匹多莫德治療小兒支原體肺炎的療效及對Foxp3基因表達的影響

潘 娜，崔亞琦，焦黎旭

（河南省鄭州市婦幼保健院藥劑科，河南 鄭州 450002）

匹多莫德治療小兒支原體肺炎的療效及對Foxp3基因表達的影響

潘 娜，崔亞琦，焦黎旭

（河南省鄭州市婦幼保健院藥劑科，河南 鄭州 450002）

目的 觀察匹多莫德治療小兒支原體肺炎的療效及對Foxp3基因表達的影響。方法 選取2016年1月至12月收治的支原體肺炎患兒112例，采用隨機數(shù)字表法分為對照組和觀察組，各56例。對照組給予常規(guī)治療＋阿奇霉素治療，觀察組加用匹多莫德治療，治療30 d后比較療效。另取該院健康體檢兒童志愿者50例作為正常組。采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法監(jiān)測3組研究對象的Foxp3基因表達，采用流式細胞儀檢測調(diào)節(jié)性T細胞水平。結(jié)果 治療30 d后，觀察組總有效率為92.86%，明顯高于對照組的82.14%（P＜0.05）；治療前，觀察組患兒的Foxp3基因表達和Treg細胞比例與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但均低于正常組兒童（P＜0.05）；治療后，兩組患兒的Foxp3基因表達與Treg細胞比例均較治療前有所提高（P＜0.05），觀察組患兒升幅明顯高于對照組（P＜0.05）。結(jié)論 匹多莫德治療支原體肺炎療效顯著，且能顯著提高患兒的Foxp3基因表達與Treg細胞比例，增強免疫力。

匹多莫德；小兒；支原體肺炎；Foxp3基因；療效

支原體肺炎是兒童最常見的呼吸道感染性疾病，每隔4～6年會出現(xiàn)區(qū)域性流行[1]，在非流行年間占小兒呼吸道感染疾病的10% ～20%，流行年份則高達30%[2]。相關(guān)研究表明，本病患兒伴有機體免疫調(diào)節(jié)功能紊亂[3]。因此，越來越多的學(xué)者開始關(guān)注免疫功能紊亂在本病發(fā)病機制中的作用，希望以此為靶點對其進行治療。匹多莫德為免疫調(diào)節(jié)劑，多用于免疫力低下患者預(yù)防急性感染。本研究中應(yīng)用匹多莫德治療支原體肺炎，觀察了療效及對Foxp3基因表達的影響?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《兒童肺炎支原體肺炎診治專家共識（2015年版）》[4]中兒童支原體肺炎的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法測定血清肺炎支原體免疫球蛋白M(MP－IgM)均為陽性；年齡3～9歲。家屬對本研究知情并簽署知情同意書，本研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會通過。

排除標(biāo)準(zhǔn)：心、肝、腎等臟器病變；其他急、慢性感染性疾?。患に鼗蛎庖哒{(diào)節(jié)劑使用史；對相關(guān)藥物過敏。

病例選擇與分組：選取2016年1月至12月我院呼吸內(nèi)科收治的支原體肺炎患兒112例，其中男69例，女43例，采用隨機數(shù)字表法分為對照組和觀察組，各56例；另取醫(yī)院健康體檢兒童志愿者50例，作為正常組，其中男31例，女19例。3組對象一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性，詳見表 1。

表1 3組對象一般資料比較

1.2 儀器與試藥

OD260／280核酸定量分析儀（Pharmacia公司）；PCR儀（PE公司）；FACS Calibur流式細胞儀（美國BD公司）。PCR引物由上海生工生物技術(shù)有限公司合成，F(xiàn)oxp3上游引物為 5′－ACAGCACATTCCCAGAGTTCCT－3′，下游引物為 5′－TCTCCACCCGCACAAAGCA－3′；GADPH 上游引物為 5′－ CCCATCACCATCTTCCAG －3′，下游引物為 5′－ ATGACCTTGCCCACAGC －3′；Trizol（Invitrogen 公 司 ）；逆 轉(zhuǎn) 錄 盒 （Fermentas 公 司 ）；50bpDNAladder（北京天根生物技術(shù)公司）；Foxp3抗體（eBioscience公司）；EnVision 兩步法試劑盒（Dako公司）；FITC －CD4和 PE －CD25抗體（Invitrogen公司）。

