T—SPOT.TB在艾滋病合并肺結(jié)核診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值

王宇++潘燕妮++梁道斌++江淵++黃芩

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2017.16.032

[摘要] 目的 對(duì)結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-SPOT.TB）在艾滋病合并肺結(jié)核感染診斷中的價(jià)值分析。 方法 整群選擇2014年1月—2016年7月間，廣西玉林市紅十字會(huì)醫(yī)院收治并診斷為艾滋病疑似合并肺結(jié)核患者206例作為研究對(duì)象，最終確診結(jié)核患者76例和非結(jié)核患者130例。對(duì)兩組展開(kāi)T-SPOT.TB檢測(cè)，同時(shí)行結(jié)核抗體（Tb-Ab）檢查。結(jié)果 結(jié)核感染組患者T-SPOT.TB陽(yáng)性率為84.21%，明顯高于非結(jié)核感染組16.15%（P<0.05）；艾滋病合并肺結(jié)核患者T-SPOT.TB檢測(cè)靈敏度84.21%高于結(jié)核抗體36.84%，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；特異度兩種方法分別為83.84%、85.38%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)核感染組CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)≥200 cell/μL及CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)<200 cell/μL患者T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性率分別為93.75%、76.56%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果，A孔/B孔特異性斑點(diǎn)>100的結(jié)核診斷率高于A孔/B孔特異性斑點(diǎn)<100的患者（P<0.05）。 結(jié)論 T-SPOT.TB技術(shù)對(duì)艾滋病合并結(jié)核感染進(jìn)行診斷的準(zhǔn)確性、敏感性均較高。

[關(guān)鍵詞] 結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)；艾滋病；結(jié)核感染

[中圖分類號(hào)] R446.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2017）06（a）-0032-03

Clinical Application Value of T-SPOT.TB in the Diagnosis of AIDS and Tuberculosis

WANG Yu， PAN Yan-ni， LIANG Dao-bin， JIANG Yuan， HUANG qin

Department of Infection， Yulin Red Cross Hospital， Yulin， Guangxi， 537000 China

[Abstract] Objective To analyze the value of T-SPOT.TB in the diagnosis of AIDS and tuberculosis. Methods 206 cases of patients suspected with AIDS and tuberculosis in our hospital from January 2014 to July 2016 were selected and 76 cases were diagnosed with tuberculosis and 130 cases were not the tuberculosis patients， and both groups were given T-SPOT.TB test and Tb-Ab examination. Results The T-SPOT.TB positive rate in the tuberculosis group was obviously higher than that of non-tuberculosis group， （84.21% vs 36.84%）， and the difference was statistically significant（P<0.05）， and the difference in the specificity between the two groups was not statistically significant， （83.84% vs 85.38%），（P>0.05）， and the T-SPOT.TB positive rate in patients whose CD4+T lymphocyte count ≥200 cell/μL and CD4+T lymphocyte count <200 cell/μL was respectively 93.75% and 76.56%， and the difference was not statistically significant， and the diagnosis rate of patients whose A hole/B hole specific spot>100 was higher than that of patients whose A hole/B hole specific spot <100（P<0.05）. Conclusion The accuracy and sensitivity of T-SPOT.TB in the diagnosis of AIDS and tuberculosis are high.

