槐杞黃顆粒對(duì)MRL/Lpr狼瘡腎小鼠Th17細(xì)胞的影響及機(jī)制研究

汪衛(wèi) 于健寧 陶筱娟

槐杞黃顆粒對(duì)MRL/Lpr狼瘡腎小鼠Th17細(xì)胞的影響及機(jī)制研究

汪衛(wèi) 于健寧 陶筱娟

目的探討槐杞黃顆粒對(duì)MRL/Lpr狼瘡腎小鼠Th17細(xì)胞的影響以及相關(guān)機(jī)制。方法正常飼養(yǎng)C57BL/6小鼠8只為空白對(duì)照組，8～10周齡MRL/Lpr狼瘡小鼠24只，隨機(jī)分為模型組、槐杞黃顆粒治療組和地塞米松治療組，每組8只。MRL/Lpr狼瘡小鼠12周齡左右開(kāi)始發(fā)病，分別給予槐杞黃顆?；虻厝姿芍委?，檢測(cè)各組處理前后24h尿蛋白定量，血清TGF-β、IL-17含量，腎臟RORC mRNA表達(dá)水平。結(jié)果與模型組比較，地塞米松組和槐杞黃組小鼠治療后尿蛋白含量明顯下降[（245.87±47.25）mg/L、（333.18±22.19）mg/L比（474.69±48.76）mg/L，P＜0.05]；與空白組比較，地塞米松組、槐杞黃組TGF-β和IL-17均升高[TGF-β：（262.69±23.53）ng/L、（352.05±26.77）ng/L比（166.12±36.44）ng/L，P＜0.01；IL-17：（265.25±44.29）pg/mL、（317.33±46.83）pg/mL比（172.03±45.21）pg/mL，P＜0.05，P＜0.01]；與模型組比較，地塞米松組、槐杞黃組TGF-β和IL-17明顯降低[TGF-β：（262.69±23.53）ng/L、（352.05±26.77）ng/L比（593.84±35.02）ng/L，P＜0.01；IL-17：（265.25±44.29）pg/ mL、（317.33±46.83）pg/mL比（602.13±58.30）pg/mL，P＜0.01]；與空白組比較，模型組腎臟Th17細(xì)胞比例和細(xì)胞數(shù)、RORC mRNA表達(dá)量顯著上升[Th17比例：（8.62±0.77）%比（0.05±0.02）%，P＜0.01；Th17細(xì)胞數(shù)：（8.62±0.77）104/mL比（0.05±0.02）104/mL，P＜0.01；RORC mRNA：（11.08±0.89）比（1.00±0.05），P＜0.01]；與模型組比較，地塞米松組、槐杞黃組腎臟Th17細(xì)胞比例和細(xì)胞數(shù)、RORC mRNA表達(dá)顯著下降[Th17比例：（0.15±0.04）%、（4.06±0.43）%比（8.62±0.77）%，P＜0.01；Th17細(xì)胞數(shù)：（0.15±0.04）104/mL、（4.06±0.43）104/mL比（8.62±0.77）104/mL，P＜0.01；RORC mRNA：（3.67± 0.39）、（5.53±0.49）比（11.08±0.89），P＜0.01]。結(jié)論槐杞黃顆粒能減少狼瘡腎小鼠尿蛋白排出，調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞分化，其機(jī)制可能與下調(diào)RORCmRNA表達(dá)有關(guān)。