1.3 方法

治療方法：兩組患者均給予退熱、止咳、化痰等常規(guī)治療。對照組患兒在常規(guī)治療基礎(chǔ)上給予阿奇霉素注射液（湖北潛江制藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20050648，規(guī)格為每支 2 mL ∶0.25 g）20 mg／kg(加入 250 mL 0.9%氯化鈉注射液靜脈滴注)，每日1次，5 d為1個療程，治療1～3個療程（視患兒情況而定）；癥狀緩解后改用口服阿奇霉素顆粒10 mg／kg，每日1次，連用3 d。觀察組患兒在對照組治療基礎(chǔ)上給予匹多莫德口服液（意大利多帕藥業(yè)有限公司，進口藥品注冊證號H20150635，規(guī)格為每支400 mg）口服，每次400 mg，每日2次，連用2周后改為每次400 mg，每日1次，共服用4周。

Foxp3基因表達熒光定量PCR檢測：分別留取3組觀察對象入組前與治療結(jié)束后的靜脈血1 mL，用RNA提取與反轉(zhuǎn)錄試劑盒，反轉(zhuǎn)錄得cDNA第一鏈；熒光定量檢測試劑盒檢測Foxp3基因表達，反應(yīng)條件為94℃60 s，94 ℃ 30 s，61 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，重復(fù) 30 個循環(huán)。

調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）的流式細胞儀檢測：分別留取3組觀察對象入組前與治療結(jié)束后的靜脈血5 mL，裂解紅細胞，用磷酸鹽緩沖液(PBS)，洗滌2次，用0.4 mL PBS懸浮細胞，加入 FITC－CD4和 PE－CD25抗體各 10 μL，避光染色30 min，采用流式細胞儀檢測。

1.4 療效判定標(biāo)準(zhǔn)[5]

痊愈：臨床癥狀及體征消失，血常規(guī)、胸部X線攝片顯示正常；有效：臨床癥狀及體征好轉(zhuǎn)，胸部X線攝片檢查顯示病灶大部分吸收；無效，臨床癥狀及體征無改善，甚至加重，肺部體征無改善?？傆行В饺行?。Foxp3基因表達采用 評估，△Ct值＝目的基因Ct值－內(nèi)參基因 Ct值[6]。Treg用流式細胞儀檢測，F(xiàn)ITC－CD4和PE－CD25雙陽性細胞。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

結(jié)果見表2、表3和圖1。

表2 觀察組及對照組患兒臨床療效比較[例（%），n＝56]

圖1 Treg細胞的流式細胞儀檢測結(jié)果

3 討論

支原體感染臨床表現(xiàn)多樣，除肺部炎癥外，還可引發(fā)多種肺外嚴(yán)重并發(fā)癥，嚴(yán)重威脅患兒的身心健康。支原體感染機體，不僅與微生物的入侵有關(guān)，還與機體免疫力的降低有關(guān)，自身免疫機制在支原體肺炎發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮了非常重要的作用。Treg是體內(nèi)存在的一群具有免疫調(diào)節(jié)作用的T細胞亞群，具有免疫無反應(yīng)性和免疫抑制性，在維持免疫系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)及免疫耐受方面起著非常重要的作用[7]。Foxp3為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，是Treg細胞特異性的分子標(biāo)記，叉頭／翼狀螺旋結(jié)構(gòu)是其特征性結(jié)構(gòu)，而此結(jié)構(gòu)域中的蛋白質(zhì)屬DNA結(jié)合因子家族成員，具有逆轉(zhuǎn)錄作用，主要表達于 CD4＋、CD25＋的Treg細胞[8]。機體對自身抗原的免疫耐受是一個嚴(yán)密調(diào)控的過程，相關(guān)研究表明，在胸腺中產(chǎn)生的CD4＋T細胞亞群中有些可持續(xù)表達CD25＋分子，以維持機體免疫耐受，且在CD4＋T細胞階段開始分化時，胸腺上皮細胞提呈的某些抗原能誘導(dǎo)Foxp3分子的表達[9]。本研究結(jié)果顯示，支原體肺炎患兒入組前，F(xiàn)oxp3基因表達與Treg細胞比例均低于正常兒童，因此證明支原體患兒存在自身免疫功能調(diào)節(jié)障礙。

