慢性心衰患者血清致傷血管內(nèi)皮細(xì)胞及黃芪注射液的干預(yù)作用

鐘偉+區(qū)少蘭+韓蕊+劉裔軍

【摘要】 目的 探討慢性心力衰竭（CHF）患者血清致傷血管內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）損傷的病理狀態(tài)及黃芪注射液的保護(hù)干預(yù)機(jī)制。方法 32例CHF患者作為CHF組， 同期在本院體檢健康者40例作為正常對照組， 取對數(shù)生長期人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞， 培養(yǎng)接種后分為A、B、C、D、E組五組， 繼續(xù)培養(yǎng)24 h

后A～D組加入含15%CHF患者血清的培養(yǎng)基進(jìn)行損傷造模， E組加入含15%健康人血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)， 分別檢測各細(xì)胞、因子水平。結(jié)果 A～D組經(jīng)凝膠電泳處理后可得到典型頭尾分布彗星圖像， 尾長、彗星長、尾距與E組比較， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義 （t=6.650、8.332、15.765， P<0.05） ， 表明DNA有損傷。E組處理后所得到的彗星圖像無典型頭尾分布特點(diǎn)， 表明DNA無損傷。A～D組光密度（OD）值低于E組， 循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞（CEC）、血管內(nèi)假血友病因子（vWF）及可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白（sTM）值均高于E組， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義 （t=33.828、8.040、8.978、6.640， P<0.05）。B、C組OD值高于A組， CEC、vWF及sTM值均低于A組， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P<0.05）。結(jié)論 CHF患者血清可致傷血管內(nèi)皮細(xì)胞， 造成DNA損傷， 黃芪注射液對致傷血管內(nèi)皮細(xì)胞有保護(hù)和改善作用。

【關(guān)鍵詞】 慢性心力衰竭；血管內(nèi)皮細(xì)胞；黃芪注射液；DNA損傷

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.24.117

本次研究選取2013年12月～2016年12月在黃埔中醫(yī)院心血管內(nèi)科病房住院的32例CHF患者， 利用其血清及血管內(nèi)皮細(xì)胞株建立血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的體外模型， 現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2013年12月～2016年12月在黃埔中醫(yī)院心血管內(nèi)科病房住院的32例CHF患者， 將其歸為CHF組， 其中男18例， 女14例， 平均年齡（69.08±3.22）歲， 平均病程（6.23±2.10）個月。選取同期在本院體檢健康者40例作為正常對照組。

1. 2 方法

1. 2. 1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 ①收集兩組血清。②配制條件培養(yǎng)基。③制備黃芪注射液。④內(nèi)皮細(xì)胞傳代培養(yǎng)。

1. 2. 2 實(shí)驗(yàn)操作 取對數(shù)生長期人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞， 培養(yǎng)接種后分為A、B、C、D、E組五組， 繼續(xù)培養(yǎng)24 h后A～D組加入含15%CHF患者血清的培養(yǎng)基進(jìn)行損傷造模， E組加入含15%健康人血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)。以上條件培養(yǎng)基作用24 h后， A～C組分別加入10、20、40 ?g/ml的黃芪注射液， D、E組各自加入等量的DMEM培養(yǎng)基， 培養(yǎng)24 h后進(jìn)行指標(biāo)的檢測。將條件培養(yǎng)基干預(yù)后的A～E組細(xì)胞用PBS液洗滌3次， 用培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液進(jìn)行離心處理5 min， 取上清液， 以瓊脂糖PBS凝膠固化處理后浸入細(xì)胞裂解液， 高pH電泳緩沖液浸泡30 min， <15℃下電泳30 min， 熒光顯微鏡下觀察DNA損傷情況。以上過程需注意動作輕、細(xì)以免造成人為細(xì)胞DNA損傷， 此外細(xì)胞處理及電泳過程需在暗室內(nèi)進(jìn)行避免造成實(shí)驗(yàn)以外損傷。

1. 3 觀察指標(biāo) 觀察各組血管內(nèi)皮細(xì)胞DNA損傷情況（尾長、彗星長、尾距）， 并在黃芪注射液干預(yù)前后分別進(jìn)行以下檢測：①M(fèi)TT法檢測細(xì)胞活性， 檢測結(jié)果用OD值表示；②等密度梯度離心法檢測CEC數(shù)；③lurell火箭電泳法測定血管內(nèi)vWF濃度；④酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA） 法測定sTM濃度。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 A～D組和E組血管內(nèi)皮細(xì)胞DNA損傷情況 A～D組經(jīng)凝膠電泳處理后可得到典型頭尾分布彗星圖像， 尾長、彗星長、尾距與E組比較， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義 （t=6.650、8.332、15.765， P<0.05） ， 表明DNA有損傷。E組處理后所得到的彗星圖像無典型頭尾分布特點(diǎn)， 表明DNA無損傷。見表1。

2. 2 A～D組和E組在黃芪注射液干預(yù)前相關(guān)指標(biāo)檢測結(jié)果比較 A～D組 OD值低于E組， CEC、vWF及sTM值均高于E組， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義 （t=33.828、8.040、8.978、6.640， P<0.05）。見表2。

2. 3 A～C組在黃芪注射液干預(yù)后相關(guān)指標(biāo)檢測結(jié)果比較 B、C組OD值高于A組， CEC、vWF及sTM值均低于A組， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P<0.05）。見表3。

3 討論

血管內(nèi)皮細(xì)胞損害以內(nèi)皮依賴性舒縮反應(yīng)平衡破壞為主要特征， 機(jī)體血流動力學(xué)受此影響逐漸惡化[1， 2]， 最近研究公認(rèn)， 評價血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度的代表性指標(biāo)有CEC、vWF和sTM?，F(xiàn)有藥物在治療CHF方面均存在較大的局限性， 尋找新的高效藥物勢在必行， 西藥研發(fā)周期長毒副作用大， 因此研究者將目光轉(zhuǎn)向中藥， 雖然人們已經(jīng)意識到黃芪的驚人療效， 但是現(xiàn)有研究多集中在黃芪注射液對分泌功能的影響方面， 有關(guān)細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)變化研究相對較少[3-7]， 因此本次研究通過制作體外血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型來深入研究黃芪注射液的干預(yù)作用。表明CHF患者血清可致傷血管內(nèi)皮細(xì)胞， 造成DNA損傷， 而且黃芪注射液對致傷血管內(nèi)皮細(xì)胞有保護(hù)和改善作用， 該項(xiàng)研究必將帶來血管內(nèi)皮細(xì)胞藥物研制的突破和創(chuàng)新發(fā)展。

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[收稿日期：2017-04-18]endprint