常用方法和技術(shù)展開探討。

    1 GSCs的生物學(xué)特性

    作為腫瘤干細(xì)胞(tumor stem cells,TSCs)的一種,GSCs擁有與腫瘤干細(xì)胞相同的生物學(xué)特性,而這些特征也是GSCs分選的依據(jù)。所謂TSCs是指存在于腫瘤細(xì)胞中的一小部分細(xì)胞,這些細(xì)胞具有自我更新、無(wú)限增殖能力以及多向分化潛能的干細(xì)胞樣特性,它們是腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移以及復(fù)發(fā)的根源[11-12]。TSCs的概念提出于20世紀(jì)60年代,但當(dāng)時(shí)缺乏先進(jìn)的分子生物學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù),直到21世紀(jì)初美國(guó)癌癥研究學(xué)會(huì)(American Association for Cancer Research,AACR)才正式宣布承認(rèn)TSCs。這標(biāo)志著TSCs得到了醫(yī)學(xué)界的公認(rèn),從而使TSCs的研究進(jìn)入了一個(gè)新的階段。TSCs理論為我們重新認(rèn)識(shí)腫瘤的起源、腫瘤的診斷與治療等方面提供了新方向[13]。TSCs的主要特征包括類干細(xì)胞特性、懸浮球狀生長(zhǎng)、無(wú)限增殖能力、致瘤能力等。

    1.1 類干細(xì)胞特性從某種意義上,干細(xì)胞與TSCs具有相似性[14-16]。在最初研究TSCs時(shí)發(fā)現(xiàn)它和干細(xì)胞表達(dá)相同的基因與標(biāo)記物如SOX2、CD133、Nestin等[17-18],這些標(biāo)記物通常作為TSCs鑒定的主要依據(jù)之一[19-20];研究[21-22]發(fā)現(xiàn) TSCs 和干細(xì)胞共用一些與細(xì)胞代謝、自我更新相關(guān)的信號(hào)通路,如Notch和 Wnt/β-catenin;此外,TSCs和干細(xì)胞都具有自我更新能力、增殖能力及多向分化潛能,并且兩者的增殖方式都為不對(duì)稱分裂(asymmetrical division)。

    1.2 懸浮生長(zhǎng)與無(wú)限增殖能力研究[23-24]發(fā)現(xiàn)使用神經(jīng)干細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)液培養(yǎng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞時(shí)會(huì)出現(xiàn)腫瘤球。連續(xù)傳代后的腫瘤球生長(zhǎng)速度加快,且能夠保持穩(wěn)定的聚集狀態(tài)。此外,研究[25-26]還發(fā)現(xiàn)由親本腦膠質(zhì)腫瘤干細(xì)胞球制成的單細(xì)胞懸液能夠再次培養(yǎng)形成腫瘤球,且該腫瘤球保持與親本腫瘤球一致的表型。GSCs具有無(wú)限增殖能力,這表現(xiàn)為在腫瘤組織中絕大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞增殖能力有限,只有含量很少的GSCs才能夠形成新的腫瘤細(xì)胞群并轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散[27]。膠質(zhì)瘤干細(xì)胞可以實(shí)現(xiàn)自我更新,形成與父代相同表型的子代TSCs,與此同時(shí)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞可以分裂增殖成腫瘤組織中大量含有的其他腫瘤細(xì)胞。

    1.3 致瘤能力GSCs最大的特征是其致瘤能力。不同于腫瘤組織中其他的腫瘤細(xì)胞,含量稀少的TSCs具有很強(qiáng)的致瘤能力[28]。人源性腫瘤細(xì)胞的致瘤能力通常通過(guò)體外克隆形成和免疫缺陷小鼠體內(nèi)的腫瘤形成能力兩個(gè)方面進(jìn)行評(píng)價(jià)。其中體外克隆形成是將源自原發(fā)性腫瘤組織或細(xì)胞系的TSCs在軟瓊脂或基底膜類似物上進(jìn)行培養(yǎng),比較它們可形成的克隆數(shù)目及所形成的腫瘤球大??;免疫缺陷動(dòng)物體內(nèi)的腫瘤形成能力是指將分選的相同數(shù)量的TSCs和非TSCs分別按相同方式接種于免疫缺陷小鼠體內(nèi),觀察它們?cè)谙嗤瑫r(shí)間內(nèi)的腫瘤形成情況。研究[19]表明,TSCs(CD133+)體外克隆明顯大于CD133-的腦腫瘤非干細(xì)胞。同時(shí)對(duì)比接種后24周內(nèi)形成可以連續(xù)移植的腫瘤,使用非糖尿病型嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠(non-obese diabetic, severe combined immunodeficient,NOD-SCID),接種105個(gè)CD133-的腦腫瘤非干細(xì)胞的NOD-SCID未見腫瘤形成,而使用100個(gè)腦TSCs接種則可以形成腫瘤[5]。腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展、維持、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等均與 GSCs有著密切的關(guān)系[29],可以說(shuō)GSCs是導(dǎo)致腦膠質(zhì)的罪魁禍?zhǔn)祝?/p>