MRL/Lpr狼瘡小鼠；系統(tǒng)性紅斑狼瘡；槐杞黃；地塞米松；腎損傷；Th17細(xì)胞

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種常見(jiàn)而復(fù)雜的自身免疫性疾病，主要是因免疫耐受失衡導(dǎo)致的T細(xì)胞應(yīng)答失調(diào)和B淋巴細(xì)胞功能亢進(jìn)，使體內(nèi)產(chǎn)生和沉積多種自身抗體和免疫復(fù)合物，從而引起組織損傷[1]。研究表明，Th17細(xì)胞數(shù)量和/或功能異常與SLE發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[2-5]。Th17是一種重要的促炎性細(xì)胞，參與自身免疫性疾病，也是其主要致病性細(xì)胞[5-6]。TGF-β、IL-6和IL-23可促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化發(fā)育[7]。槐杞黃顆粒是由槐耳菌絲、枸杞子、黃精制成的顆粒劑，具有益氣養(yǎng)陰功效?；辫近S的主要有效成分槐耳富含PS-T（槐耳菌質(zhì)多糖），已證實(shí)PS-T可明顯增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤及抗病毒等功能[8]?；倍€能誘生免疫調(diào)節(jié)劑—TH1類(lèi)細(xì)胞因子[9-10]。目前SLE無(wú)特異性的治療方法?；辫近S顆粒在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的研究尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道，其機(jī)制也不清楚。本文通過(guò)MRL/Lpr狼瘡小鼠模型，研究槐杞黃顆粒是否是通過(guò)其對(duì)Th17的調(diào)節(jié)從而起到改善狼瘡小鼠腎損傷的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)MRL/lpr自發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡狼瘡樣模型小鼠24只，正常C57BL/6小鼠8只，雌性8～10周齡，購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，由國(guó)家遺傳工程小鼠資源庫(kù)暨南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK（粵）2008—0002。環(huán)境溫度穩(wěn)定于20～26℃，濕度40%～70%，采用10h：14h晝夜自動(dòng)循環(huán)交替照明。

1.2 藥物及試劑槐杞黃顆粒購(gòu)自蓋天力藥業(yè)有限公司，地塞米松購(gòu)自Sigma，TGF-β、IL-17試劑盒購(gòu)自慧嘉生物科技有限公司，F(xiàn)ITC標(biāo)記山羊抗小鼠lgG（H+L）購(gòu)自碧云天公司（批號(hào)A0568），IgG單抗購(gòu)自Abcam（批號(hào)Ab6785），C3單抗購(gòu)自Santa cruz（批號(hào)Sc-28294），Anti-Mouse CD3 APC購(gòu)自Biole-gend（批號(hào)100235），Anti-Mouse CD8 PE購(gòu)自Bio-legend（批號(hào)100707），Anti-Mouse/Rat IL-17A FITC購(gòu)自Ebioscience（批號(hào)11-7177-80），胎牛血清購(gòu)自GIBCO（批號(hào)16000-044），RMPI-1640購(gòu)自Hyclone（批號(hào)SH30809.01B），PMA購(gòu)自Sigma（P1585），鈣離子霉素購(gòu)自Solarbio（18800-1mg），Monensin（蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑）購(gòu)自Beyotime（CAS22373-78-0）。

1.3 儀器Thermo公司Multiskan MK3型全自動(dòng)酶標(biāo)儀，Leica公司DM6000B型熒光顯微鏡，BD公司Accuri C6型流式細(xì)胞儀（flow cytometry，F(xiàn)CM），IMS圖象分析系統(tǒng)，ABI 7300 Real-time PCR儀器。

1.4 方法

1.4.1 分組及給藥24只MRL/Lpr狼瘡小鼠，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為槐杞黃組、地塞米松組和模型組，各8只。正常C57BL/6小鼠8只為空白對(duì)照組。MRL/Lpr狼瘡小鼠12周齡左右開(kāi)始發(fā)病，槐杞黃組予槐杞黃顆粒4g/kg灌胃，每天1次；地塞米松組予地塞米松2.5mg/kg灌胃，每天1次；模型組給予生理鹽水灌胃，每天1次。各組均連續(xù)灌胃15天。

1.4.2 24h尿蛋白檢測(cè)考馬斯亮藍(lán)（CBB法）檢測(cè)24h尿蛋白，G250具有紅色和青色兩種色調(diào)，在游離狀態(tài)下，呈紅色型，一旦與蛋白質(zhì)結(jié)合即變?yōu)榍嗌氐淖畲笪詹ㄩL(zhǎng)從465nm轉(zhuǎn)移到595nm。測(cè)定595nm處光密度值，即可進(jìn)行定量。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

