閩產(chǎn)藤茶總黃酮提取物中三種主成分的含量測(cè)定

易開，林珠燦，柳慶龍，徐偉，郭素華，2

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建福州350101）

閩產(chǎn)藤茶總黃酮提取物中三種主成分的含量測(cè)定

易開1，林珠燦1，柳慶龍1，徐偉1，郭素華1，2

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建福州350101）

目的建立同時(shí)測(cè)定藤茶總黃酮提取物中二氫楊梅素、楊梅苷、楊梅素的HPLC含量分析法。方法采用TOP ODS-AQ column（4.6×250 mm，5 μm）色譜柱，以甲醇-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，流速1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)252 nm，柱溫30℃。結(jié)果二氫楊梅素、楊梅苷、楊梅素的線性范圍分別在31.63～632.69（r＝0.9999）、1.61～32.13（r＝0.9998）、4.62～92.41（r＝0.9998）μg·mL-1；平均加樣回收率分別為97.58%、103.04%、102.69%，RSD分別為1.42%、0.85%、1.35%。結(jié)論該法操作簡(jiǎn)便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確，可適用于藤茶總黃酮提取物的質(zhì)量控制。

藤茶總黃酮提取物；二氫楊梅素；楊梅苷；楊梅素；高效液相色譜法

藤茶系葡萄科蛇葡萄屬植物顯齒蛇葡萄Ampelopsis grossedentata（Hand-Mazz）W.T.Wang的莖葉，又名甜茶藤、龍須茶等，主要分布于福建、江西、廣東、云南、貴州等地，是一種應(yīng)用歷史悠久、藥食兩用的類茶植物資源，福建泰寧、將樂、尤溪等縣客家人民將其視為瑰寶。藤茶味甘、淡，性涼，具有清熱解毒、利濕消腫之功效，主治感冒風(fēng)熱、咽喉腫痛、目赤腫痛、黃疸型肝炎、癰腫瘡癤等癥［1］。近年來(lái)有研究表明：藤茶為富含黃酮類成分的一種天然植物，其總黃酮含量高達(dá)43.4%～44.0%，其中二氫楊梅素（又稱福建茶素）含量可高達(dá)30%左右，為其最主要的特征性成分［2］?，F(xiàn)代藥理研究顯示：藤茶總黃酮提取物具有良好抗腫瘤［3-4］、保肝護(hù)肝、降血糖降脂、抗氧化、抗炎抑菌、調(diào)節(jié)免疫力等作用［5］，可見藤茶總黃酮提取物極具開發(fā)價(jià)值和應(yīng)用前景。然而目前對(duì)藤茶總黃酮提取物的研究主要集中在提取、純化工藝及藥理活性等方面，卻尚未見對(duì)藤茶總黃酮提取物的多成分分析的研究報(bào)道?；诖?，本研究采用HPLC法同時(shí)測(cè)定了閩產(chǎn)藤茶總黃酮提取物中二氫楊梅素、楊梅苷及楊梅素的含量。

1儀器與試劑

LC－20AT液相色譜儀、SPD-20A紫外檢測(cè)器（日本島津公司）；XS105型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。藤茶總黃酮提取物樣品是在前期采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)——響應(yīng)面法優(yōu)化大孔樹脂純化閩產(chǎn)藤茶總黃酮提取物工藝的基礎(chǔ)上制備的［6］；對(duì)照品：二氫楊梅素（成都曼思特生物科技有限公司，批號(hào)：MUST-14110908，純度≥98.0%）；楊梅苷（北京

盈澤納新化工技術(shù)研究院，批號(hào)：15081713，純度為99.41%），楊梅素（北京盈澤納新化工技術(shù)研究院，批號(hào)：15050810，純度為98.31%）；甲醇為色譜純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件參考文獻(xiàn)［7］，色譜柱TOP ODS-AQ柱（4.6×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇（A）-1%磷酸溶液（D），梯度洗脫（0～10 min，35%A；10～20 min，35%A→80%A；20～30 min，80%A）；檢測(cè)波長(zhǎng)：252 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量10 μL。在上述色譜條件下，二氫楊梅素、楊梅苷、楊梅素3個(gè)色譜峰分離度均大于1.5，理論板數(shù)均大于3 000，樣品中其他成分對(duì)其測(cè)定均無(wú)干擾。色譜圖見圖1、圖2。