    2 GSCs常用的分選方法

    由于GSCs在整個(gè)腦膠質(zhì)瘤中含量非常稀少,使它的分離非常困難。因此,GSCs的分選是進(jìn)一步研究膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的難點(diǎn)和基礎(chǔ)。按是否使用細(xì)胞表面標(biāo)記物可分為細(xì)胞表面標(biāo)志物分選和不依賴細(xì)胞表面標(biāo)記物分選法兩種方式。下面將這兩種方法進(jìn)行概述。

    2.1 細(xì)胞表面標(biāo)志物分選作為膠質(zhì)瘤細(xì)胞中含量較少的一個(gè)亞群,對(duì)于GSCs特異性標(biāo)記物的研究一直是熱點(diǎn)內(nèi)容。目前已經(jīng)證實(shí)的GSCs標(biāo)記主要包括:位于細(xì)胞核中的 SOX2、Olig2、BMI-1、EZH2,位于細(xì)胞質(zhì)中的 Nestin、BMX以及細(xì)胞膜表面標(biāo)記物CD133、CD15、CD90、Integrin-α6、L1CAM 等[29]。 其中,細(xì)胞表面標(biāo)記物對(duì)特定細(xì)胞分選是目前進(jìn)行細(xì)胞分選研究最為常用的方法。這種方法是借助于已知的特殊細(xì)胞表面標(biāo)志物,利用免疫磁珠或?qū)⒖膳c特殊表面標(biāo)記物結(jié)合的帶熒光的“標(biāo)簽”對(duì)GSCs進(jìn)行標(biāo)記并分選[30-32]。通常采用的方法包括免疫磁珠分選法(magnetic activated cell sorting, MACS)、熒光激活細(xì)胞分選法(fluorescence-activated cell sorting,F(xiàn)ACS)等。

    MACS進(jìn)行GSCs分選主要是將GSCs表面的特異性抗原標(biāo)記到免疫磁珠表面[33],將標(biāo)記過(guò)的磁珠與單細(xì)胞懸液共同孵育,使磁珠結(jié)合到GSCs表面,然后在磁場(chǎng)的作用下將GSCs分離出來(lái)。此外,還有一種方法是先用特殊的一抗與膠質(zhì)瘤干細(xì)胞結(jié)合,再用標(biāo)記有二抗的磁珠與之結(jié)合,通過(guò)使用易降解材料制作磁珠可以降低對(duì)目標(biāo)細(xì)胞的損傷。

    與MACS相同,F(xiàn)ACS也是常用的一種分選方法[34-37]。FACS具體是利用細(xì)胞表面的特異性抗原,通過(guò)將帶熒光標(biāo)記的特異抗體與TSCs表面特殊抗原結(jié)合,將細(xì)胞分為帶熒光標(biāo)記的目標(biāo)群和不帶熒光標(biāo)記的細(xì)胞群,然后借助于流式細(xì)胞儀將目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行分離。由于使用了流式細(xì)胞儀,該方法又被稱為流式分選法。

    采用細(xì)胞表面標(biāo)志物分選的優(yōu)點(diǎn)是可以利用已知的確定性標(biāo)記物得到純度高的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞,給后續(xù)的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞研究提供了良好的基礎(chǔ)[38-39]。缺點(diǎn)是該方法需要復(fù)雜的操作和昂貴的設(shè)備支持,如使用MACS需要制備特殊的磁珠,而使用FACS則需要使用流式細(xì)胞儀[40]。而且分離的通量受到設(shè)備和操作參數(shù)的影響,如FACS需要使用合適的電壓進(jìn)行,在需要提高操作通量增加電壓時(shí)又會(huì)影響到目標(biāo)細(xì)胞的活性。此外這些操作必須保證均在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行。

