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    長春地區(qū)120例健康成人外周血T淋巴細胞亞群的參考范圍

    2017-12-26 06:25:07孫大菊劉穎男呂惠影王雅麗張玉成
    中國實驗診斷學 2017年12期
    關(guān)鍵詞:聯(lián)誼吉林大學亞群

    孫大菊,劉穎男,呂惠影,王雅麗,張玉成*

    (1.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 病理科,吉林 長春130033;2.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 科學研究中心,吉林 長春130033;3.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 輸血科,吉林 長春 130033)

    長春地區(qū)120例健康成人外周血T淋巴細胞亞群的參考范圍

    孫大菊1,劉穎男2,呂惠影2,王雅麗3*,張玉成2*

    (1.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 病理科,吉林 長春130033;2.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 科學研究中心,吉林 長春130033;3.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 輸血科,吉林 長春 130033)

    外周血T淋巴細胞亞群的檢測已經(jīng)廣泛應用于多種疾病的診斷、探索疾病的發(fā)病機理、以及指導臨床醫(yī)生觀察病患的發(fā)病規(guī)律和藥物療效觀察等等。流式細胞術(shù)是檢測外周血T淋巴細胞亞群的最主要的方法。目前,臨床醫(yī)院和科研機構(gòu)應用的流式細胞儀主要來自美國的BD和Beckman Coulter公司。但是,各大醫(yī)院及其科研機構(gòu)應用的機器型號各有不同,并且,市面銷售的熒光抗體廠家繁多,具有臨床資質(zhì)的流式細胞儀和試劑本就不多。更為重要的,T淋巴細胞亞群與種族、人種、年齡和生活狀態(tài)能具有密切相關(guān)。為此,各臨床機構(gòu)有必要依據(jù)各地的實際情況,建立適合自己實驗室(相關(guān)的儀器和試劑)獨立的臨床參考范圍。為此,我們使用Beckman Coulter 公司的流式細胞儀(型號FC 500)和試劑,對長春地區(qū)120例健康成人外周血T淋巴細胞亞群進行檢測,現(xiàn)總結(jié)如下。

    1 材料與方法

    1.1研究對象本研究選取吉林省長春市吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院健康體檢者120名,均為漢族,其中男性62名,女性58名,年齡20-60歲,其中女性平均年齡42.7歲,男性平均年齡41.5歲。所有的健康體檢者均無近期吸煙、飲酒和服藥,均無家族性遺傳史;并且均沒有細菌和病毒感染,HIV、乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒血清學指標均為陰性;心、肝、脾肺腎均未見異常。所有健康體檢者均同意參加外周血T淋巴細胞亞群的檢測,并且此檢測完全符合中日聯(lián)誼醫(yī)院倫理道德標準。

    1.2主要試劑和儀器所有試劑均為美國Beckman Coulter公司生產(chǎn)。主要包括:四色T淋巴細胞亞群抗體:CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD3-PC5 (試劑貨號:6607013);紅細胞裂解液:OptiLyse B No-Wash Lysing Solution (試劑貨號:IM1400);熒光對照抗體:IgG2b-FITC/IgG1-PE/IgG1-ECD/IgG1-PC5;流式細胞儀:Beckman Coulter公司(型號FC 500)。

    1.3樣本處理采集健康體檢者外周血1 ml,加入到帶有EDTA抗凝的真空管中,混勻以防止血液凝固。分別取兩只流式細胞儀上樣管,命名為對照管和實驗管;每管中加入100 μl抗凝全血,分別加入20 μl同型對照抗體和四色T淋巴細胞亞群抗體;充分混勻后,避光室溫孵育20 min;然后向每管中加入紅細胞裂解液500 μl,充分混勻后,室溫避光20 min;加入PBS 500 μl,混勻,1 000 r/min 離心5 min;去掉上清,再重復清洗一次;最后去掉上清,加入500 μl PBS,上機。

    1.4上機檢測大體實驗步驟如前所述[1],簡述如下:打開流式細胞儀,待儀器激光穩(wěn)定后,利用熒光微球上機驗證儀器正常;打開四色程序,利用CD45-FITC圈取淋巴細胞,每份樣本選取細胞數(shù)10000個,樣本采集后,利用CXP Analysis軟件分析CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+占淋巴細胞的百分比。

    1.5統(tǒng)計分析統(tǒng)計學方法采用SPSS 17.0進行t檢驗,數(shù)值用均值和標準差表示,P<0.05代表有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1不同性別外周血T淋巴細胞亞群結(jié)果(見表1),結(jié)果發(fā)現(xiàn)各項指標之間沒有統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

    2.2不同年齡外周血T淋巴細胞亞群結(jié)果分為兩組,分別為20-40歲和40-60歲,結(jié)果發(fā)現(xiàn)各項指標在不同年齡組中無統(tǒng)計學差異(P>0.05),見表2。

    2.3用百分位數(shù)法獲得120例健康成人外周血T淋巴細胞的95%的可信區(qū)間,以此建立長春地區(qū)健康成人外周血T淋巴細胞亞群的參考范圍,見表3。

