益髓生血顆粒對(duì)AA大鼠CD4+CD25+Foxp3調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響＊

田晨，趙宗江，張豐豐，張新雪，程明秀，王穎超，趙敬，楊美娟

益髓生血顆粒對(duì)AA大鼠CD4+CD25+Foxp3調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響＊

田晨，趙宗江＊＊，張豐豐，張新雪，程明秀，王穎超，趙敬，楊美娟

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院北京100029）

目的：觀察益髓生血顆粒對(duì)再生障礙性貧血（Aplastic Anemia，AA）大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulatory T Cell，Treg細(xì)胞）的影響及其治療AA的作用機(jī)制。方法：取雄性SD大鼠按體重隨機(jī)分組。其中模型組連續(xù)7周隔天皮下注射苯（1 mL·kg-1）、取材10天前開始腹腔注射環(huán)磷酰胺（25 mL·kg-1），連續(xù)3天，第4周將模型組大鼠按體重隨機(jī)分為模型組、司坦唑醇組、益髓生血顆粒組，灌胃給藥。正常組及模型對(duì)照組給予等體積生理鹽水。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，檢測(cè)外周血WBC、RBC、HGB、PLT；制備血涂片、骨髓涂片；免疫組織化學(xué)法檢測(cè)脾組織Treg細(xì)胞Foxp3蛋白表達(dá)；RT-PCR法檢測(cè)骨髓組織Foxp3 mRNA的表達(dá)。結(jié)果：與正常組比較，模型組WBC、RBC、HGB、PLT均顯著減少（P＜0.01），血涂片示血細(xì)胞通透性差、白細(xì)胞減少、退化細(xì)胞增多，骨髓涂片示脂肪滴明顯增加、造血細(xì)胞均明顯降低、非造血細(xì)胞增多；經(jīng)益髓生血顆粒組治療后WBC、RBC、HGB、PLT均顯著增加（P＜0.01），血涂片及骨髓涂片顯示細(xì)胞通透性好轉(zhuǎn)、形態(tài)趨于正常、脂肪滴明顯減少，造血細(xì)胞均明顯增加，脾組織Foxp3蛋白及骨髓組織Foxp3 mRNA表達(dá)明顯升高（P＜0.01）。結(jié)論：益髓生血顆?？缮险{(diào)Foxp3的基因及蛋白表達(dá)，調(diào)控AA免疫功能，進(jìn)而改善AA免疫環(huán)境，促進(jìn)骨髓造血功能的恢復(fù)，發(fā)揮治療AA的重要作用。

再生障礙性貧血大鼠益髓生血顆粒CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞Foxp3

再生障礙性貧血（Aplastic Anemia，AA）患者多表現(xiàn)為貧血、出血、感染等。細(xì)胞免疫異常，特別是T細(xì)胞異常是AA的主要發(fā)病機(jī)制之一。近年研究證實(shí)CD4+CD25+Treg細(xì)胞在AA時(shí)中多存在數(shù)量及功能的異常[1,2]。叉狀頭/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子P3（Forkhead/ winged Helix Transcription Factor P3，F(xiàn)oxP3）特異性表達(dá)于CD4+CD25+Treg細(xì)胞，是其特征性標(biāo)志，可影響CD4+CD25+Treg細(xì)胞功能的發(fā)揮。本團(tuán)隊(duì)前期研究發(fā)現(xiàn)AA大鼠存在免疫功能異常，如CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量及比例異常，Th1/Th2細(xì)胞失衡?；凇澳I藏精”立方的益髓生血顆?？筛纳艫A大鼠T淋巴細(xì)胞群的紊亂，調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞平衡[3，4]。為進(jìn)一步研究其調(diào)節(jié)AA免疫功能的分子生物學(xué)機(jī)制，本研究采用苯與CTX聯(lián)合制備AA大鼠模型，觀察益髓生血顆粒對(duì)AA大鼠Foxp3蛋白及基因表達(dá)的影響，探尋CD4+CD25+Treg細(xì)胞在AA發(fā)病機(jī)制中的作用，為益髓生血顆粒治療AA的免疫機(jī)制及臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)、雄性SD大鼠55只，體重200±20 g（購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物許可證：SCXR京2009-0007）。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