    除去以上兩種方法外,還可利用啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的熒光蛋白表達(dá)特性進(jìn)行GSCs的分選。啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)熒光蛋白表達(dá)特性是通過(guò)控制GSCs特異性標(biāo)志蛋白的基因啟動(dòng)子構(gòu)建慢病毒載體,并用這些慢病毒載體去感染膠質(zhì)瘤細(xì)胞,通過(guò)與藥物共培養(yǎng)篩選或流式分選等方法進(jìn)行分離,分離得到的細(xì)胞可以進(jìn)一步培養(yǎng)[41]。該方法對(duì)于完善和證明相關(guān)標(biāo)記物與GSCs之間的關(guān)系以及靶點(diǎn)藥物的研制有重要的意義。此外,羅丹明123(Rhodamine 123, Rho123)是一種可透過(guò)細(xì)胞膜的陽(yáng)離子熒光染料,是一種線粒體跨膜電位指示劑。研究[42]表明TSCs區(qū)別于其它細(xì)胞,可以通過(guò)細(xì)胞表面的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)將線粒體染色劑Rho123主動(dòng)外泵至胞外,利用Rho123結(jié)合流式細(xì)胞分選術(shù)富集干細(xì)胞的方法將低熒光亞群分選即可達(dá)到富集和分離TSCs的目的。

    2.2 不依賴細(xì)胞表面標(biāo)記物分選法

    2.2.1 側(cè)群細(xì)胞(side population, SP)分析法 SP 分析法是一種不依賴于細(xì)胞表面標(biāo)記物的分選方法[43]。其原理主要是利用GSCs高表達(dá)細(xì)胞膜ABCG2轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白[44-45],這種蛋白可以將細(xì)胞核染料Hoechst33342轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外。這種特性使GSCs區(qū)別于其他膠質(zhì)瘤細(xì)胞,具有Hoechst33342細(xì)胞核染料拒染性,可以利用這一特征采用流式細(xì)胞術(shù)將GSCs從膠質(zhì)瘤細(xì)胞中分離出來(lái)。

    2.2.2 無(wú)血清培養(yǎng)法 無(wú)血清培養(yǎng)法是利用神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞,神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液中不含血清,這可以阻止其中絕大多數(shù)非膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的增殖[46]。但這種培養(yǎng)液中添加有表皮生長(zhǎng)因子、堿性成纖維生長(zhǎng)因子,可以促進(jìn)膠質(zhì)瘤TSCs的增殖。在這種細(xì)胞培養(yǎng)液中,GSCs可以形成致密的腫瘤球并懸浮在細(xì)胞培養(yǎng)液中;而非TSCs則貼壁生長(zhǎng)??赏ㄟ^(guò)多次收集懸浮腫瘤球進(jìn)行克隆培養(yǎng)得到次代純度高的 GSCs[47]。

    2.2.3 利用耐藥性進(jìn)行分選 膠質(zhì)瘤的耐藥機(jī)制是目前已知膠質(zhì)瘤患者化療失敗的主要原因之一,而GSCs起到了關(guān)鍵作用[48-49]。這是因?yàn)镚SCs通常高表達(dá)ATP結(jié)合盒(ATP-binding casette,ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,如 ABCG2、ABCG1、P-糖蛋白等[50]。 這些蛋白可以將抗癌藥物“泵出”到細(xì)胞外,從而形成對(duì)抗癌藥物的耐藥性特征[51]。 Wang 等[52]利用無(wú)血清懸浮培養(yǎng)聯(lián)合低濃度長(zhǎng)春新堿富集分離GSCs。其中長(zhǎng)春新堿是一種細(xì)胞周期特異性藥物,可誘導(dǎo)除GSCs外的絕大多數(shù)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡或死亡,而具有耐藥性的GSCs得以保留并繼續(xù)增殖。結(jié)果表明相較以前單獨(dú)使用無(wú)血清培養(yǎng)液純化GSCs,這種方法可以縮短傳代次數(shù),提高GSCs的純度。

    3 基于微流控芯片技術(shù)的分選方法

    除了上述常用的TSCs分選方法外,近年來(lái)隨著微流控芯片技術(shù)的發(fā)展,使TSCs分選方面有了更為多樣的選擇。相對(duì)于傳統(tǒng)的方法,微流控芯片技術(shù)可以將很多反應(yīng)單元集成到一塊只有幾厘米大小的芯片上進(jìn)行,這使得微流控芯片具有低成本、操作簡(jiǎn)單、高度集成的特點(diǎn)[53-54]。目前其在生物學(xué)領(lǐng)域特別是細(xì)胞分選方面有著廣泛的應(yīng)用。按傳統(tǒng)的分類方法可以將基于微流控芯片技術(shù)的細(xì)胞分選方法分為細(xì)胞表面標(biāo)志物分選和不依賴細(xì)胞表面標(biāo)記物分選法兩種方式。

