HPLC法測定發(fā)芽糙米中γ—氨基丁酸含量試驗(yàn)

趙海波

摘要：建立測定γ-氨基丁酸的高效液相色譜分析方法，測定不同蒸煮發(fā)芽糙米中的γ-氨基丁酸含量。試驗(yàn)結(jié)果表明：與未蒸煮相比，蒸煮20 min的發(fā)芽糙米中的γ-氨基丁酸含量最高，增加率為66.30%。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；γ-氨基丁酸；發(fā)芽糙米；檢測波長

中圖分類號：S511 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-1161（2017）03-0050-02

發(fā)芽糙米是將糙米發(fā)芽至一定芽長得到的芽體，相當(dāng)于將糙米活化，其芽體具有旺盛的生命活力。發(fā)芽后的糙米不僅品質(zhì)有所提升，而且含有多種生物活性物質(zhì)，如植酸、γ-氨基丁酸、γ-谷維素等。γ-氨基丁酸又名氨酪酸，具有改善神經(jīng)機(jī)能、增強(qiáng)肝功能、防止動脈硬化、調(diào)節(jié)腎功能、預(yù)防肥胖等多種生理活性能。利用高效液相色譜建立γ-氨基丁酸快速分析方法，完成色譜條件的優(yōu)化并對不同蒸煮時(shí)間發(fā)芽糙米中γ-氨基丁酸的含量進(jìn)行測定。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

Agilent 1260高效液相色譜儀；AR224CN型分析天平：奧豪斯儀器（上海）有限公司；pHS-3CW型pH計(jì)：上海般特儀器制造有限公司；SL-250A高速多功能粉碎機(jī)：浙江省永康市松青五金廠；TDL-5-A低速臺式大容量離心機(jī)：上海安亭有限公司。

1.2 液相色譜工作條件

色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18（250 mm×4.6 mm×5 μm）；流動相B：純乙腈；流動相D：濃度為0.025 mol/L，pH為5.90±0.05的乙酸鈉溶液；紫外檢測器：發(fā)射波長332 nm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；流速：0.5 mL/min；梯度洗脫程序如表1所示。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

配制濃度分別為20，40，60，80，100 mg/L的γ-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。依次取上述溶液1 mL，加入1 mL的鄰苯二甲醛衍生試劑，充分混勻，衍生反應(yīng)2 min后過濾，依次測定并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 樣品溶液制備

精確稱取3 g制備好的發(fā)芽糙米粉，溶于50 mL濃度為60%的乙醇中，在50 ℃水浴振蕩1 h，再以

3 000 r/min的速度離心15 min，取上清液用0.45 μm膜過濾，備用。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化

為提高分析靈敏度，吸收波長選擇是關(guān)鍵。利用紫外分光光度計(jì)對標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行掃描，得到最大吸收波長為332 nm。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在選定的色譜分析條件下對1.3中的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行HPLC分析，每個(gè)質(zhì)量濃度水平重復(fù)進(jìn)樣3次。以各化合物的峰面積（y）為縱坐標(biāo)、對應(yīng)質(zhì)量濃度（x，mL/min）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程及相關(guān)系數(shù)。γ-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)溶液在35 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)基線分離，見圖1。

γ-氨基丁酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=22.888x+25.29，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 8。γ-氨基丁酸的量在20～100 mg/L之間時(shí)，呈良好的線性關(guān)系。

2.3 發(fā)芽糙米中γ-氨基丁酸的測定

分別對煮制時(shí)間為20 ，40，60，80 min的烘干發(fā)芽糙米中所含有的γ-氨基丁酸進(jìn)行測定，其結(jié)果見圖2。

從測定結(jié)果看，與未蒸煮相比，蒸煮后的發(fā)芽糙米中的γ-氨基丁酸都有所增加。蒸煮時(shí)間為20 min時(shí)γ-氨基丁酸增加66.30%；40 min時(shí)增加48.19%；60 min時(shí)增加41.38%；80 min時(shí)增加18.07%。

在蒸煮過程中，隨著蒸煮時(shí)間的增加，部分γ-氨基丁酸會隨水蒸氣流失，所以隨著蒸煮時(shí)間的增加，γ-氨基丁酸的含量呈逐漸下降趨勢。

3 結(jié)論

以鄰苯二甲醛為衍生劑，采用高效液相色譜法對不同蒸煮時(shí)間的發(fā)芽糙米中γ-氨基丁酸含量進(jìn)行測定，優(yōu)化色譜條件并建立分析方法：經(jīng)ZORBAX Eclipse Plus C18（250 mm×4.6 mm×5 μm）色譜柱分離，乙腈-乙酸鈉溶液為流動相梯度洗脫，流速

0.5 mL/min，紫外檢測器波長為332 nm。發(fā)芽糙米中所含有的γ-氨基丁酸都有所增加，蒸煮20 min的發(fā)芽糙米中γ-氨基丁酸含量最高，增加66.30%。

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