益髓生血顆粒（中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，批號(hào)：20110506），由熟地、山萸肉、補(bǔ)骨脂、阿膠、炙黃芪、何首烏等共11味中藥組成；司坦唑醇片（即康力龍，廣西南寧百會(huì)藥業(yè)，批號(hào)：100820）。

1.3 主要試劑

苯（北京化工廠，批號(hào)：20110808），環(huán)磷酰胺（山西普德藥業(yè)，批號(hào)：20101103），F(xiàn)oxp3抗體（英國(guó)Abcam艾美捷科技有限公司，批號(hào)：ab22510），山羊血清封閉液（北京康為世紀(jì)生物科技有限公司，批號(hào)：CW0130），GFVisionTMⅡ抗鼠/兔通用型免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒（DAKO基因科技公司，批號(hào)：GK500705），蘇木素染液（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：ZLI-9610），反轉(zhuǎn)錄試劑盒（美國(guó)Promega公司，A3500，批號(hào)：0000073779），Go Taq?Green Mix（美國(guó)Promega公司，M1722，批號(hào)：0000040423），DEPC（美國(guó)Ameresco公司，批號(hào)：E14-25G），異丙醇（北京化工廠，批號(hào)：20150524），50×TAE（美國(guó)Ameresco公司，批號(hào)：13354C413），Goldview、DNA Marker（北京賽百盛基因技術(shù)有限公司，批號(hào)：20161201、20150801），F(xiàn)oxp3、GAPDH引物合成于生工生物有限公司。

1.4 主要儀器

L340099光學(xué)顯微鏡（日本奧林巴斯公司），552BR電泳儀（美國(guó)Bio-RAD公司），153BR轉(zhuǎn)膜儀（美國(guó)Bio-RAD公司），C1000PCR儀（美國(guó)Bio-RAD公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與處理

SD大鼠55只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后按體重隨機(jī)分為正常組10只，造模組45只。將造模組連續(xù)7周隔天皮下注射苯（1 mL·kg-1）、取材10天前開始腹腔注射環(huán)磷酰胺（25 mg·kg-1），連續(xù)3天，制備AA大鼠模型。將造模組大鼠按體重隨機(jī)分為模型組、司坦唑醇組、益髓生血組。第4周開始灌胃治療，司坦唑醇組、益髓生血組均按照為成人臨床用量的7倍計(jì)算灌胃，益髓生血組按3.5 g·kg-1灌胃給藥，司坦唑醇組按1.4 mg·kg-1灌胃給藥，灌胃劑量為1 mL·100 kg-1）。正常組、模型組給予等量生理鹽水灌胃，用藥治療4周。

2.2 標(biāo)本采集

第8周末取材，腹腔注射10%水合氯醛（0.35 mL· 100 g-1）麻醉，股動(dòng)脈取血1.5 mL于EDTA抗凝管中，搖動(dòng)混勻，取其中一滴制備血涂片，其余用于檢測(cè)血常規(guī)；無(wú)菌摘取大鼠股骨并取少量制備骨髓涂片，剩余骨髓用鋁箔紙包裹（鋁箔紙需提前使用DEPC水處理），迅速在液氮中固定，后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，用于RT-PCR實(shí)驗(yàn)；無(wú)菌摘取大鼠脾組織并制備石蠟切片，用于免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)。

2.3 外周血象檢查

血常規(guī)檢測(cè)AA大鼠外周血WBC、RBC、HGB、PLT等指標(biāo)的變化。

2.4 外周血細(xì)胞及骨髓細(xì)胞形態(tài)的觀察

制作均勻的血涂片及骨髓涂片，經(jīng)瑞氏染色，染色步驟參照試劑說(shuō)明進(jìn)行，于普通光鏡下觀察各組大鼠血細(xì)胞及骨髓細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。