    3.1 細(xì)胞表面標(biāo)志物分選與傳統(tǒng)的分選方法相同,基于微流控芯片分選方法的基本分選原理不變,但利用微流控芯片技術(shù)可以大大降低研究成本,并減少操作步驟,提高分選效率和通量[55-56]。使用微流控芯片進(jìn)行細(xì)胞分選主要是利用特異性的標(biāo)記物通過(guò)充分接觸或者流體操作的原理進(jìn)行分選[57-58]。目前利用細(xì)胞表面標(biāo)記物特異性地針對(duì)GSCs分選的微流控芯片還未出現(xiàn),但是捕獲源于腦膠質(zhì)瘤的循環(huán)腫瘤細(xì)胞技術(shù)已經(jīng)出現(xiàn)。由于源于腦膠質(zhì)瘤的循環(huán)腫瘤細(xì)胞與GSCs存在著密切的關(guān)系,因此源于腦膠質(zhì)瘤的循環(huán)腫瘤細(xì)胞分選技術(shù)可以給GSCs分選提供借鑒和參考。

    在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)是最常被過(guò)度表達(dá)的受體酪氨酸激酶癌基因。EGFR與腫瘤細(xì)胞的遷移、粘附、侵襲的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等相關(guān),并與細(xì)胞增殖、血管生成和抗凋亡機(jī)制有密切關(guān)系[59]。 Wan 等[60]設(shè)計(jì)了專門與腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面EGFR特異性結(jié)合的適配子,并將其預(yù)先孵育到微管道中。適配子技術(shù)是利用人工合成的單鏈寡核苷酸(DNA或RNA),或者肽鏈與非核苷酸靶目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行高親和力、高特異性的結(jié)合。借助于微流控流體操作技術(shù)可以將目標(biāo)細(xì)胞捕獲到芯片中,而其他正常的細(xì)胞則被去除。Sullivan等[61]利用抗體雞尾酒法將 SOX2、Tubulin beta-3、EGFR、A2B5和c-MET的抗體孵育到CTC-iChip的流體管道表面,利用微流控流體操控技術(shù)使細(xì)胞樣品與管道表面充分的結(jié)合,從而使目標(biāo)細(xì)胞被分離出來(lái)。

    3.2 不依賴細(xì)胞表面標(biāo)記物分選法利用不依賴細(xì)胞表面標(biāo)記物分選法可以克服細(xì)胞表面標(biāo)記物法破壞所分選細(xì)胞的生物化學(xué)性質(zhì)的缺點(diǎn)。此外,該方法還可以對(duì)于某些未知的標(biāo)記進(jìn)行篩選和確認(rèn)。隨著對(duì)TSCs研究的深入,越來(lái)越多的研究證據(jù)表明TSCs的生物機(jī)械性能與其生物學(xué)特征密切相關(guān)[62-63]。腫瘤通過(guò)外周血循環(huán)發(fā)生轉(zhuǎn)移時(shí),TSCs需要穿過(guò)血管內(nèi)皮細(xì)胞層到達(dá)血液中,此時(shí)細(xì)胞大小、變形性起到了關(guān)鍵作用[64-65]。此外,當(dāng)TSCs移動(dòng)到次生腫瘤發(fā)生部位時(shí),通常要與血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生粘附作用,此時(shí)TSCs粘附血管內(nèi)皮細(xì)胞的能力起到了關(guān)鍵作用[66-67]。因此,利用TSCs的生物機(jī)械性能對(duì)其進(jìn)行分選,不但能夠最大限度地保留所分離細(xì)胞的生物化學(xué)性質(zhì),而且能夠?yàn)榘l(fā)現(xiàn)新的TSCs標(biāo)記物提供條件[68-69]。利用傳統(tǒng)的研究方法實(shí)現(xiàn)對(duì)TSCs生物機(jī)械性能的研究比較復(fù)雜且困難,而微流控芯片技術(shù)的發(fā)展則為TSCs生物機(jī)械性能的研究提供了更為方便的工具。

