LPS誘導(dǎo)THP—1細(xì)胞釋放蛋白表達的調(diào)節(jié)

歐明濤 鄧玉冉 彭興輝

摘要：目的：探討LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞釋放蛋白表達的調(diào)節(jié)。方法：LPS（1 μg/ml）誘導(dǎo)不同時間后，THP-1細(xì)胞上清液中蛋白含量變化及不同濃度LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞釋放蛋白的表達和NF-κB的活性，LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞釋放HMGB1蛋白核轉(zhuǎn)位變化。結(jié)果：LPS 組TNF-α 的含量均顯著低于 LPS 組，處理LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞細(xì)胞上清液NF-κB的活性表達量呈明顯下降趨勢。結(jié)論：LPS可誘導(dǎo) THP-1細(xì)胞TNF-α表達增多及NF-κB活化，導(dǎo)致蛋白表達增多及核轉(zhuǎn)位，能抑制THP-1細(xì)胞TNF-α表達及NF-κB活化，調(diào)節(jié)蛋白的表達及核轉(zhuǎn)位。

關(guān)鍵詞：LPS；THP-1細(xì)胞；NF-κB（P-65）；核轉(zhuǎn)位

前言

HMGB1為高遷移率族蛋白（high mobility group protein，HMGB1）為細(xì)胞核內(nèi)蛋白，主要參與DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄穩(wěn)定核小體結(jié)構(gòu)等作用[1，2]。HMGB1也是一種在膿毒癥晚期引起多器官衰竭的重要炎性介質(zhì)，其自身毒性和結(jié)合促炎因子相互作用是參與和加重膿毒癥晚期器官衰竭的病理生理過程，從而介導(dǎo)了內(nèi)毒素致死效應(yīng)[3，4]。中藥銀杏葉提取物（extract of Ginkgobiloba，EGb761）是從銀杏葉中提取的天然活性物質(zhì)，其主要有效成分為黃酮糖苷類（24 %）和菇烯內(nèi)醋類（6 %），EGb761是一類純天然抗氧化劑，調(diào)節(jié)多種抗氧化酶活性，具有抗炎、抗癌、抑制血小板聚集、抗衰老等多種藥理活性。已有研究表明EGb761對早期炎癥因子TNF-α的抑制作用，在觀察銀杏葉提取物EGb761對LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞釋放HMGB1蛋白表達的調(diào)節(jié)。

材料與方法：脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）；銀杏葉標(biāo)準(zhǔn)提取物EGb761，THP-1，HMGB1抗體、核因子KBp65 抗體及辣根過氧化物酶標(biāo)山羊抗鼠IgG 為Sigma產(chǎn)品。IL-1 β、IL-6 、TNF-α檢測試劑盒。THP1 細(xì)胞培養(yǎng)，檢測炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表達，檢測NF-κB的活化、檢測不同時間點HMGB1蛋白的表達，檢測不同濃度EGb761對HMGB1表達的影響，各組數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean ± SD）表示并應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS13.0進行處理。

結(jié)果：LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞可分泌大量的TNF-α炎性因子，THP-1細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α濃度較LPS明顯降低，檢測THP-1細(xì)胞經(jīng)LPS誘導(dǎo)后，NF-κB表達增高，THP-1細(xì)胞培養(yǎng)液中NF-κB含量隨著EGb761干預(yù)時間延長，LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞蛋白含量升高，LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞蛋白含量降低，HMGB1蛋白含量隨著EGB761濃度增加呈下降趨勢

討論：結(jié)果顯示LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞，HMGB1表達量，結(jié)果顯示EGb761可抑制HMGB1的核轉(zhuǎn)位。HMGB1的中和抗體或其抑制劑丙酮酸乙酯的應(yīng)用對上述病理損傷有明顯減輕的作用，提高膿毒癥動物的活率，表明HMGB1可作為臨床治療炎癥性疾病的新靶點，通過探討藥物EGB761對HMGB1表達調(diào)節(jié)的研究為炎癥性疾病提供新的治療途徑。認(rèn)為EGB761能夠通過下調(diào)核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活化來抑制HMGB1蛋白的表達及核轉(zhuǎn)位，但EGb761是直接還是間接作用于核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB還不是很清楚，有待深入研究。

參考文獻：

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[2]. 孫芳，王璐，閆兵等.銀杏葉提取物活性成分及其藥理作用[J].山東中醫(yī)雜志，2012，3（33）：221-223.

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[4]. Ying Ju Chen，Keh Sung Tsai，Chen Yuan Chiu，et al. EGb761 inhibits inflammatory responses in human chondrocytes and shows chondroprotection in osteoarthritic rat knee[J]. Journal of Orthopaedic Research，2013，31（7）：1032-1038 .