阿奇霉素是第2代大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物，是目前臨床治療支原體肺炎的常用藥物[10]，具有起效快、作用時間長等特點。接受阿奇霉素治療后，患者體溫恢復(fù)正常、咳嗽消失、肺部羅音消失，但僅能改善患者的臨床表現(xiàn)，患者機體自身免疫調(diào)節(jié)功能并未改善[11]。匹多莫德是一種合成的具有免疫活性的二肽類分子，不僅可促進非特異性免疫反應(yīng)，還可促進特異性免疫反應(yīng)[12]。動物研究證明，匹多莫德可增加正常及免疫功能低下小鼠吞噬細胞的吞噬能力和抗體分泌細胞的抗體產(chǎn)生能力，從而提高免疫力[13]；此外，還可通過刺激白細胞介素1和干擾素促進細胞免疫反應(yīng)，增強機體免疫功能[14]。本研究結(jié)果顯示，加用匹多莫德治療支原體肺炎總有效率顯著高于單用阿奇霉素，且能有效改善患者體內(nèi)Foxp3基因表達與Treg細胞比例。

綜上所述，匹多莫德治療支原體肺炎療效顯著，且能顯著提高患兒Foxp3基因表達與Treg細胞比例，提高患兒免疫力，值得臨床推廣。

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Clinical Effect of Pidotimod in Treating Mycoplasma Pneumonia and Its Effect on Expression of Foxp3 Gene

Pan Na， Cui Yaqi， Jiao Lixu
（Department of Pharmacy，Women ＆ Infants Hospital of Zhengzhou，Zhengzhou，Henan，China 450002）

Objective To observe the clinical effect of pidotimod for treating mycoplasma pneumonia and its effect on the expression of Foxp3 gene.Methods Totally 112 children patients with mycoplasma pneumonia admitted to our hospital from January to December in 2016 were selected and divided into the control group and the observation group by random number table method，56 cases in each group.The control group was given conventional treatment and azithromycin，on this basis，the observation group was given pidotimod.After 30 d of treatment，the clinical effect between the two groups was compared.Another 50 healthy children volunteers were selected as the normal group，and the expression of Foxp3 gene was monitored by fluorescence quantitative PCR in the three groups.The regulatory T cells were detected by flow cytometry（FCM）.Results After 30 d of treatment，the total effective rate of the observation group was 92.86% ，which was significantly higher than 82.14% of the control group （ P ＜ 0.05）.Before treatment，there was no significant difference in the expression of Foxp3 gene and the proportion of Treg cells between the observation group and the control group（P ＞ 0.05），but those in the two groups were significantly lower than those in the normal group （P ＜ 0.05）.After treatment，the increase of the expression of Foxp3 geneand theproportion of Treg cellsin the observation group and the controlgroup was significantly higher than before treatment，and that in the observation group was significantly higher than that in the control group（P ＜ 0.05）.Conclusion Pidomorph for treating children with mycoplasma pneumonia has good effect，it can significantly improve the expression of Foxp3 gene and the proportion of Treg cells and enhance immunity，which is worthy of clinical promotion.

pomodomide；chidren；mycoplasma pneumonia；Foxp3 gene；curative effect

R965.2；R979.5

A

1006－4931(2017)22－0012－03

10.3969 ／j.issn.1006 － 4931.2017.22.004

潘娜（1977－），女，大學(xué)本科，主管中藥師，研究方向為醫(yī)院藥學(xué)，（電子信箱）304068594＠qq.com。

2017－07－10)