    Zhang等[70]利用微流控芯片微柱陣列將腫瘤細(xì)胞按變形性分為變形性強(qiáng)亞群和變形性弱亞群。通過(guò)比較兩個(gè)亞群細(xì)胞的TSCs特征基因表達(dá)檢測(cè)、成瘤能力分析、流式細(xì)胞術(shù)TSCs含量檢測(cè)發(fā)現(xiàn),變形性強(qiáng)的細(xì)胞亞群中TSCs的含量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于變形性弱的亞群。隨后該小組又設(shè)計(jì)了一種利用細(xì)胞粘附力進(jìn)行腫瘤細(xì)胞分選的微流控芯片,研究表明在特定條件下,粘附力與TSCs含量成反比,粘附力弱的細(xì)胞亞群TSCs的含量高[68]。通過(guò)微流控芯片分選不同大小的人間充質(zhì)干細(xì)胞時(shí),小的干細(xì)胞比大的干細(xì)胞更易誘導(dǎo)成為其他的終末細(xì)胞,該發(fā)現(xiàn)首次將干細(xì)胞的大小與干細(xì)胞的生物學(xué)性質(zhì)聯(lián)系了起來(lái)[71-72]。基于以上研究背景,Pang等[73]設(shè)計(jì)并制備了一種能夠?qū)⒉煌笮『妥冃涡詥渭?xì)胞陣列化的微流控芯片。以人多形性腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U-251為模板,研究發(fā)現(xiàn)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物機(jī)械性能與其耐藥性密切相關(guān),即小而/或變形性大的腫瘤細(xì)胞的耐藥性比大而/或變形性差的腫瘤細(xì)胞要強(qiáng)。這提示是否GSCs與生物機(jī)械性能也存在著密切的聯(lián)系?當(dāng)然這有待于進(jìn)一步的研究證明。

