復(fù)方倍他米松對(duì)小鼠白癜風(fēng)模型抗氧化的影響

李 楊,趙 野,梁海英,賈玉璽*

(1 杭州市第三人民醫(yī)院 皮膚科,浙江 杭州310000;2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 a.皮膚科;b.輸血科,吉林 長(zhǎng)春130033)

復(fù)方倍他米松對(duì)小鼠白癜風(fēng)模型抗氧化的影響

李 楊1,趙 野2a,梁海英2b,賈玉璽2a*

(1 杭州市第三人民醫(yī)院 皮膚科,浙江 杭州310000;2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 a.皮膚科;b.輸血科,吉林 長(zhǎng)春130033)

白癜風(fēng)是一種常見(jiàn)的皮膚或粘膜色素脫失性疾病，近年來(lái)研究表明黑素細(xì)胞的缺失在白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制中扮演著至關(guān)重要的角色[1]，相關(guān)研究結(jié)果顯示氧化應(yīng)激可能是導(dǎo)致黑素細(xì)胞變性的始動(dòng)因素，與白癜風(fēng)的發(fā)生和發(fā)展有著密切的關(guān)系[2]。本研究通過(guò)分析復(fù)方倍他米松注射液對(duì)小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽氧化酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)活力及含量的影響，以闡明復(fù)方倍他米松在抗氧化作用方面治療白癜風(fēng)的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1樣品來(lái)源

復(fù)方倍他米松(商品名：得寶松國(guó)藥準(zhǔn)字J20140160,進(jìn)口藥品注冊(cè)證號(hào)H201301888批號(hào)6BBKADAC03)。過(guò)氧化氫 (開(kāi)原化學(xué)試劑一廠 批號(hào)20161109)。

1.2試劑

GSH試劑盒，批號(hào)：20120213；SOD試劑盒，批號(hào)：20120223；MDA試劑盒，批 號(hào)：20122213；均為南京建成生物工程制品研究所生產(chǎn)。

1.3小鼠白癜風(fēng)模型的制作

取C57BL/6小鼠40只，體重17.5-20.5 g，雌雄均等，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號(hào)：SCXK(J2016-0003)。采用隨機(jī)數(shù)字表法各取10只為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(復(fù)方卡力孜然酊)、實(shí)驗(yàn)組(復(fù)方倍他米松)。所有小鼠電動(dòng)剃毛刀剃去背部黑色短毛約2 cm×2 cm作為實(shí)驗(yàn)區(qū)。除正常對(duì)照組外，模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組小鼠均在皮膚實(shí)驗(yàn)區(qū)涂抹5%過(guò)氧化氫0.5 ml，每天2次，平均每日剃毛1次，連續(xù)50天。正常對(duì)照組在實(shí)驗(yàn)區(qū)涂抹等量蒸餾水，每天2次，平均每日剃毛 1次，連續(xù)50天。模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組自第11天開(kāi)始給藥，陽(yáng)性對(duì)照組涂抹等量0.5 ml復(fù)方卡力孜然酊，模型組涂抹等量0.5 ml蒸餾水，實(shí)驗(yàn)組皮損局部用二氧化碳點(diǎn)陣激光造孔后外涂復(fù)方倍他米松0.5 ml，每周1次。于治療第50天，以3%水合氯醛10 ml/kg腹腔注射麻醉，摘除眼球取血，測(cè)量血清中的SOD、GSH-Px、MDA含量。

1.4檢測(cè)方法

采用亞硝酸鹽法測(cè)定血清SOD活力；硫代巴比妥酸法測(cè)定血清MDA的含量；硫代二硝基苯甲酸直接法測(cè)定GSH-Px活力。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