表1 RT-PCR引物

1.4.3 用酶聯(lián)免疫吸附法（Elisa）測(cè)定血清TGF-β、IL-17含量各組小鼠灌胃結(jié)束后，摘取眼球法取各組小鼠外周血，室溫血液自然凝固10～20min，離心20min左右（2000～3000rpm/min），仔細(xì)收集上清，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.4.4 腎單核細(xì)胞懸液制備采用頸椎脫臼法處死小鼠，75%酒精中浸泡10～15min；無(wú)菌分離腎臟，放入PBS溶液中清洗2遍；然后加入適量培養(yǎng)基；將剪碎后的組織經(jīng)200目濾網(wǎng)過(guò)濾，得到腎細(xì)胞懸液；加入與細(xì)胞懸液等量體積的淋巴細(xì)胞分離液，之后將細(xì)胞懸液輕輕加到離心管的淋巴細(xì)胞分離液上層；離心完畢后吸取中間白膜層即為單個(gè)核細(xì)胞；培養(yǎng)基進(jìn)行洗滌1次后，用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞；再次用培養(yǎng)基進(jìn)行洗滌1次，重懸后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)；調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/mL，接種于24孔板中，加入PMA300ng/mL，200μL和離子霉素1μg/mL，加入RMPI-1640至1000μL充分混勻后，置于37℃，5% CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)1h，取出后加入濃度為2μmol/L的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑莫能菌素200μL，之后放入37℃，5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h；buffer洗滌之后離心棄上清，沉淀用buffer重懸。

1.4.5 Th17細(xì)胞檢測(cè)單核細(xì)胞計(jì)數(shù)后調(diào)整細(xì)胞濃度為106/mL。設(shè)置14個(gè)檢測(cè)管：陰性對(duì)照管；同型對(duì)照管；CD3單標(biāo)管；CD8單標(biāo)管；IL-17單標(biāo)管；CD3和CD8雙標(biāo)管；CD3+CD8+IL-17三標(biāo)管；4℃避光孵育1～2h。IL-17單標(biāo)管和CD3+CD8+IL-17三標(biāo)管進(jìn)行3000rpm,10min離心，棄上清，沉淀用PBS溶液洗滌2次，洗滌后的細(xì)胞沉淀用0.5mL FIX buffer重懸，放置4℃固定30min；其他檢測(cè)管可進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)；固定結(jié)束后，IL-17單標(biāo)管和CD3+CD8+IL-17三標(biāo)管每管分別用0.5mL Permeabilization and Wash buffer洗滌兩次；洗滌結(jié)束后，IL-17單標(biāo)管和CD3+ CD8+IL-17三標(biāo)管每管分別加入0.5mL Permeabilization and Wash buffer，放置4℃破膜30min；破膜后，IL-17單標(biāo)管和CD3+CD8+IL-17三標(biāo)管每管分別加入IL-17抗體5μL；4℃避光孵育1h。流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)。

1.4.6 RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞總RNA提取后消除總RNA中的DNA，然后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。反應(yīng)程序：37℃，60min；85℃，5min；4℃，5min；置于-20℃保存。Realtime PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系：12.5μL SYBRGreen Mix，0.5μL上游引物F，0.5μL下游引物R，2μL cDNA模板，總體積25μL；反應(yīng)程序：95℃，10min；（95℃，15s；60℃，45s）×40；95℃，15s；60℃，1min；95℃，15s；60℃，15s；數(shù)據(jù)結(jié)果采用ABI Prism 7300 SDS Software儀器軟件分析，結(jié)果數(shù)據(jù)采用2-△△CT法進(jìn)行分析。引物序列見(jiàn)表1。

1.4.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（） 表示，兩組均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間兩兩比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA）LSD法（最小顯著性法），P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并采用GraphPad Prism 6軟件對(duì)結(jié)果繪制圖。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠治療前后24h尿蛋白定量比較空白對(duì)照組、模型組治療前后尿蛋白含量無(wú)顯著變化（P＞0.05）；地塞米松組、槐杞黃組小鼠治療后尿蛋白含量明顯下降（P＜0.01，P＜0.05）；地塞米松組、槐杞黃組小鼠治療后尿蛋白含量明顯低于模型組（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠治療前后24h尿蛋白含量比較（mg/L，）