    4 結(jié)論與展望

    GSCs在腦腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵作用。而GSCs分選依然是TSCs研究的關(guān)鍵性技術(shù)瓶頸問(wèn)題。傳統(tǒng)的方法多基于GSCs表面特異性標(biāo)記物對(duì)TSCs進(jìn)行分選研究。隨著對(duì)GSCs研究的進(jìn)一步深入和微流控芯片細(xì)胞分選技術(shù)的發(fā)展,基于GSCs侵襲特性、細(xì)胞分裂次數(shù)異質(zhì)性、大小和變形性等非標(biāo)記物分選 GSCs將得到長(zhǎng)足的發(fā)展。未來(lái)GSCs的分選研究主要面向兩個(gè)方面:①臨床的檢測(cè),這就要求檢測(cè)的操作更為簡(jiǎn)單,成本更為低廉,檢測(cè)的過(guò)程更為高效,該過(guò)程只需要針對(duì)目前已知的標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè);②科學(xué)研究,該過(guò)程對(duì)GSCs分選的研究主要集中在分選后提過(guò)的后續(xù)理論研究與藥物篩選,因此需要將分選與后續(xù)的檢驗(yàn)結(jié)合起來(lái)使GSCs的研究更為便利和豐富,為腦膠質(zhì)瘤臨床治療提供新的理論基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    微流膠質(zhì)瘤干細(xì)胞
    干細(xì)胞:“小細(xì)胞”造就“大健康”
    造血干細(xì)胞移植與捐獻(xiàn)
    微流控法制備P(NIPA-co-MAA)水凝膠微球及其性能表征
    干細(xì)胞產(chǎn)業(yè)的春天來(lái)了?
    微流控芯片在食品安全分析中的應(yīng)用進(jìn)展
    微流控SERS芯片的設(shè)計(jì)制備及其在細(xì)菌檢測(cè)中的應(yīng)用
    紙芯片微流控技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用
    DCE-MRI在高、低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤及腦膜瘤中的鑒別診斷
    磁共振成像(2015年8期)2015-12-23 08:53:14
    P21和survivin蛋白在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及其臨床意義
    Sox2和Oct4在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及意義
    国产成人av教育| 又紧又爽又黄一区二区| 男人添女人高潮全过程视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产一区二区激情短视频 | 91成人精品电影| 午夜福利视频精品| a级毛片在线看网站| 少妇人妻久久综合中文| 久久精品国产a三级三级三级| 成人黄色视频免费在线看| 色婷婷av一区二区三区视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 天天添夜夜摸| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 久久久久久久国产电影| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产一区二区 视频在线| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久热爱精品视频在线9| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 成年人黄色毛片网站| 一本色道久久久久久精品综合| 国产精品久久久av美女十八| 成人影院久久| 99久久综合免费| 十八禁高潮呻吟视频| 国产精品.久久久| 午夜久久久在线观看| 国产精品一二三区在线看| 天堂中文最新版在线下载| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 少妇粗大呻吟视频| 两人在一起打扑克的视频| www.999成人在线观看| 青青草视频在线视频观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 99久久精品国产亚洲精品| 日韩欧美免费精品| 成人av一区二区三区在线看 | 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲综合色网址| 性高湖久久久久久久久免费观看| 黄色 视频免费看| 亚洲国产精品一区三区| 午夜福利在线免费观看网站| 蜜桃国产av成人99| 国产亚洲精品久久久久5区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 韩国高清视频一区二区三区| 青青草视频在线视频观看| 一进一出抽搐动态| 成年动漫av网址| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲国产中文字幕在线视频| 超色免费av| 捣出白浆h1v1| 亚洲国产精品成人久久小说| 久久久国产一区二区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲人成电影观看| 91成人精品电影| 高清在线国产一区| 捣出白浆h1v1| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲人成电影观看| 国产日韩欧美在线精品| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 久久久久国内视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 欧美黑人精品巨大| 91大片在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 91精品国产国语对白视频| 久久久久久久大尺度免费视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 下体分泌物呈黄色| bbb黄色大片| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 亚洲精品av麻豆狂野| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲精品第二区| 国产91精品成人一区二区三区 | 日本欧美视频一区| 亚洲人成电影免费在线| 精品人妻一区二区三区麻豆| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产成人精品在线电影| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲国产av新网站| 少妇 在线观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 91精品三级在线观看| 老司机影院成人| 中文字幕色久视频| 亚洲专区中文字幕在线| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 韩国精品一区二区三区| 国产99久久九九免费精品| 亚洲人成77777在线视频| 国产成+人综合+亚洲专区| 热99久久久久精品小说推荐| 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 午夜两性在线视频| 桃花免费在线播放| 他把我摸到了高潮在线观看 | 亚洲人成电影免费在线| 十八禁人妻一区二区| 日本a在线网址| 日本五十路高清| 成年av动漫网址| 男女午夜视频在线观看| 日韩视频在线欧美| 国产一区二区三区综合在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产av一区二区精品久久| 精品福利观看| 国产精品欧美亚洲77777| 国产成人av教育| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久免费观看电影| 久久精品成人免费网站| 国产精品偷伦视频观看了| 捣出白浆h1v1| 欧美午夜高清在线| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲精品第二区| 亚洲中文字幕日韩| 中文字幕av电影在线播放| 精品国内亚洲2022精品成人 | 国产成人欧美| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 丝袜美足系列| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 在线永久观看黄色视频| 两个人免费观看高清视频| 亚洲国产精品999| 一二三四社区在线视频社区8| 国产免费av片在线观看野外av| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产xxxxx性猛交| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲全国av大片| 12—13女人毛片做爰片一| 国产视频一区二区在线看| 