2.5 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)脾組織Foxp3蛋白表達(dá)

將脾組織石蠟切片脫蠟至水，經(jīng)消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性、微波修復(fù)及10%山羊血清封閉后，一抗（Foxp3）濃度1∶100，二抗?jié)舛?∶500，DAB顯色，陰性對(duì)照用0.1 mol·L-1PBS代替一抗，蘇木素復(fù)染、脫水并封片。顯微鏡觀察，陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色顆粒；每組隨機(jī)選取8個(gè)視野，采用Image pro-Plus6.0進(jìn)行圖像分析，測(cè)定陽(yáng)性表達(dá)光密度值（IOD）表示脾組織Foxp3的相對(duì)表達(dá)量。

2.6 RT-PCR方法檢測(cè)骨髓組織Foxp3 mRNA表達(dá)

應(yīng)用TrizoL法提取AA大鼠骨髓組織總RNA并逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，反應(yīng)條件如下：15 min（42℃），5 min（95℃），5 min（4℃）。以1μL cDNA為模板，擴(kuò)增Foxp3、GAPDH，引物序列等詳見表1。PCR擴(kuò)增條件如下：2 min（95℃）、1 min（95℃）、1 min（72℃），38個(gè)循環(huán)，5 min（72℃）。配置1.5%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，恒壓100 V 30 min，紫外凝膠分析儀觀察、照相，用Fluor Chem軟件對(duì)特異性電泳條帶進(jìn)行分析，以Foxp3/GAP?DH的IOD比值作為骨髓組織Foxp3 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 22.0進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）表示，采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01表示差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 Foxp3及GAPDH基因引物序列及其擴(kuò)增產(chǎn)物大小

3 結(jié)果

3.1 益髓生血顆粒對(duì)AA大鼠一般狀態(tài)的影響

正常組大鼠精神活潑，毛發(fā)有光澤，二便及攝食正常；模型組大鼠精神狀態(tài)不佳，毛發(fā)干枯，皮毛松弛蓬亂，部分大鼠有明顯脫毛及皮損，大便溏稀，攝食減少，體態(tài)較消瘦，大鼠耳廓、唇口、爪甲蒼白色，呈明顯的貧血貌。與模型組比較，益髓生血組大鼠精神狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)，毛發(fā)色澤、二便及攝食等均有所改善，尤其是貧血癥狀改善明顯。

3.2 益髓生血顆粒對(duì)AA大鼠外周血象的影響

與正常組比較，模型組大鼠外周血中RBC、WBC、HGB、PLT均表達(dá)減少（P＜0.01）；與模型組比較，司坦唑醇組、益髓生血組RBC、HGB、PLT均表達(dá)增多，且有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），司坦唑醇組、益髓生血組WBC均顯著性增多，具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見表2）。

3.3 益髓生血顆粒對(duì)AA大鼠血細(xì)胞及骨髓細(xì)胞形態(tài)的影響

由圖1可見，正常組外周血細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量均較正常且細(xì)胞分布均勻；與正常組比較，模型組外周血細(xì)胞數(shù)量減少、大小形態(tài)不均，且多呈散狀分布；與模型組比較，司坦唑醇組、益髓生血顆粒組外周血細(xì)胞形態(tài)趨于正常、退化細(xì)胞減少。

由圖2可見，正常組骨髓組織脂肪滴數(shù)量較少，造血細(xì)胞較多；模型組骨髓組織脂肪滴數(shù)量顯著增加，三系細(xì)胞均明顯降低，存在較多的非造血細(xì)胞，司坦唑醇組、益髓生血顆粒組骨髓組織脂肪滴減少，骨髓有核細(xì)胞數(shù)量增多，非造血細(xì)胞數(shù)量有所減少。

