HPLC—ELSD法測定羅紅霉素膠囊的含量

錢婉霞

摘 要：本文用高效液相法對羅紅霉素膠囊中的羅紅霉素的進(jìn)行了含量測定。固定相為：依利特hypersil BDS C18 色譜柱（4.6*250*5u），甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1）為流動相，漂移管溫度為80攝氏度；載氣流速為1.5ml/min；羅紅霉素在20～400μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。羅紅霉素的平均回收率為99.1%。本法簡便、重現(xiàn)性好、回收率高，可用于羅紅霉素膠囊中羅紅霉素的含量測定。

關(guān)鍵詞：羅紅霉素膠囊；羅紅霉素；測定

羅紅霉素是新一代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，主要作用于革蘭氏陽性菌、厭氧菌、衣原體和支原體等。羅紅霉素體外抗菌作用與紅霉素相類似，體內(nèi)抗菌作用比紅霉素強(qiáng)1-4倍。羅紅霉素對肺炎衣原體、肺炎支原體、溶脲脲原體的抗微生物作用與紅霉素相仿或略強(qiáng)。羅紅霉素適用于沙眼衣原體引起的尿道炎和宮頸炎；化膿性鏈球菌引起的咽炎及扁桃體炎，敏感菌所致的鼻竇炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作，肺炎支原體或肺炎衣原體所致的肺炎；敏感細(xì)菌引起的皮膚軟組織感染。本文用高效液相法對羅紅霉素膠囊中的羅紅霉素的進(jìn)行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：10L-50L大型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（北京賽美思儀器設(shè)備有限公司）；ZAM3000ELSD蒸發(fā)光散射檢測器（北京溫分分析儀器技術(shù)開發(fā)公司）；JΜLABO TW系列通用水浴槽（優(yōu)萊博技術(shù)（北京）有限公司）；HN-6AL功率可調(diào)超聲波清洗（上海汗諾儀器有限公司）；XSYF-D 實(shí)驗(yàn)室廢水處理設(shè)備（北京湘順源科技有限公司）；PH-660高精度實(shí)驗(yàn)室酸度計(jì)（上海禾工科學(xué)儀器有限公司）；BT賽多利斯電子天平（北京五洲東方科技發(fā)展有限公司）。

1.2 試藥：乙腈（杭州匯普化工儀器有限公司）、甲醇（杭州匯普化工儀器有限公司）、冰乙酸（天津市順隆達(dá)科技有限公司）、三乙胺（杭州匯普化工儀器有限公司）、乙酸（天津市順隆達(dá)科技有限公司）、磷酸（天津市順隆達(dá)科技有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。色譜柱為依利特hypersil BDS C18 色譜柱（4.6*250*5u）；以甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1）為流動相，漂移管溫度為80攝氏度；載氣流速為1.5ml/min。理論板數(shù)按羅紅霉素峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取羅紅霉素膠囊內(nèi)容物適量，精密稱定至容量瓶內(nèi)，加適量流動相超聲20分鐘，放涼，用流動相定容，過0.45μm的濾膜，即得。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取羅紅霉素對照品約5mg，置10毫升棕色容量瓶中，用流動相超聲波振蕩溶解并用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL溶液中含羅紅霉素50μg）。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為20μg·mL-1、40μg·mL-1、80μg·mL-1、160μg·mL-1、240μg·mL-1、320μg·mL-1、400μg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值的對數(shù)A（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，羅紅霉素對照品在20～400μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取羅紅霉素對照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.69%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取同批羅紅霉素膠囊樣品6份，分別制備成供試品，按色譜條件測定含量，并計(jì)算樣品的RSD值為0.73%，結(jié)果表明，此含量測定方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別在0，0.5小時，1.0小時，1.5小時，2.0小時，4.0小時精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測定，供試品羅紅霉素峰面積積分值的RSD為0.82%。結(jié)果表明羅紅霉素在4.0小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 陰性干擾試驗(yàn)

按處方除羅紅霉素的原輔料，按方中比例和制備工藝方法制成陰性制劑，用以上選定的測定條件進(jìn)行吸收曲線繪制，觀察在與羅紅霉素相同的保留時間處是否存在吸收峰，結(jié)果：在選定條件下測得的陰性液吸收曲線在與羅紅霉素相同保留時間處不存在吸收峰，表明選定的條件測定羅紅霉素?zé)o干擾，具有較強(qiáng)的專屬性。

2.9 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的羅紅霉素對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時測定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測定的平均回收率為99.1%，RSD為0.86%。

2.10 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定羅紅霉素膠囊三批樣品中羅紅霉素的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為標(biāo)示量的100.5%、99.3%、100.6%。

3 討論

分別考察甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1），0.2mol/L的乙酸-甲醇（80：20），水-甲醇-磷酸（10：90：0.01），甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（600：400：0.2：0.1），水-甲醇-乙腈-冰醋酸（10：60：30：0.1），甲醇-水-三乙胺（70∶30：0.2）不同比例的流動相，結(jié)果以甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1）為流動相。本實(shí)驗(yàn)方法是一種簡便、準(zhǔn)確、安全的測定羅紅霉素膠囊含量的方法。羅紅霉素膠囊中羅紅霉素的含量應(yīng)為標(biāo)示量的95-105%。

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