国产精品国产三级国产专区5o| 九色亚洲精品在线播放| 日本91视频免费播放| 午夜福利视频在线观看免费| √禁漫天堂资源中文www| 多毛熟女@视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产av国产精品国产| 在线av久久热| 桃花免费在线播放| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲九九香蕉| 亚洲av欧美aⅴ国产| 午夜福利乱码中文字幕| 久久久久久人人人人人| 精品人妻1区二区| 免费在线观看完整版高清| 久久av网站| 免费高清在线观看日韩| 美女视频免费永久观看网站| 男人爽女人下面视频在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产精品熟女久久久久浪| 悠悠久久av| 久久久国产欧美日韩av| 男女午夜视频在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲全国av大片| 久久国产精品影院| 亚洲精品在线美女| 国产精品久久久久久精品古装| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 国产不卡av网站在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲成人国产一区在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 日韩欧美免费精品| 18在线观看网站| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 又黄又粗又硬又大视频| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲五月色婷婷综合| 好男人电影高清在线观看| h视频一区二区三区| 国产免费现黄频在线看| 男女下面插进去视频免费观看| 日本vs欧美在线观看视频| 制服人妻中文乱码| 91精品伊人久久大香线蕉| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产精品久久久av美女十八| 国产一区二区激情短视频 | 亚洲国产精品成人久久小说| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 国产精品国产av在线观看| videosex国产| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 日韩大码丰满熟妇| 国产97色在线日韩免费| av网站在线播放免费| 一区二区三区乱码不卡18| 午夜精品国产一区二区电影| 两个人免费观看高清视频| 久久中文字幕一级| 黄色片一级片一级黄色片| av在线播放精品| 亚洲精品成人av观看孕妇| 在线观看人妻少妇| 亚洲av美国av| 免费看十八禁软件| 多毛熟女@视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 精品人妻一区二区三区麻豆| 女性生殖器流出的白浆| 欧美精品一区二区免费开放| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 99国产精品免费福利视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 热99re8久久精品国产| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 欧美日韩av久久| 国产亚洲精品第一综合不卡| 叶爱在线成人免费视频播放| 热99re8久久精品国产| 久久 成人 亚洲| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲国产日韩一区二区| 午夜精品久久久久久毛片777| 两个人看的免费小视频| 国产精品熟女久久久久浪| 午夜影院在线不卡| 亚洲欧美精品自产自拍| 首页视频小说图片口味搜索| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲精品国产av蜜桃| 久久天堂一区二区三区四区| 国产黄频视频在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 一区二区三区乱码不卡18| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 高清视频免费观看一区二区| 久久精品亚洲av国产电影网| 99精国产麻豆久久婷婷| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 日韩一区二区三区影片| 日本五十路高清| 最近中文字幕2019免费版| 婷婷丁香在线五月| 丰满少妇做爰视频| 国产精品影院久久| 黄色视频,在线免费观看| 狂野欧美激情性xxxx| 中文字幕精品免费在线观看视频| 欧美97在线视频| 99国产精品一区二区蜜桃av | 国产在线一区二区三区精| 国产免费福利视频在线观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| www日本在线高清视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲精品乱久久久久久| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 午夜免费观看性视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 一级毛片女人18水好多| 不卡一级毛片| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲熟女精品中文字幕| 一区二区三区四区激情视频| 热re99久久精品国产66热6| 久久亚洲国产成人精品v| 人人妻人人澡人人看| 美国免费a级毛片| 日韩精品免费视频一区二区三区| 男女下面插进去视频免费观看| 伦理电影免费视频| 国产精品久久久久久精品古装| 国产精品九九99| 一进一出抽搐动态| 又黄又粗又硬又大视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 一区二区三区精品91| 国产成人a∨麻豆精品| 无遮挡黄片免费观看| 电影成人av| 久久影院123| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产日韩欧美在线精品| 麻豆av在线久日| 精品国内亚洲2022精品成人 | 国产一区二区三区av在线| 真人做人爱边吃奶动态| 又紧又爽又黄一区二区| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 脱女人内裤的视频| videos熟女内射| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 亚洲第一av免费看| 母亲3免费完整高清在线观看| 搡老乐熟女国产| 自线自在国产av| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 夫妻午夜视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 成在线人永久免费视频| 亚洲综合色网址| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 99久久精品国产亚洲精品| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 制服诱惑二区| 美国免费a级毛片| 国产欧美日韩一区二区三 | netflix在线观看网站| 青春草视频在线免费观看| 成年人黄色毛片网站| 无限看片的www在线观看| 久久av网站| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲国产精品成人久久小说| 美女高潮到喷水免费观看| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲三区欧美一区| videosex国产| 首页视频小说图片口味搜索| 久久国产精品影院| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产成人av教育| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 免费不卡黄色视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 三级毛片av免费| 一本大道久久a久久精品| 亚洲成人国产一区在线观看| 亚洲国产av影院在线观看| 97人妻天天添夜夜摸| 免费在线观看完整版高清| 少妇人妻久久综合中文| 九色亚洲精品在线播放| 免费少妇av软件| 香蕉国产在线看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 精品亚洲成国产av| 亚洲精华国产精华精| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲色图综合在线观看| 美女午夜性视频免费| 99香蕉大伊视频| 手机成人av网站| 久久女婷五月综合色啪小说| 亚洲综合色网址| 亚洲 国产 在线| 永久免费av网站大全| 一级毛片精品| 久久毛片免费看一区二区三区| 