3.4 益髓生血顆粒對(duì)AA大鼠脾組織Foxp3蛋白表達(dá)的影響

由表3、圖3可知，F(xiàn)oxp3為CD4+CD25+Treg細(xì)胞的重要轉(zhuǎn)錄因子，定位于細(xì)胞核。本次脾組織免疫組化結(jié)果顯示：脾組織動(dòng)脈周圍淋巴鞘附近Foxp3蛋白表達(dá)較多，少量表達(dá)于白髓與紅髓交界。與正常組比較，模型組脾組織Foxp3蛋白表達(dá)明顯減少（P＜0.01），與模型組比較，司坦唑醇組、益髓生血顆粒組脾組織Foxp3蛋白表達(dá)明顯增加（P＜0.05或P＜0.01）。

表2 益髓生血顆粒對(duì)AA大鼠外周血象的影響（xˉ±s,n=6）

圖1 再生障礙性貧血大鼠血細(xì)胞涂片

圖2 再生障礙性貧血大鼠骨髓涂片

表3 益髓生血顆粒對(duì)AA大鼠脾組織Foxp3表達(dá)的影響（xˉ±s,n=8）

圖3 益髓生血顆粒對(duì)AA大鼠脾組織Foxp3蛋白表達(dá)的影響

3.5 益髓生血顆粒對(duì)骨髓組織Foxp3mRNA表達(dá)的影響

由表4、圖4可知，與正常組比較，模型組骨髓組織中Foxp3 mRNA表達(dá)明顯減少（P＜0.01），與模型組比較，司坦唑醇組、益髓生血顆粒組Foxp3 mRNA表達(dá)明顯增加（P＜0.05）。

4 討論

AA是以全血細(xì)胞減少為主要特點(diǎn)的血液疾病，多出現(xiàn)貧血、出血、感染等臨床癥狀。中醫(yī)依據(jù)其臨床特點(diǎn)將AA歸為“虛勞”、“血虛”、“髓勞”等疾病范疇。AA以貧血為其主要癥狀，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，血液化生與腎藏精密切相關(guān)，《醫(yī)精經(jīng)義》曰：“腎藏精，精生髓，髓生骨…精足則髓足”，《黃帝內(nèi)經(jīng)·素問(wèn)》曰：“骨髓堅(jiān)固，氣血皆從”，精髓化生血液主要取決于腎。AA的基本病機(jī)在于腎虛，腎不藏精、生髓，髓不化血[7]，血化不足，則出現(xiàn)血虛表現(xiàn)，如面色蒼白、頭暈乏力、心悸氣短、唇甲色淡、眩暈耳鳴等癥狀，故腎是AA發(fā)病的本臟所在。目前，“以腎為本、從腎論治”是治療AA的主流觀點(diǎn)[8]，臨床療效也在實(shí)踐中不斷提高。在“腎藏精，生髓化血”理論指導(dǎo)下，以補(bǔ)腎填精、益髓生血為治療大法，輔以健脾疏肝、活血化瘀等，調(diào)整陰陽(yáng)，調(diào)理五臟，化生氣血。王運(yùn)律[9,10]治療AA以“補(bǔ)腎為本、辨明陰陽(yáng)”為原則，健脾補(bǔ)腎，脾腎相協(xié)，精血相生，改善骨髓造血功能。莊海峰等[11]用補(bǔ)腎法治療慢性AA患者36例，分為腎陽(yáng)虛型、腎陰虛型、腎陰陽(yáng)兩虛型三型，經(jīng)補(bǔ)腎治療后，患者臨床癥狀較前明顯好轉(zhuǎn)，說(shuō)明補(bǔ)腎法治療AA療效明顯，并減少西藥不良反應(yīng)。故本團(tuán)隊(duì)依據(jù)AA的基本病機(jī)及在“腎藏精，生髓化血”的中醫(yī)經(jīng)典理論的指導(dǎo)下組方遣藥，組成益髓生血顆粒。益髓生血顆粒以補(bǔ)腎益髓為主、輔以健脾養(yǎng)肝，在治療AA時(shí)具有較好的臨床療效。益髓生血顆粒中以山茱萸、何首烏為君藥，重在滋補(bǔ)腎陰，輔以補(bǔ)骨脂生發(fā)陽(yáng)氣，使陰得陽(yáng)升而泉源不竭，同時(shí)輔以健脾化瘀之味，使血化有源。

