四倍體刺槐組織培養(yǎng)研究

蘇立琢

摘要 選擇當年生長發(fā)育旺盛的幼嫩枝條帶腋芽莖段作為四倍體刺槐組織培養(yǎng)材料，研究組織培養(yǎng)的最佳條件。結果表明，最佳啟動培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg/L+0.3 mg/L，最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.3 mg/L，最佳生根培養(yǎng)基為1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+N AA 0.1 mg/L。在對試管苗移栽過程中應做好遮蔭并控制溫室內溫度和濕度條件，確保成活率在90%左右。

關鍵詞 四倍體刺槐；組織培養(yǎng)；快速繁殖

中圖分類號 S792.27 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）17-0140-01

四倍體刺槐根萌蘗性較強、根系發(fā)達，自身含有豐富的根瘤菌，可提升土壤內有機質含量、改良土壤、形成土壤團粒結構，還具有耐低溫、耐貧瘠、速生豐產特性，在治理沙漠化、防風固沙、水土保持和綠化上具有優(yōu)勢，屬優(yōu)質蜜源植物，有利于促進地方養(yǎng)蜂業(yè)發(fā)展，經濟效益和生態(tài)效益顯著。為確保優(yōu)良四倍體刺槐品種快速繁殖，對四倍體刺槐組織培養(yǎng)加強研究具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

四倍體刺槐生長的季節(jié)在春季，此時應選取萌發(fā)的幼嫩帶芽莖段。

1.2 外植體滅菌

將葉片去除并用自來水清洗干凈，在超凈工作臺無菌條件下，使用70%酒精對四倍體刺槐消毒30 s，使用0.1%升汞消毒7 min，再利用無菌水清洗3～4遍，使用無菌濾紙將材料表面水分吸收干凈，在帶腋芽莖段切取1 cm并將其在啟動培養(yǎng)基上接種[1-3]。

1.3 啟動培養(yǎng)

啟動培養(yǎng)基主要是將MS作為基本培養(yǎng)基，在啟動培養(yǎng)基上分別添加不同濃度的6-BA和 NAA，每瓶接種1株，每處理完30瓶，在生長30 d后觀察啟動培養(yǎng)基上四倍體刺槐生長情況，做好誘導率統(tǒng)計。

1.4 培養(yǎng)基的篩選

1.4.1 增殖培養(yǎng)基的篩選。將誘導成功的試管苗，分別切割成為單個小苗，接種在附加6-BA 0.1～1.5 mg/L、NAA 0.1～0.5 mg/L幾種組合的MS培養(yǎng)基上。將5株小苗放置在1個小瓶上，每完成20瓶后重復1次，在生長30 d后，觀察小苗生長，計算平均增值系數(shù)和生長量，找出最佳組合。

1.4.2 生根培養(yǎng)基的篩選。將試管苗生長到2 cm的莖段切下，接種到生根培養(yǎng)基上，將IBA 0.1～0.5 mg/L、NAA 0.1～0.3 mg/L的幾種組合中分別附加到生根培養(yǎng)基1/2MS上，將5株小苗放置在小瓶上，每完成20瓶后重復1次，生長30 d后，觀察小苗生長，計算平均生根條數(shù)、根長、生根率，找出最佳生根條件。

1.5 培養(yǎng)條件

分別將白糖30 g/L、瓊脂0.6 g/L加入到增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基內，pH值6.3，培養(yǎng)溫度為25 ℃左右，光照強度2 000 lx，光照時間12 h/d。

1.6 移栽

4月上旬將試管苗移栽到溫室內，選取根系生長較好的試管苗，洗凈根部培養(yǎng)基，移入72穴育苗盤，以珍珠巖為基質，使用0.2%高錳酸鉀溶液消毒，澆水后，放入備好的塑料小拱棚，棚內溫度25～30 ℃，相對濕度大于85%，將遮陽網(wǎng)放置在拱棚上方。持續(xù)1周后，降低拱棚相對濕度，28 d后撤去拱棚，移栽植入大田，澆水，蓋遮陽網(wǎng)，5 d后去除[4-6]。

2 結果與分析

2.1 激素對啟動培養(yǎng)的影響

在帶莖段接入啟動培養(yǎng)基后，若持續(xù)>10 d，腋芽處明顯萌動，后進入芽膨大期，產生葉片；30 d后，生成3 cm高叢芽，最佳培養(yǎng)基組合為MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L。

2.2 激素對試管苗增殖的影響

在將細胞分裂素6-BA加入增殖培養(yǎng)基后，出現(xiàn)增殖效果，增殖系數(shù)隨6-BA濃度增加而加大，增殖培養(yǎng)基內6-BA濃度達1.0 mg/L時，其增殖系數(shù)逐漸減少。這是由于6-BA濃度增加，易形成愈傷組織，有效苗數(shù)量減少，增殖系數(shù)降低。當NAA濃度達0.1 mg/L時，阻礙苗正常生長；當NAA濃度達0.3 mg/L時，苗生長較好。最佳增殖培養(yǎng)組合為MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.3 mg/L。

2.3 生長素對試管苗生根的影響

若將生長素IBA單一添加到培養(yǎng)基內，會促進試管苗生根，但莖部生長發(fā)育減緩，且根部側根數(shù)量少，若在培養(yǎng)基中添加生長素NAA時，會促進莖部生長，同時根部側根數(shù)量增加，提升移栽成活率。若將生長素IBA 0.5 mg/L和 NAA 0.1 mg/L配合使用，其效果達到最佳，生根率達95%，平均生根4條/株左右，且根生長發(fā)育較好。

2.4 苗木移栽及生長

珍珠巖內生長25 d的生根試管苗，移栽成活率達95%，移栽大田后，生長20 d后成活和移栽成活率均大于97%。試管苗移栽當年，四倍體刺槐平均高度為20 cm左右，葉片數(shù)量為15枚；單株高度在30 cm左右，葉片數(shù)量也達40枚。

3 結論

選擇當年生長發(fā)育旺盛的幼嫩枝條帶腋芽莖段作為四倍體刺槐組織培養(yǎng)材料。分化培養(yǎng)基種類為將MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L作為啟動培養(yǎng)基，將MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.3 mg/L作為增殖培養(yǎng)基，將1/2MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L作為生根培養(yǎng)基。選擇4月上旬移栽，以珍珠巖為移栽基質，移栽大田成活率大于90%。

4 參考文獻

[1] 李曉青，張曉申，王慧瑜.四倍體刺槐組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].陜西農業(yè)科學，2008（2）：57-58.

[2] 陳桂芳，婁利華.四倍體刺槐組織培養(yǎng)快速繁殖實驗[J].四川林業(yè)科技，2005，26（3）：88-89.

[3] 張新葉，蔡晟，胡興宜，等.四倍體刺槐的組織培養(yǎng)研究[J].湖北林業(yè)科技，2002（4）：4-6.

[4] 郭軍戰(zhàn)，舒慶艷，王麗玲，等.四倍體刺槐組織培養(yǎng)中的外植體選擇和消毒研究[J].西北林學院學報，2002（1）：15-18.

[5] 蔣祥娥，蔡桁，汪建亞，等.四倍體刺槐組織培養(yǎng)技術研究[J].湖北林業(yè)科技，2006（2）：8-11.

[6] 王莉，李春燕.無機鹽質量濃度及激素配比對四倍體刺槐組織培養(yǎng)苗生根的影響[J].江蘇林業(yè)科技，2003（6）：23-25.