圖1混合對(duì)照品HPLC色譜圖

2.2供試品溶液的制備精密稱取閩產(chǎn)藤茶總黃酮提取物樣品5.0 mg，置于10 mL容量瓶中，加純甲醇定容，作為供試品溶液，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液備用。

2.3對(duì)照品溶液的制備分別精密稱定二氫楊梅素、楊梅苷、楊梅素對(duì)照品適量，加甲醇配制成每1 mL分別含二氫楊梅素632.69 μg、楊梅苷32.13 μg、楊梅素92.41 μg的混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液備用。

圖2藤茶總黃酮提取物樣品HPLC色譜圖

2.4線性關(guān)系考察精密吸取2.3項(xiàng)下混合對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0 mL分別置于10 mL容量瓶中，用純甲醇定容至刻度，振蕩搖勻，依照上述色譜條件分別進(jìn)樣分析。以峰面積（Y）對(duì)各對(duì)照品濃度（X）進(jìn)行線性回歸，見表1。

2.5精密度試驗(yàn)精密吸取混合對(duì)照品溶液，依照2.1項(xiàng)色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，分別計(jì)算二氫楊梅素、楊梅苷、楊梅素3種成分峰面積的RSD（n＝5）為0.16%、0.13%、0.55%，結(jié)果顯示儀器精密度良好。

表1藤茶總黃酮提取物中3種成分線性關(guān)系

2.6重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批藤茶總黃酮提取物樣品5份，按2.2項(xiàng)下方法制備得到供試品溶液，分別依照上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果顯示：樣品中二氫楊梅素、楊梅苷、楊梅素的平均含量分別為（858.05±13.48）、（4.84±0.14）、（15.57±0.3）μg· mg-1，RSD分別為1.57%、2.94%、1.94%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)按2.2項(xiàng)下制備得到供試品溶液，分別于0、2、4、12、24、48 h進(jìn)樣分析，記錄峰面積。結(jié)果顯示：二氫楊梅素、楊梅苷、楊梅素峰面積的RSD分別為0.27%、1.64%、0.69%，可見樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8加樣回收率試驗(yàn)精密稱取6份含量已知的同一批藤茶總黃酮提取物樣品2.5 mg，分別精密加入適量的對(duì)照品溶液，依照2.2項(xiàng)下方法制備得到供試品溶液，分析測(cè)定含量，見表2。

表2藤茶總黃酮提取物加樣回收率（n＝6）

2.9樣品含量測(cè)定分別精密稱取不同批次的閩產(chǎn)藤茶總黃酮提取物樣品，依照2.2項(xiàng)下方法制備得到供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3。

3討論

3.1波長(zhǎng)選擇二氫楊梅素在218、291 nm波長(zhǎng)處有較大吸收，而楊梅苷在252、373 nm波長(zhǎng)處有較大吸收，楊梅素的最大吸收波長(zhǎng)為251、351 nm，綜合考慮后，本次實(shí)驗(yàn)選擇252 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，在此條件下各峰的基線平穩(wěn)，分離度良好，檢測(cè)靈敏度高。

表3藤茶總黃酮提取物3種成分含量測(cè)定結(jié)果μg·mg-1

3.2含量分析本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC法同時(shí)測(cè)定閩產(chǎn)藤茶總黃酮提取物中二氫楊梅素、楊梅苷和楊梅素含量的分析方法，可用于藤茶總黃酮提取物中多成分的定量分析。通過(guò)HPLC法含量分析，結(jié)果表明：總黃酮中二氫楊梅素含量最高，可高達(dá)到80%以上；楊梅苷含量為0.47%～1.22%；楊梅素為1.56%～2.61%。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定3種成分，比以往方法更為簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，為藤茶總黃酮提取物的全面質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

［1］國(guó)家中醫(yī)藥管理局編委會(huì).中華本草［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2008：4229.

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R284.1

A

1000-338X（2016）06-0051-02

2016-12-15

福建省中青年教師教育科研項(xiàng)目（JA15254）；福建省科技廳引導(dǎo)性項(xiàng)目（2017Y0050）

易開（1991—），男，碩士研究生，研究方向：天然藥物成分與活性研究。

郭素華（1964—），女，教授，博士。

E-mail：guosuhua2005@126.com