99热国产这里只有精品6| 五月天丁香电影| 日本黄色日本黄色录像| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 欧美在线一区亚洲| av在线播放精品| 悠悠久久av| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产区一区二久久| netflix在线观看网站| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 一本大道久久a久久精品| 黄色视频不卡| 亚洲国产中文字幕在线视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 91成年电影在线观看| 两个人看的免费小视频| 国产成人系列免费观看| 久9热在线精品视频| 亚洲一区中文字幕在线| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 大码成人一级视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 啪啪无遮挡十八禁网站| 黑人操中国人逼视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 人妻久久中文字幕网| 国产在线一区二区三区精| 又大又爽又粗| 免费在线观看日本一区| 他把我摸到了高潮在线观看 | 久久性视频一级片| 成年人午夜在线观看视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 欧美另类亚洲清纯唯美| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 欧美成狂野欧美在线观看| 一级黄色大片毛片| 精品免费久久久久久久清纯 | 97人妻天天添夜夜摸| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 99热国产这里只有精品6| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲人成77777在线视频| 精品一区二区三区av网在线观看 | 新久久久久国产一级毛片| 最黄视频免费看| 国产精品一二三区在线看| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲国产欧美网| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产亚洲欧美精品永久| 国产在线一区二区三区精| 一区在线观看完整版| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 97精品久久久久久久久久精品| 免费观看人在逋| 淫妇啪啪啪对白视频 | 18在线观看网站| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 五月开心婷婷网| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 午夜福利乱码中文字幕| 十分钟在线观看高清视频www| 纯流量卡能插随身wifi吗| 91国产中文字幕| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 黄频高清免费视频| 精品国产国语对白av| 黄色视频不卡| 久久久久久久久免费视频了| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲国产欧美在线一区| 久久久国产欧美日韩av| av超薄肉色丝袜交足视频| av不卡在线播放| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产精品香港三级国产av潘金莲| av片东京热男人的天堂| 另类精品久久| 国产成人精品久久二区二区91| 国产亚洲精品一区二区www | 日韩一区二区三区影片| 69av精品久久久久久 | 亚洲av片天天在线观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产精品 欧美亚洲| avwww免费| 桃花免费在线播放| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 成人黄色视频免费在线看| 一区二区三区激情视频| 男女免费视频国产| 91九色精品人成在线观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 伊人亚洲综合成人网| 又黄又粗又硬又大视频| 五月开心婷婷网| 日本av手机在线免费观看| 亚洲成人国产一区在线观看| 成在线人永久免费视频| 日韩制服骚丝袜av| 丰满饥渴人妻一区二区三| av超薄肉色丝袜交足视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产亚洲精品久久久久5区| netflix在线观看网站| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲精品av麻豆狂野| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲国产精品一区三区| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 搡老乐熟女国产| 国产精品久久久人人做人人爽| 在线av久久热| 无遮挡黄片免费观看| e午夜精品久久久久久久| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 欧美日韩福利视频一区二区| 999精品在线视频| 一区在线观看完整版| 国产成人欧美| 亚洲人成电影免费在线| 成人av一区二区三区在线看 | 日韩一区二区三区影片| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 岛国在线观看网站| 男女免费视频国产| 99国产精品一区二区三区| 俄罗斯特黄特色一大片| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| h视频一区二区三区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 欧美在线黄色| 亚洲欧洲日产国产| 午夜免费观看性视频| 午夜成年电影在线免费观看| 国产主播在线观看一区二区| www.精华液| 久久狼人影院| 国产男女内射视频| 在线观看免费视频网站a站| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 午夜福利一区二区在线看| 欧美大码av| 欧美激情 高清一区二区三区| 中文字幕最新亚洲高清| 一二三四社区在线视频社区8| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 日韩三级视频一区二区三区| 色播在线永久视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 丝袜脚勾引网站| a在线观看视频网站| 欧美日韩黄片免| 午夜老司机福利片| 精品人妻1区二区| 人妻久久中文字幕网| 蜜桃在线观看..| av国产精品久久久久影院| 亚洲人成77777在线视频| 国产精品熟女久久久久浪| 母亲3免费完整高清在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久这里只有精品19| 老汉色∧v一级毛片| 久久香蕉激情| 好男人电影高清在线观看| 性少妇av在线| 国产日韩欧美亚洲二区| 午夜激情久久久久久久| 日韩电影二区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久久国产欧美日韩av| 国产成人av教育| 久久久国产欧美日韩av| 精品国产一区二区久久| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 女人精品久久久久毛片| 精品一区二区三卡| 欧美中文综合在线视频| 国产一卡二卡三卡精品| 免费在线观看日本一区| 日韩视频一区二区在线观看| 欧美性长视频在线观看| 亚洲精华国产精华精| 国产精品一二三区在线看| av福利片在线| 丁香六月天网| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美午夜高清在线| 一级毛片电影观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产成人免费无遮挡视频| 国产在线免费精品| 国产在视频线精品| 伊人亚洲综合成人网| 久久久精品区二区三区| 免费在线观看黄色视频的| 一个人免费看片子| 精品一区在线观看国产| 十八禁网站网址无遮挡| 欧美乱码精品一区二区三区| 一级片免费观看大全| 老汉色∧v一级毛片| 99热网站在线观看| 亚洲国产看品久久| 精品一区在线观看国产| 在线天堂中文资源库| 美国免费a级毛片| 亚洲精华国产精华精| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 一区二区av电影网| av在线老鸭窝| 久久ye,这里只有精品| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 97精品久久久久久久久久精品| 两性夫妻黄色片| 涩涩av久久男人的天堂| svipshipincom国产片|