上海市金山區(qū)奶牛傳染性鼻氣管炎血清學(xué)調(diào)查

張曉鋒，翁永剛，李守富，郭 海，陳 岡，葉結(jié)平，范紅結(jié)，陳鴻軍

（1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，南京210095；2.上海市金山區(qū)農(nóng)業(yè)委員會(huì)，上海200540；3.上海市金山區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海201500；4.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海200241）

上海市金山區(qū)奶牛傳染性鼻氣管炎血清學(xué)調(diào)查

張曉鋒1,2，翁永剛3，李守富3，郭 海3，陳 岡3，葉結(jié)平3，范紅結(jié)1，陳鴻軍4

（1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，南京210095；2.上海市金山區(qū)農(nóng)業(yè)委員會(huì)，上海200540；3.上海市金山區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海201500；4.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海200241）

2016年在上海市金山區(qū)10個(gè)奶牛場(chǎng)共采集460份牛血清，利用商品化牛傳染性鼻氣管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV）gE特異性抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)其進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，金山區(qū)奶牛存在36.67%～97.37%的抗體陽性率，IBRV感染普遍，建議采取綜合管理措施，有效控制該病造成的損失。

傳染性鼻氣管炎；血清學(xué)調(diào)查；奶牛；金山區(qū)

牛傳染性鼻氣管炎（infectious bovine rhinortracheitis，IBR）是由牛傳染性鼻氣管炎病毒（Infectious bovine rhinortracheitis virus，IBRV）引起的一種急性熱性接觸性傳染病，又稱牛皰疹病毒1型感染、“牛傳染性壞死性鼻炎”或“紅鼻病”。IBRV主要通過空氣、媒介物或者與病牛直接接觸而傳播，傳染性強(qiáng)，可導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞免疫功能降低和免疫抑制，易引起繼發(fā)感染，對(duì)產(chǎn)奶、繁育及使役均有較大影響[1,2]。

1950年IBRV首次被分離鑒定[2]。1980年，我國從新西蘭引進(jìn)的種牛體內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)IBRV，目前已呈全國流行[3,4]。近年來，由于國內(nèi)牛只流動(dòng)愈發(fā)頻繁，淘汰患病牛無害化處置不到位，IBR流行嚴(yán)重威脅著養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展，曾有報(bào)道上海市規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)中荷斯坦奶牛IBR抗體陽性率高達(dá)41.86%[5]。同時(shí)，IBRV感染引起牛繼發(fā)性細(xì)菌性肺炎等疾病的現(xiàn)象也較為嚴(yán)重。本研究2016年在上海市金山區(qū)采集460份牛血清進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查，旨在明確該地區(qū)牛IBR感染及血清抗體水平，了解其發(fā)病影響因素，在此基礎(chǔ)上制定針對(duì)IBR的免疫預(yù)防措施，促進(jìn)養(yǎng)牛業(yè)的健康發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 待檢血清 2016年6月在上海市金山區(qū)10家未免疫IBR疫苗的規(guī)?；翀?chǎng)，對(duì)牛進(jìn)行尾靜脈或頸靜脈采血，共采集460份血清。自然凝集析出血清，離心去除紅細(xì)胞，分裝備用。

1.2 抗體檢測(cè)方法 牛傳染性鼻氣管炎抗體檢測(cè)試劑盒為法國ID-Vet公司生產(chǎn)的ID Screen IBR gE Competition ELISA試劑盒（IBRGBC-6P）。使用之前將試劑盒內(nèi)所有組分恢復(fù)到室溫，用振蕩器充分混合。待檢血清按1:2稀釋，分別加于ELISA板對(duì)應(yīng)孔中，4℃過夜；用洗滌液充分洗滌后，加入競(jìng)爭(zhēng)抗體，充分洗滌后加入100 μL酶標(biāo)二抗，室溫作用30 min；洗滌液充分洗滌后加入100 μL TMB底物溶液，室溫作用15 min左右后，加入100 μL終止液終止反應(yīng)，在450 nm波測(cè)定OD值。每板分別設(shè)2個(gè)陽性和2個(gè)陰性對(duì)照孔。結(jié)果判定：陰性對(duì)照平均值（NCx）與陽性對(duì)照的平均值（PCx）之差≥0.3，表明試驗(yàn)有效；血清樣品gE抗體OD值（S）與陰性對(duì)照平均值（NCx）比值≤0.6，判定為陽性；若比值在0.6～0.7，則為可疑；若比值大于0.7，則判定為陰性。