表2 各組小鼠治療前后24h尿蛋白含量比較（mg/L，）

注：與治療前比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05

組別空白組模型組地塞米松組槐杞黃組鼠數(shù)8 8 8 8治療前184.66±18.40 407.45±79.50 459.63±31.62 451.60±66.44治療后170.61±25.07 474.69±48.76 245.87±47.25▲▲△333.18±22.19▲△

2.2 各組小鼠血清TGF-β、IL-17含量比較與空白組比較，模型組、地塞米松組、槐杞黃組小鼠血清TGF-β、IL-17含量顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）；與模型組比較，地塞米松組、槐杞黃組小鼠血清TGF-β、IL-17含量顯著降低（P＜0.01），見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠血清TGF-β、IL-17含量比較（）

表3 各組小鼠血清TGF-β、IL-17含量比較（）

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01

組別空白組模型組地塞米松組槐杞黃組鼠數(shù)8 8 8 8 TGF-β（ng/L）166.12±36.44 593.84±35.02** 262.69±23.53**△△352.05±26.77**△△IL-17（pg/mL）172.03±45.21 602.13±58.30** 265.25±44.29*△△317.33±46.83**△△

2.3 各組小鼠腎臟Th17細(xì)胞比例及細(xì)胞數(shù)比較與空白組比較，模型組小鼠腎臟Th17細(xì)胞比例和細(xì)胞數(shù)顯著上升（P＜0.01）；經(jīng)地塞米松和槐杞黃顆粒治療后，狼瘡小鼠腎臟Th17細(xì)胞比例和細(xì)胞數(shù)顯著下降（P＜0.01）。見(jiàn)圖1～2。

2.4 各組小鼠腎臟RORC mRNA表達(dá)與空白組比較，模型組狼瘡小鼠腎臟單核細(xì)胞維甲酸相關(guān)孤兒受體（retinoic acid related orphan receptor，RORC）mRNA表達(dá)量顯著上升（P＜0.01）；經(jīng)地塞米松和槐杞黃顆粒治療后，狼瘡小鼠腎臟單核細(xì)胞RORC mRNA表達(dá)顯著下調(diào)（P＜0.01），見(jiàn)圖3。

3 討論

SLE確切的病因及發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚。研究[11]表明，CD4+T細(xì)胞在SLE自身免疫反應(yīng)以及器官損害方面發(fā)揮重要作用。調(diào)節(jié)性T（regulatory cells，Treg）細(xì)胞和Th17細(xì)胞作為特殊的T細(xì)胞亞群，其失衡在SLE的發(fā)病機(jī)制中起到重要的作用。實(shí)驗(yàn)[12]證明，Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞失衡與自身免疫性疾病特別是SLE的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。Treg細(xì)胞在體內(nèi)外都具有免疫抑制功能，能夠控制免疫應(yīng)答的強(qiáng)度，減輕對(duì)機(jī)體組織損傷。Treg細(xì)胞通過(guò)抑制效應(yīng)T細(xì)胞的活化增殖達(dá)到機(jī)體的免疫耐受和預(yù)防自身免疫性疾病的作。Th17細(xì)胞被認(rèn)為是一群重要的介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的細(xì)胞，是一種特定的CD4+T細(xì)胞亞群，主要是分泌促炎因子IL-17[12]。同時(shí)也可分泌其他細(xì)胞因子如IL-17F、IL-21、IL-22、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）、腫瘤壞死因子（TNF-α）等。IL-17主要是通過(guò)促進(jìn)中性粒細(xì)胞聚集，誘導(dǎo)細(xì)胞釋放前炎癥因子，在宿主抗細(xì)菌感染免疫中發(fā)揮重要作用。而IL-17的表達(dá)異常與慢性炎性疾病、自身免疫性疾病有著密切的關(guān)聯(lián)[13]。

圖1 各組小鼠腎臟Th17細(xì)胞流式檢測(cè)結(jié)果（CD4+IL-17+標(biāo)記Th17細(xì)胞）

圖2 各組腎臟中Th17細(xì)胞比例及細(xì)胞數(shù)