[Key words] T.SPOT-TB test； AIDS； Tuberculosis infection

近幾年，隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展和日漸成熟，結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)在結(jié)核感染診斷中逐漸被廣泛應(yīng)用[1]。這項(xiàng)新技術(shù)的問(wèn)世與應(yīng)用，使得艾滋病合并結(jié)核感染的診斷效果得到明顯改善。該研究對(duì)2014年1月—2016年7月間該院收治的艾滋病合并肺結(jié)核感染患者76例和非合并結(jié)核感染患者130例展開(kāi)了T-SPOT.TB檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究資料來(lái)源于整群選取該院在2014年1月—2016年7月這段時(shí)間內(nèi)收治的，獲得明確診斷的艾滋病患者，并疑似肺結(jié)核感染，共計(jì)206例作為研究對(duì)象。經(jīng)檢查確診肺結(jié)核患者76例，非結(jié)核患者130例，將其分成兩組：結(jié)核感染組和非結(jié)核感染組。結(jié)核感染組中，患者年齡區(qū)間為25～78歲，中位年齡為48歲，平均年齡為（45.9±12.3）歲，包括有男性57例，女性19例；非結(jié)核感染組中，患者年齡區(qū)間為20～75歲，中位年齡為45歲，平均年齡為（42.7±14.6）歲，包括有男性92例，女性38例。兩組患者的年齡、性別等指標(biāo)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），存在可比性，所有肺結(jié)核患者均符合臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]，自愿接受臨床檢查，并簽署了知情同意書(shū)。

1.2 方法

T-SPOT.TB檢測(cè)試劑盒由金域公司提供，英國(guó)牛津原裝進(jìn)口試劑，獲得資質(zhì)的專業(yè)技術(shù)人員檢測(cè)。方法：使用肝素抗凝管收集住院患者清晨空腹外周血6 mL，按T-SPOT操作方法實(shí)驗(yàn)室分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCS），調(diào)整細(xì)胞懸液濃度至2.5≤105 cell/μL加入至4個(gè)微孔培養(yǎng)板（分別為陰性對(duì)照孔、A孔：ESAT-6、B孔：CFP-10和陽(yáng)性對(duì)照孔），微孔里預(yù)包被γ干擾素抗體，微孔中分別加入陰性對(duì)照的淋巴細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基、結(jié)核特異性抗原ESAT-6、CFP-10、作為陽(yáng)性對(duì)照的植物血凝素；置入37°含有5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16～24 h，洗板，加入標(biāo)記抗體工作液，2～8°孵育1 h后洗板，每個(gè)反應(yīng)孔加入底物顯色溶液室溫孵育7 min，通風(fēng)處干燥培養(yǎng)板，記數(shù)每個(gè)反應(yīng)孔內(nèi)深藍(lán)色清晰斑點(diǎn)。結(jié)果判定：根據(jù)抗原A或抗原B孔的反應(yīng)判斷結(jié)果，陰性對(duì)照孔數(shù)為0～5，陽(yáng)性樣本應(yīng)為：抗原A或抗原B斑點(diǎn)數(shù)減去陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6；當(dāng)陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6，陽(yáng)性樣本應(yīng)為抗原A或抗原B斑點(diǎn)數(shù)≥2倍陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo)

記錄兩組患者T-SPOT.TB、結(jié)核抗體檢測(cè)結(jié)果；分析不同方法檢測(cè)的靈敏度及特異度；結(jié)核感染組不同CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)條件下T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性率；T-SPOT.TB陽(yáng)性結(jié)果不同數(shù)值結(jié)核的診斷率。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)處理方法統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均經(jīng)SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，并采用 t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)， P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者T-SPOT.TB檢測(cè)結(jié)果及與結(jié)核抗體檢測(cè)結(jié)果比較

結(jié)核感染組患者T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性者64例，陽(yáng)性率為84.21%，非結(jié)核感染組患者T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性者21例，陽(yáng)性率為16.15%；結(jié)核感染組陽(yáng)性率明顯高于非結(jié)核感染組（χ2=91.656，P<0.01）；結(jié)核抗體在兩組間的陽(yáng)性率分別為36.84%、14.62%（χ2=13.455，P<0.01）。T-SPOT.TB檢測(cè)結(jié)核感染的敏感度（84.21%）高于結(jié)核抗體（36.84%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=35.687、P< 0.01），特異性兩者分別為83.84%、85.38%，兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.118、P= 0.731），見(jiàn)表1。

2.2 CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)在艾滋病結(jié)核感染組T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性率

艾滋病結(jié)核感染組患者在CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)≥200 cell/μL條件下T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性率（93.75%）高于CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)<200 cell/μL組（76.56%），但兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.627、P=0.428），見(jiàn)表2。