表4 益髓生血顆粒對(duì)AA大鼠骨髓Foxp3表達(dá)的影響（xˉ±s,n=3）

圖4 益髓生血顆粒對(duì)AA大鼠骨髓Foxp3 mRNA表達(dá)的影響

現(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)，AA時(shí)多存在T淋巴細(xì)胞的異常激活及分泌過(guò)多現(xiàn)象，致使造血負(fù)調(diào)控因子表達(dá)增加，進(jìn)而誘導(dǎo)造血干細(xì)胞凋亡，最終發(fā)展為骨髓造血功能衰竭[12，13]。其發(fā)病環(huán)節(jié)以細(xì)胞免疫異常為主，其中除免疫激活導(dǎo)致活化的效應(yīng)性細(xì)胞增多如Th1/Th2比例升高，CD8+T細(xì)胞增加、CD4+/CD8+比值降低，甚至倒置[14,15]，還伴有自身免疫耐受被打破的過(guò)程。Sakaguchi等[16]在1995年首次報(bào)道了CD4+CD25+Treg細(xì)胞是一類具有免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞群。研究證實(shí)[17]，CD4+CD25+Treg細(xì)胞具有免疫抑制作用，可抑制CD4+、CD8+T細(xì)胞的增殖與活化，抑制初始T細(xì)胞和記憶性T細(xì)胞增殖。CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)量缺乏或功能缺陷會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫功能失常，CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)量缺陷是AA患者免疫耐受破壞的重要原因之一[18]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示[19]，向AA小鼠模型中注入CD4+CD25+Treg細(xì)胞后小鼠骨髓造血功能較前改善。CD4+CD25+Treg細(xì)胞與Foxp3基因的表達(dá)與機(jī)體的免疫狀態(tài)有著緊密的聯(lián)系。Foxp3是CD4+CD25+Treg細(xì)胞特異性的轉(zhuǎn)錄因子，被公認(rèn)為是其最具有特異性的分子標(biāo)志物[20]，是一正向調(diào)節(jié)蛋白，可調(diào)節(jié)CD4+CD25+Treg細(xì)胞發(fā)育和功能，可影響AA時(shí)免疫耐受[21]。課題組前期研究證實(shí)了AA大鼠外周血存在T細(xì)胞的異?；罨渲蠧D3、CD4細(xì)胞數(shù)量顯著降低，CD8細(xì)胞數(shù)量相對(duì)增多，CD4+/CD8+比值降低，甚至出現(xiàn)倒置。脾組織、骨髓作為主要的免疫器官，在AA的發(fā)病中起著重要的作用。T-bet、GATA-3分別為Th1、Th2細(xì)胞特異性的轉(zhuǎn)錄因子，AA大鼠脾組織、骨髓中T-bet蛋白表達(dá)增加，GATA-3蛋白表達(dá)降低，經(jīng)益髓生血顆粒治療后，IFN-γ、T-bet蛋白表達(dá)顯著降低，GATA-3蛋白表達(dá)顯著增加，證實(shí)益髓生血顆粒可調(diào)節(jié)Th1/Th2，調(diào)節(jié)AA免疫系統(tǒng)、延緩疾病進(jìn)展[4]。本研究角度從具有特異性免疫調(diào)節(jié)作用的Treg細(xì)胞入手，探討益髓生血顆粒調(diào)控AA免疫耐受的作用機(jī)制。

研究結(jié)果表明，AA大鼠Foxp3蛋白及mRNA表達(dá)下降，說(shuō)明調(diào)節(jié)性T細(xì)胞減少，故而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的免疫抑制作用減弱，導(dǎo)致T細(xì)胞異?；罨?，引起再障。經(jīng)益髓生血顆粒治療后，脾組織Foxp3蛋白、骨髓組織Foxp3 mRNA顯著高于模型組，提示補(bǔ)腎益髓生血法可能通過(guò)增加Foxp3表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)CD4+CD25+Treg細(xì)胞，發(fā)揮免疫抑制作用，進(jìn)而促進(jìn)骨髓造血功能的恢復(fù)。本研究闡明了益髓生血顆粒對(duì)AA大鼠免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制，部分闡明了益髓生血顆粒治療AA的作用機(jī)制，為臨床治療AA提供新的思路和方向。