圖3 各組小鼠腎臟單核細(xì)胞RORC mRNA轉(zhuǎn)錄水平

近年研究表明，Th17細(xì)胞在SLE的致病過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在狼瘡小鼠模型中已證實(shí)，Th17細(xì)胞與狼瘡的發(fā)生密切相關(guān)。Stanus等[14]在BXD2狼瘡小鼠模型中研究發(fā)現(xiàn)，脾Th17細(xì)胞數(shù)目均異常升高，分離的初始CD4+T細(xì)胞在體外培養(yǎng)中更易于分化為T(mén)h17細(xì)胞。2000年Wong等[15]報(bào)道，華人SLE患者的外周血Th17細(xì)胞明顯升高，并和SLE疾病活動(dòng)性指數(shù)（SLEDAI）之間呈正相關(guān)。Ambrosi等[16]報(bào)道，在狼瘡鼠模型和SLE患者中的研究表明Th17細(xì)胞通過(guò)分泌前炎性因子IL-l7使其在推動(dòng)疾病的進(jìn)程中發(fā)揮著重要作用。本研究通過(guò)對(duì)MRL/lpr自發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型研究發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠24h尿蛋白定量下降，提示HQH能減少狼瘡小鼠蛋白尿的排除；相比空白對(duì)照組，模型組小鼠血清TGF-β、IL-17含量都顯著上升（P＜0.001）；經(jīng)地塞米松及槐杞黃顆粒治療后，小鼠血清TGF-β、IL-17含量不同程度下調(diào)（P＜0.01）。說(shuō)明槐杞黃顆粒能抑制MRL/lpr自發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠TGF-β表達(dá)，從而使得初始CD4+T細(xì)胞不向Th17細(xì)胞分化，轉(zhuǎn)而向調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化成為可能。同時(shí)地塞米松及槐杞黃顆粒治療后，小鼠血清IL-17下降，也證實(shí)CD4+T細(xì)胞向Th17分化減少。各組腎臟Th17細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示，相比正常組小鼠，未治療狼瘡小鼠腎臟中Th17細(xì)胞比例和細(xì)胞數(shù)顯著上升（P＜0.01）；經(jīng)地塞米松和槐杞黃顆粒治療后，狼瘡小鼠腎臟Th17細(xì)胞比例和細(xì)胞數(shù)顯著下降（P＜0.01）。進(jìn)一步證實(shí)，槐杞黃顆粒通過(guò)抑制TGF-β的表達(dá)，從而減少CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化，使得Th17細(xì)胞比例減少，降低SLE疾病活動(dòng)性指數(shù)（SLEDAI），減緩SLE的發(fā)生。本研究也與武青等[17]的研究結(jié)果一致[18]。

維甲酸相關(guān)孤兒受體是Th17細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)控著Th17細(xì)胞的分化和發(fā)育[18-19]，控制Th17細(xì)胞效應(yīng)性細(xì)胞因子IL-17的表達(dá)。Th17細(xì)胞分泌的最主要細(xì)胞因子是IL-17A，在初始T細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)入編碼RORC的逆轉(zhuǎn)錄病毒可誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分泌IL-17。研究表明，當(dāng)小鼠敲除RORC基因后，IL-17表達(dá)下降[19-20]，Th17細(xì)胞數(shù)量也相應(yīng)減少[19]。另外，Th17與Treg細(xì)胞的分化成熟分別受其上游轉(zhuǎn)錄因子RORC及Foxp3基因表達(dá)水平調(diào)控[21]。初始T細(xì)胞在IL-6、TGF-β以及轉(zhuǎn)錄因子RORC的參與下能夠被誘導(dǎo)分化成Th17細(xì)胞[22]。本研究結(jié)果表明，狼瘡小鼠腎臟單核細(xì)胞RORC mRNA表達(dá)量較空白對(duì)照組小鼠顯著上升（P＜0.01）；經(jīng)地塞米松和槐杞黃顆粒治療后，狼瘡小鼠腎臟單核細(xì)胞中RORC mRNA的表達(dá)顯著下調(diào)（P＜0.01）。說(shuō)明槐杞黃顆粒可以通過(guò)抑制RORC表達(dá)，從而降低其對(duì)CD4+T向Th17的分化趨勢(shì)，使得Th17細(xì)胞減少，從而起到對(duì)SLE的治療作用。

