高效液相色譜法測定腎舒康膠囊淫羊藿苷含量

徐殿鵬

摘 要：本文采用高效液相法對腎舒康膠囊中的淫羊藿苷的進(jìn)行了含量測定。采用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-水（25∶10：65）為流動(dòng)相，檢測波長為270nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。淫羊藿苷在50～300μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。淫羊藿苷平均回收率分別為99.6%。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，可用于腎舒康膠囊中淫羊藿苷的含量測定。

關(guān)鍵詞：腎舒康膠囊；含量；測定

腎舒康膠囊由淫羊藿、地黃、川牛膝、王不留行等組成，主要用于腎脾兩虛。淫羊藿別名剛前（《本經(jīng)》）、仙靈脾（《雷公炮炙論》）、仙靈毗（《柳柳州集》）干雞筋、（《日華子本草》）、三枝九葉草（《本草圖經(jīng)》）、鐵打杵（《貴州民間方藥集》）、鐵菱角（《湖南藥物志》）等。淫羊藿具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的功效。淫羊藿用于陽痿遺精、筋骨痿軟、風(fēng)濕痹痛、更年期高血壓等?！度杖A子本草》記載：“治一切冷風(fēng)勞氣，補(bǔ)腰膝，強(qiáng)心力，丈夫絕陽不起，女子絕陰無子，筋骨攣急，四肢不任，老人昏耄，中年健忘?！币蜣胶邢灤迹–eryl alcohol）、卅一烷（Hentriacontane）、植物甾醇（Phytosterol）、棕櫚酸（Palmitic acid）、亞油酸（Linoleic acid）、亞麻酸（Linolenic acid）、銀杏醇（Bilobanol）、木蘭堿（Magnoflorin）、β-去水淫羊藿素（β-anhy-Droicaritin）、維生素 E、淫羊藿次甙（Icariside）、去氧甲基淫羊藿甙（des-O-Methylicariin）、淫羊藿糖甙A等。淫羊藿在對骨系統(tǒng)、免疫調(diào)節(jié)和延緩衰老、生殖系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等方面有廣泛的生理活性[1-5]。本文采用高效液相法對腎舒康膠囊中的淫羊藿苷的進(jìn)行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：LC2000液相色譜（天美（中國）科學(xué)儀器有限公司）；FA124電子分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司） ；PURELAB flex純水機(jī)（威立雅水處理技術(shù)（上海）有限公司）；KQ250DE超聲波清洗器超聲波檢測儀器（煙臺鑫康商貿(mào)有限公司）；全自動(dòng)逆流酸清洗Autoclean 100（長春星銳智能化科技有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司 C18 色譜柱（220 mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：淫羊藿苷

1.4 試劑：甲醇（廣州市江順化工科技有限公司）、三乙胺（廣州市江順化工科技有限公司）、磷酸（廣州市卡朋斯化工科技有限公司）、乙腈（廣州市江順化工科技有限公司）、磷酸二氫鉀（格里斯（天津）醫(yī)藥化學(xué)技術(shù)有限公司）、冰醋酸（格里斯（天津）醫(yī)藥化學(xué)技術(shù)有限公司）。

1.5 試藥：腎舒康膠囊

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。流動(dòng)相：乙腈-甲醇-水（25∶10：65）為流動(dòng)相，檢測波長：270nm，流速：1.0ml·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取淫羊藿苷對照品適量，置容量瓶中，加流動(dòng)相制成每1mL含100μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取供試品內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取，置具塞錐形瓶中，精密加入流動(dòng)相10mL，密塞，精密稱定重量，超聲處理10分鐘，放冷，精密稱定，用流動(dòng)相補(bǔ)足重量，搖勻，濾過。取續(xù)濾液，即得。

2.4 專屬性試驗(yàn)

依照處方取除淫羊藿，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，照2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結(jié)果在淫羊藿苷出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加流動(dòng)相使溶解，制成濃度為100μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.86%，表明本方法精密度良好。

2.6 對照品的線性考察

精密稱取適量淫羊藿苷對照品，加入流動(dòng)相溶液使溶解分別配制成每毫升含50、100、150、200、250、300微克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果表明，淫羊藿苷在50～300μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的腎舒康膠囊樣品6份，按測定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.73%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取對照品適量， 按處方比例及工藝規(guī)程制備模擬粒各20粒，含量分別相當(dāng)于標(biāo)示量的80%、100%、120%。取模擬片照“含量測定”項(xiàng)下方法試驗(yàn)，計(jì)算回收率為99.6%，RSD為0.71%。

2.9 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批腎舒康膠囊樣品，按2.3項(xiàng)下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、1、2、3、4、5、6小時(shí)，精密吸取供試品溶液10？滋l 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定腎舒康膠囊中淫羊藿苷的RSD=0.53%。結(jié)果表明供試品6小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定腎舒康膠囊三批樣品中淫羊藿苷的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為1.81毫克/粒、1.86毫克/粒、1.83毫克/粒。

3 討論

分別考察甲醇-水-三乙胺（70∶30：0.2），乙腈-甲醇-0.2mol.L-1磷酸二氫鉀-冰醋酸（20∶5：75：0.1），水-甲醇-乙腈（50：20：30），乙腈-甲醇-0.2mol.L-1磷酸二氫鉀-冰醋酸（20∶10：69：1），乙腈-甲醇-水（25∶10：65）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-甲醇-水（25∶10：65）為流動(dòng)相為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-甲醇-水（25∶10：65）為流動(dòng)相為流動(dòng)相。

參考文獻(xiàn)

[1]包宇，楊建雄，孫潤廣.淫羊藿苷可緩解腎陽虛小鼠睪酮及性腺雄激素受體基因的表達(dá)下調(diào)（英文）[J].中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2011（02）.

[2]吳瑕，楊薇，張磊，王嵐，李東曉，鄧文龍.下丘腦-垂體-性腺軸阻斷對淫羊藿促性激素作用的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011（05）.

[3]蔡輝，趙凌杰，袁愛紅，董曉蕾，趙智明.淫羊藿總黃酮對高脂血癥大鼠SOD活性的影響[J].廣東醫(yī)學(xué)，2011（04）.

[4]韓愛萍，張潔，丁選勝.淫羊藿總黃酮對糖尿病小鼠血管功能的影響[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011（03）.

[5]杜道兵，盧萬根，曹叢仁，洪樂鵬，葉秉坤，許孟杰，郝彥利，冷水龍.淫羊藿苷促進(jìn)宮頸癌TC-1細(xì)胞凋亡作用的研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011（04）.