2 結(jié)果和討論

本次血清學(xué)調(diào)查共涉及10個(gè)未免疫IBR疫苗的規(guī)?；膛?chǎng)，檢測(cè)血清樣品共計(jì)460份，陰性對(duì)照OD平均值（NCx）為1.713，陰性與陽性O(shè)D差值均在0.3以上。根據(jù)待檢血清OD（S值）與NCx的比值，按材料和方法中的判定原則，共檢出陽性血清309份，陽性率達(dá)67.17%，可疑的陽性血清數(shù)共42份，比例為9.13%，其余109份血清樣品的檢測(cè)值低于檢測(cè)限，判定為陰性，占23.70%。具體結(jié)果見表1。

表1 上海市金山區(qū)IBR血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果Table 1 Serological investigation of IBR in Jinshan district of Shanghai

IBR在世界范圍內(nèi)廣泛存在，尤其在養(yǎng)牛業(yè)比較發(fā)達(dá)的地區(qū)，并且隨著養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大，流行趨勢(shì)愈發(fā)嚴(yán)重。IBRV侵入牛體后，以潛伏感染和持續(xù)性感染為主要特點(diǎn)，病?？山K生帶毒。該病目前缺乏特效藥物，病牛死亡率較高，給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[4]。近年來我國從國外引進(jìn)種牛后，各地陸續(xù)檢出IBRV抗體陽性牛[6,7]。鑒于IBR危害較為嚴(yán)重，且分布較廣，因而對(duì)該病的發(fā)生與流行情況進(jìn)行普查工作顯得十分必要。

IBRV可導(dǎo)致持續(xù)性感染，免疫并不能有效阻止野毒入侵和繁殖，防治IBR的關(guān)鍵措施是對(duì)牛群進(jìn)行定期檢疫，控制傳染源。家畜傳染病的診斷方法有多種，如血清中和試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)以及核酸探針檢測(cè)技術(shù)等。其中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)具有敏感性高、簡(jiǎn)便、易于標(biāo)準(zhǔn)化的特點(diǎn)，在疾病檢測(cè)中被廣泛應(yīng)用[8,9]。本研究利用ELISA方法對(duì)金山區(qū)460份牛血清進(jìn)行IBR抗體檢查，結(jié)果顯示，被檢10個(gè)奶牛場(chǎng)IBR抗體陽性，最低為36.67%（BZ場(chǎng)），最高陽性率達(dá)97.37%（NS場(chǎng)）。這些奶牛場(chǎng)均未進(jìn)行全病毒或gE缺失病毒疫苗免疫，說明金山區(qū)奶牛存在IBRV廣泛感染的現(xiàn)象。

近幾年上海市金山區(qū)從外區(qū)甚至外省購入廉價(jià)牛的現(xiàn)象普遍存在，人員流動(dòng)較為頻繁；另外，金山區(qū)大部分牧場(chǎng)的飼料原料如苜蓿草、羊草、玉米等均從美國、內(nèi)蒙等國家和地區(qū)購入，來源地疫情不明，運(yùn)輸車輛和人員復(fù)雜，這極有可能是導(dǎo)致感染嚴(yán)重的主要因素。與此同時(shí)，部分牧場(chǎng)思想上不夠重視，管理制度比較混亂，缺乏完善的檢疫、隔離、消毒等綜合性防控措施；個(gè)別牛場(chǎng)牛舍內(nèi)環(huán)境潮濕且通風(fēng)不良，牛床污染物不及時(shí)清理，牛只營(yíng)養(yǎng)不良，生存環(huán)境較為惡劣，也是引發(fā)嚴(yán)重感染的不可忽略的誘發(fā)因素。

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SEROLOGICAL INVESTIGATION OF INFECTIOUS BOVINE RHINOTRACHEITIS ON DAIRY FARMS IN JINSHAN DISTRICT, SHANGHAI

ZHANG Xiao-feng1,2, WENG Yong-gang3, LI Shou-fu3, GUO Hai3, CHEN Gang3, YE Jie-ping3,FAN Hong-jie1, CHEN Hong-jun4

(1. Animal Medicine School, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 2. Jinshan Municipal Agricultural Commission,Shanghai 200540, China; 3. Jinshan Municipal Center for Disease Control and Prevention, Shanghai 201500, China; 4. Shanghai Veterinary Research Institute, CAAS, Shanghai 200241, China)

In this study, 460 serum samples were collected in 2016 from dairy cows on 10 farms in Jinshan district, Shanghai. A serological investigation of infectious bovine rhinotracheitis was performed using a commercial gE ELISA kit. The results showed that the positive rate ranged from 36.67% to 97.37% among dairy farms, indicating wide spread of IBRV infection necessary strategies for the disease control.

Infectious bovine rhinotracheitis; serological investigation; dairy cow; Jinshan district

S852.659.1

B

1674-6422（2017）05-0073-03

2017-07-11

張曉鋒，男，博士研究生，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全、農(nóng)業(yè)科技推廣和重大動(dòng)物疫病防控應(yīng)急管理

陳鴻軍，E-mail：vetchj@shvri.ac.cn；范紅結(jié)，E-mail：fhj@njau.edu.cn