綜上所述，槐杞黃顆粒可以抑制TGF-β和RORC表達(dá)，同時(shí)抑制TGF-β和IL-6聯(lián)合誘導(dǎo)的Th17細(xì)胞的分化趨勢(shì)，降低Th17細(xì)胞比例，減少I(mǎi)L-17表達(dá)，減緩SLE的發(fā)生，減輕MRL/lpr自發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠腎臟損害，對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼起到一定的治療和緩解作用。

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（收稿：2017-05-06 修回：2017-05-16）

Effect of Huaiqihuang Granule on Th17 Cells of MRL/Lpr Mice with Lupus Nephritis and Its Underlying Mechanisms

WANG Wei,YU jianning,TAO xiaojuan.Department of Rheumatology,Immune&Nephrology,

Hangzhou Red Cross Hospital,Hangzhou(310003),China

ObjectiveTo investigate the effect of Huaiqihuang（HQH）on Th17 cells of MRL/Lpr mice with lupus nephritis.MethodsEight normal 8-10 weeks C57BL/6 mice were fed as blank control group.MRL/Lpr lupus erythematosus mice were randomly arranged to three groups∶model group,HQH treated group,dexamethasone（DXM）treated group.After the appearance of clinical symptoms at 12 weeks age,Mrl/lpr mice were treated with HQH or dexamethasone.The levels of 24h urine protein quantitation,TGF-β,IL-17,and RORC mRNA and the proportion of TH17 in CD4+T cells of each group were detected before and after treatment.ResultsAfter treatment compared with model group,DXM group and HQH group had decreased 24h urinary protein content（245.87± 47.25mg/L and 333.18±22.19mg/L vs 474.69±48.76mg/L,P＜0.05）;compared with blank group,DXM and HQH groups had increased TGF-β and IL-17（TGF-β∶262.69±23.53ng/L and 352.05±26.77ng/L vs 166.12±36.44ng/L,P＜0.01;IL-17∶265.25±44.29pg/mL and 317.33±46.83pg/mL vs 172.03±45.21pg/mL,P＜0.05）;compared with model group,DXM group and HQH group had decreased TGF-β and IL-17 contents TGF-β∶（262.69±23.53）ng/L and 352.05±26.77ng/L vs 593.84±35.02ng/L,P＜0.01;IL-17∶265.25±44.29pg/mL and 317.33±46.83pg/mL vs 602.13± 58.30pg/mL,P＜0.01）;compared with blank group,the proportion of Th17 cells and the cell number and renal mRNA expression of RORC in model group significantly increased[the proportion of Th17∶（8.62±0.77）%vs（0.05± 0.02）%,P＜0.01;Th17 cell number∶（8.62±0.77）×104/mL vs（0.05±0.02）×104/mL,P＜0.01;RORC mRNA∶（11.08± 0.89）vs（1.00±0.05）,P＜0.01];compared with model group,the proportion of Th17 cells and the cell number and the renal mRNA expression of RORC in DXM group and HQH group significantly reduced[the proportion of Th17∶（0.15±0.04）%and（4.06±0.43）%vs（8.62±0.77）%,P＜0.01;Th17 cell number∶（0.15±0.04）×104/mL and（4.06± 0.43）×104/mL vs（8.62±0.77）×104/mL,P＜0.01;RORC mRNA∶（3.67±0.39）and（5.53±0.49）vs（11.08±0.89）,P＜0.01].ConclusionHQH can decrease the excretion of proteinuria and regulate the differentiation of Th17 cells, which may be related to the down regulation of RORC mRNA expression.

MRL/lpr lupus mice;systemic lupus erythematosus;huaiqihuang;dexamethasone;renal injury;th17 cells

book=739,ebook=8

杭州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.20140733Q25）

杭州市紅十字會(huì)醫(yī)院風(fēng)濕免疫腎內(nèi)科（杭州310003）

陶筱娟，Tel：13336098114；E-mail：93731496@qq.com