2.3 T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性不同結(jié)果結(jié)核診斷率

T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性患者中，A孔或B孔檢測(cè)值≤100的結(jié)核診斷率為90.24%，高于6≥A孔或B孔檢測(cè)值<100的結(jié)核診斷率（61.36%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.516、P=0.002）。見(jiàn)表3。

3 討論

近幾年隨著酶聯(lián)免疫技術(shù)的不斷發(fā)展和日漸完善，T-SPOT.TB檢測(cè)問(wèn)世，并在臨床結(jié)核感染診斷中發(fā)揮了重要作用。這項(xiàng)新技術(shù)的原理主要為，人體在感染結(jié)核分支桿菌后，會(huì)形成記憶性T淋巴細(xì)胞，再次受到結(jié)核分支桿菌相關(guān)抗原的刺激后，會(huì)造成記憶性T淋巴細(xì)胞迅速增殖成效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞，同時(shí)會(huì)分泌出INF-γ，對(duì)分泌INF-γ的淋巴細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行測(cè)定，便可以實(shí)現(xiàn)對(duì)機(jī)體是否感染結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行判定[3]。其特點(diǎn)是靈敏度高，幾乎不受個(gè)體免疫功能低下影響；特異性好，不受卡介苗接種與非結(jié)核分枝桿菌影響。

在該研究中，結(jié)核感染組患者T-SPOT.TB陽(yáng)性率為84.21%，明顯高于非結(jié)核感染組16.15%，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[4]；艾滋病合并肺結(jié)核患者T-SPOT.TB檢測(cè)靈敏度84.21%高于結(jié)核抗體36.84%，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與國(guó)外對(duì)HIV陽(yáng)性、陰性結(jié)核感染T-SPOT.TB檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)報(bào)道差別不大[5]，說(shuō)明免疫功能對(duì)T-SPOT.TB檢測(cè)結(jié)果影響有限。但也有研究[6]顯示T-SPOT.TB檢測(cè)結(jié)果和外周血CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量有關(guān)；從表2可以看出，T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性率隨CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)升高而有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能和χ2檢驗(yàn)無(wú)法完全滿足條件有關(guān)；也說(shuō)明在嚴(yán)重免疫缺陷患者中，T-SPOT.TB檢測(cè)假陰性結(jié)果增多，但結(jié)果影響有限。而對(duì)T-SPOT.TB陽(yáng)性結(jié)果分析顯示，A、B孔效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞越多，說(shuō)明機(jī)體受到結(jié)核分枝桿菌抗原的刺激也越強(qiáng)烈，相應(yīng)結(jié)核的確診率也越高（P<0.01）[7]。由此證實(shí)，經(jīng)T-SPOT.TB技術(shù)對(duì)艾滋病合并肺結(jié)核感染進(jìn)行診斷的準(zhǔn)確性、敏感性均較高，對(duì)臨床診斷工作具有重要輔助作用；但需要注意的是T-SPOT.TB檢測(cè)目前尚無(wú)統(tǒng)一的界值用來(lái)鑒別活動(dòng)性肺結(jié)核及潛伏結(jié)核感染；且T-SPOT.TB檢測(cè)存在一定的假陰性結(jié)果，尤其是HIV感染者、腫瘤患者、兒童等免疫功能不全情況下，因此需聯(lián)合其他相關(guān)檢查來(lái)提高結(jié)核的診斷率[8]。

綜上所述，活動(dòng)性結(jié)核病與潛伏結(jié)合感染患者M(jìn)tb特異性抗原ESAT-6、CFP-10刺激后SFCs差異存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，由此可證實(shí)，SFCs與疾病活動(dòng)度、體內(nèi)抗原負(fù)荷等可能存在相關(guān)性。通過(guò)該次研究證實(shí)，T-SPOT.TB技術(shù)對(duì)艾滋病合并結(jié)核感染進(jìn)行診斷的準(zhǔn)確性、敏感性均較高，在今后的臨床工作中，值得對(duì)其給予足夠的重視并廣泛應(yīng)用。

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（收稿日期：2017-03-09）