    表1 不同性別外周血T淋巴細胞亞群結(jié)果

    表2 不同年齡外周血T淋巴細胞亞群結(jié)果

    表3 120例長春地區(qū)健康成人外周血T淋巴細胞亞群的參考范圍

    3 討論

    T淋巴細胞是細胞免疫的重要組成部分,其對維持機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、機體的免疫防御、免疫監(jiān)視等均具有舉足輕重的重要作用。根據(jù)T淋巴細胞表面標志物CD4和CD8的不同,將T淋巴細胞分為CD3+CD4+和CD3+CD8+兩種類型的T淋巴細胞[2]。應用流式細胞術(shù)技術(shù)檢測外周血T細胞亞群的檢測是臨床上觀察細胞免疫的最常用方法[3]。CD3+CD4+、CD3+CD8+以及CD4/CD8比值的檢測對艾滋病、腫瘤、自身免疫病和移植排斥等疾病的評估、藥物觀察和疾病進展等具有重要的臨床指導意義。但是各地由于使用儀器試劑、民族、地域和年齡的差異,造成T淋巴細胞亞群的參考范圍各有不同。因此,有必要建立適用于本地區(qū)的健康成人外周血T淋巴細胞亞群的參考數(shù)值[4-6]。

    本研究利用Beckman Coulter公司的流式細胞儀FC 500,結(jié)合四色熒光抗體檢測了120例正常健康人外周血T淋巴細胞亞群,我們的研究發(fā)現(xiàn)T淋巴細胞亞群在性別和年齡上沒有統(tǒng)計學差異,最后我們利用95%的可信區(qū)間,建立了適合我研究室的T淋巴細胞亞群的參考范圍。與國內(nèi)發(fā)表的當?shù)亟】党扇薚淋巴細胞亞群參考范圍比較,我們的研究結(jié)果與湖南省差距較大[7],而與北京地區(qū)差異較小[8],這可能與地域差異有關(guān)。在國際上,Lee等[9]研究發(fā)現(xiàn)即便是不同性別的T淋巴細胞亞群也存在著差異,其研究結(jié)果顯示男性CD3+CD8+淋巴細胞百分比高于女性,而CD3+和CD3+CD4+淋巴細胞百分比低于女性。

    但是我們的研究也存在一些不足之處,第一:樣本量選擇120例健康成人外周血,采取的樣本量不夠大,我們的參考范圍可能不能完全反應本地區(qū)的真實參考數(shù)值。第二:我們應用的儀器及試劑均為Beckman Coulter公司生產(chǎn)的,其他公司(例如BD公司)的檢測結(jié)果是否與本室相同未能得知。第三:患者的個體生活環(huán)境未能完全獲得,且我們只選擇了漢族人口作為檢測指標,未能全面包含本地區(qū)少數(shù)民族的檢測結(jié)果。

    總之,建立本地區(qū)的健康成人外周血T淋巴細胞亞群的參考范圍,具有較重要的臨床指導意義。

    [1]曹林林,劉穎男,鄭德明,等.乳腺癌患者手術(shù)前后T淋巴細胞亞群變化的實驗研究[J].中國實驗診斷學,2013,17(1):113.

    [2]邵 彬,李惠平,邸立軍,等.外周血淋巴細胞亞群監(jiān)測對復發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌的預測及預后價值[J].北京大學學報(醫(yī)學版),2016,48(2):304.

    [3]Tomasello E,Pollet E Vu Manh TP,et al.Harnessing Mechanistic Knowledge on Beneficial Versus Deleterious IFN-I Effects to Design Innovative Immunotherapies Targeting Cytokine Activity to Specific Cell Types [J].Front Immunol,2014,5(6):526.

    [4]郭曉輝,張 麗,謝世平.艾滋病常見中醫(yī)證型與T淋巴細胞亞群的統(tǒng)計學分析[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2016,11(1):52.

    [5]童 春,郭 智,樓金星,等.異基因造血干細胞移植后T淋巴細胞亞群監(jiān)測的臨床意義[J].中國實驗血液學雜志,2016,24(1):167.

    [6]姚 斕,王燕嬉,張 偉.老年肺癌患者外周血T淋巴細胞亞群和自然殺傷細胞的臨床及意義[J].中國老年學雜志,2016,36(4):860.

    [7]何志雄,李木蘭,袁才佳,等.湖南省成人外周血T淋巴細胞亞群的參考范圍[J].現(xiàn)代預防醫(yī)學,2014,41(18):3395.

    [8]韓呈武,于雪瑩,王麗娜,等.北京地區(qū)健康成人外周血T淋巴細胞亞群的參考范圍[J].臨床檢驗雜志,2009,27(5):390.

    [9]Lee BW,Yap HK,Chew FT,et al.Age- and sex-related changes in lymphocyte subpopulations of healthy Asian subjects:from birth to adulthood [J].Cytometry,1996,26(1):8.

    吉林省衛(wèi)生計生青年科研項[2014Q25],白求恩醫(yī)學科研支持計劃項目[2013207058]

    *通訊作者;*相同貢獻

    1007-4287(2017)12-2160-02

    孫大菊(1980-),女,碩士,主管技師,主要從事細胞病理學診斷及技術(shù)。

    2017-02-15)

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