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Effect of Yisui Shengxue Granules on CD4+CD25+Foxp3 Regulatory T Cells ofAplasticAnemia in Rats

Tian Chen,Zhao Zongjiang,Zhang Fengfeng,Zhang Xinxue,Cheng Mingxiu, Wang Yinchao,Zhao Jing,Yang Meijuan
(College of Traditional Chinese Medicine,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029,China)

This paper was aimed to observe the effect of Yisui Shengxue(YSSX)granules on CD4+CD25+regulatory T cells(Treg cells)and its treatment mechanism in aplastic anemia(AA)rats.Male SD rats were selected and randomly divided into different groups according to their weight.In the model group,subcutaneous injection of benzene(1 mL·kg-1) was given every other day for 7 consecutive weeks.Ten days before the rats were sacrificed,intraperitoneal injection of CTX(25 mL·kg-1)was given for 3 consecutive days.On the 4thweek,model rats were divided into the model group, stanozolol group,and the YSSX granules group.Intragastric administration of corresponding drug was given.Same volume of normal saline was given to the normal group and the model group.At the end of the experiment,WBC,RBC, HGB and PLT in peripheral blood were detected.Blood smear and bone marrow smear were prepared.The Foxp3 protein expression of Treg cells in spleen tissues was detected by immunohistochemistry(IHC).RT-PCR was used to detect the Foxp3 mRNA expression in bone marrow tissues.The results showed that compared with the normal group,WBC,RBC, HGB and PLT in the model group were significantly reduced(P＜0.01).The blood smear showed poor permeability of blood cells,reduced WBCs,and increased degenerated cells.The bone marrow smear indicated significantly increased fat drops,significantly reduced hematopoietic cells,and increased nonhematopoietic cells.After the treatment of YSSX granules,WBC,RBC,HGB and PLT were significantly increased(P＜0.01).Both the blood smear and bone marrow smear showed cell permeability improvement,cell form returns to normal,fat drops significantly reduced,significantly increased hematopoietic cells,significantly increased Foxp3 protein expression in spleen tissues and Foxp3 mRNA expression in bone marrow tissues(P＜0.01).It was concluded that YSSX granules can upregulate both gene and protein expression of Foxp3,regulate AA immune function in order to improve the AA immune environment,promote the recovery of bone marrow hematopoietic function,which played an important role in AA treatment.

Aplastic anemia,rat,Yisui Shengxue granules,CD4+CD25+,regulatory T cells,Foxp3

10.11842/wst.2017.05.008

R96

A

（責(zé)任編輯：陳寧，責(zé)任譯審：王晶）

2017-05-06

修回日期：2017-06-05

＊北京中醫(yī)藥大學(xué)自主選題項(xiàng)目（2013360YZH010222）：課題名稱：益髓生血顆粒對(duì)再生障礙性貧血大鼠CD4CD25 Foxp3Treg調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響，負(fù)責(zé)人：田晨；科學(xué)技術(shù)部國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃“973計(jì)劃”項(xiàng)目（2010CB530400）：基于“腎藏精”的臟象理論基礎(chǔ)研究，負(fù)責(zé)人：王擁軍；科學(xué)技術(shù)部國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃“973計(jì)劃”項(xiàng)目（2010CB530406）：從障礙性貧血探討“腎生髓”理論的研究，負(fù)責(zé)人：吳志奎。

＊＊通訊作者：趙宗江，本刊編委，教授，博士生導(dǎo)師，主要研究方向：中醫(yī)藥防治慢性腎病與障礙性貧血的基礎(chǔ)與臨床研究。