模型組小鼠血清中SOD、GSH-Px含量比正常對(duì)照組明顯降低，而MDA含量明顯升高，復(fù)方卡力孜然酊組和復(fù)方倍他米松組小鼠血清中SOD、GSH-Px含量明顯升高， MDA含量明顯降低。表明復(fù)方卡力孜然酊和復(fù)方倍他米松具有治療白癜風(fēng)的作用。見(jiàn)表1。

表1 得寶松對(duì)白癜風(fēng)小鼠血清中SOD、GSH-Px、MDA的影響

注：與模型對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.011

3 討論

白癜風(fēng)是一種獲得性色素脫失性皮膚病，病因及發(fā)病機(jī)制尚未明確，研究表明其與氧化應(yīng)激、黑素細(xì)胞自毀、遺傳因素、自身免疫狀態(tài)、酪氨酸缺乏等因素有關(guān)[3]。白癜風(fēng)治療相對(duì)困難，常見(jiàn)傳統(tǒng)的治療方法有糖皮質(zhì)激素、免疫調(diào)節(jié)治療、準(zhǔn)分子光、UVB治療、中醫(yī)療法、手術(shù)等，部分患者經(jīng)上述系統(tǒng)用物后仍不能取得滿意療效，推測(cè)其皮損局部免疫可能處于異常狀態(tài)。筆者采用5%過(guò)氧化氫化學(xué)脫色法制備白癜風(fēng)的小鼠模型，模型對(duì)照組肉眼觀察及切片鏡下結(jié)果均符合白癜風(fēng)患者臨床和病理特征。氧化應(yīng)激在致黑素細(xì)胞變性中起著至關(guān)重要的作用[4-6]，表皮內(nèi)活性氧族過(guò)度聚集使黑素細(xì)胞膜脂質(zhì)合成及循環(huán)紊亂，導(dǎo)致黑色素細(xì)胞的凋亡和破壞，抗氧化劑如谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、MDA 是脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，為氧化應(yīng)激發(fā)生的指標(biāo)。Yildirim M等[7]研究發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)患者皮損活體組織中MDA含量較正常人皮膚中的含量明顯升高，推測(cè)白癜風(fēng)患者體內(nèi)氧化應(yīng)激的失衡導(dǎo)致活性氧族過(guò)度產(chǎn)生，繼而介導(dǎo)脂質(zhì)過(guò)氧化，誘導(dǎo)黑色素細(xì)胞的凋亡。

復(fù)方倍他米松注射液是一種長(zhǎng)效類(lèi)糖皮質(zhì)激素，由倍他米松磷酸二鈉及二丙酸倍他米松組成，其中倍他米松磷酸二鈉溶于水，在體內(nèi)可被迅速吸收而起效,二丙酸倍他米松微溶于水，在體內(nèi)可緩慢釋放而維持療效具有抑制炎癥反應(yīng)、降低毛細(xì)血管通透性、抑制免疫反應(yīng)及減輕脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)等作用[8]。有研究表明糖皮質(zhì)激素可以改善急性睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后睪丸抗氧化能力及精子的活力[9]，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，復(fù)方倍他米松注射液可顯著增加小鼠血液中SOD、GSH-Px的含量，降低可致細(xì)胞損傷的脂質(zhì)過(guò)氧化分解產(chǎn)物MDA的含量。說(shuō)明復(fù)方倍他米松注射液具有清除氧自由基的抗氧化作用，對(duì)白癜風(fēng)可以起到治療作用。

總之，本研究表明復(fù)方倍他米松注射液改變了實(shí)驗(yàn)性白癜風(fēng)小鼠的某些抗氧化參數(shù)，推測(cè)氧化應(yīng)激在白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制中可能起重要作用，然而，尚需要進(jìn)一步研究，以驗(yàn)證通過(guò)抗氧化治療是否能作為治療白癜風(fēng)患者有效方法，并進(jìn)一步闡明其發(fā)病機(jī)制。

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吉林省科技廳項(xiàng)目(3D515P033430)

*通訊作者

1007-4287(2017)12-2185-02

2017-02-05)