寧夏回漢族ACE基因I/D多態(tài)性與OSAHS合并高血壓關(guān)聯(lián)性的研究

黃曉波，邵 萍，王建鋒，祁春雷，朱 靜，劉 露，任紅巖，陳麗君，許 旺

·臨床研究·

寧夏回漢族ACE基因I/D多態(tài)性與OSAHS合并高血壓關(guān)聯(lián)性的研究

黃曉波，邵 萍，王建鋒，祁春雷，朱 靜，劉 露，任紅巖，陳麗君，許 旺

目的 探討寧夏回族、漢族血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)基因I/D多態(tài)性與阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(OSAHS)合并高血壓的關(guān)聯(lián)性。方法 入選寧夏回族OSAHS患者112例、漢族OSAHS患者157例，根據(jù)是否合并高血壓分為2組，即單純OSAHS組、OSAHS合并高血壓組；選同期無基礎(chǔ)疾病的回族60例、漢族92例為健康對照組。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測ACE基因I/D多態(tài)性。結(jié)果 回族、漢族間進(jìn)行比較，對照組、單純OSAHS組、OSAHS合并高血壓組其Ⅱ基因型頻率、I等位基因頻率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)?；刈鍐渭僌SAHS組、OSAHS合并高血壓組Ⅱ基因型頻率及I等位基因頻率高于回族對照組(P<0.05)；漢族單純OSAHS組、OSAHS合并高血壓組Ⅱ基因型頻率及I等位基因頻率高于漢族對照組(P<0.05)?；刈?、漢族單純OSASH組與OSASH合并高血壓組同民族間進(jìn)行比較，Ⅱ基因型及I等位基因頻率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 ACE基因I/D多態(tài)性在寧夏回族、漢族人群間分布無顯著性差異，ACE基因Ⅱ基因型及I等位基因與寧夏回族、漢族OSAHS發(fā)病及OSAHS合并高血壓存在關(guān)聯(lián)性。

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征；高血壓； 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶； 基因； 回族； 漢族

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(OSAHS)患者夜間睡眠打鼾伴呼吸暫停，出現(xiàn)白天嗜睡及其他臨床癥狀并導(dǎo)致多種心腦血管并發(fā)癥，其中高血壓與OSAHS關(guān)系尤為密切。研究報道OSAHS患者43%合并高血壓，OSAHS是高血壓的獨(dú)立危險因素[1]；無論性別、年齡、種族情況如何，OSAHS均與高血壓有相關(guān)性[2]。目前OSAHS與高血壓密切相關(guān)的機(jī)制尚不明確，以上兩種疾病均呈現(xiàn)家族聚集現(xiàn)象，遺傳因素可能是發(fā)病的原因之一，兩種疾病的易感基因可能有部分重疊；另一方面，在相同環(huán)境中生活的不同民族其疾病的患病率存在差異，例如寧夏地區(qū)鼾癥及高血壓患病率漢族均高于回族，提示遺傳背景差異可能是導(dǎo)致回族、漢族以上疾病發(fā)率不同的原因[3-4]。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)基因多態(tài)性被認(rèn)為與原發(fā)性高血壓密切相關(guān)，另一方面ACE基因與肥胖相關(guān)從而間接參與OSAHS的發(fā)病。本研究應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測ACE基因I/D多態(tài)性，探討ACE基因I/D多態(tài)性在寧夏回族、漢族人群之間分布是否存在差異，分析ACE基因I/D多態(tài)性與OSAHS合并高血壓的關(guān)聯(lián)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2012年1月-2016年2月本院確診的回族OSAHS患者112例、漢族OSAHS患者157例，根據(jù)是否患高血壓病分組?；刈鍐渭僌SAHS組52例，男44例，女8例；年齡20～71歲，平均(43.1±11.1)歲；回族OSAHS合并高血壓組60例，男54例，女6例；年齡27～80歲，平均(50.4±12.9)歲。漢族單純OSAHS組72例，男66例，女6例，年齡26～65歲，平均(49.1±10.4)歲；漢族OSAHS合并高血壓組85例，男79例，女6例；年齡27～69歲，平均(49.1±10.4)歲。同期體檢排除基礎(chǔ)疾病的回族60例、漢族92例為健康對照組，其中回族男52例，女8例，年齡20～76歲，平均(40.5±14.4)歲；漢族男80例，女12例，年齡20～74歲，平均(42.0±12.9)歲。研究納入的所有回族受試對象均3代內(nèi)無其他民族血緣關(guān)系，且3代內(nèi)均居住于寧夏回族自治區(qū)境內(nèi)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)：OSAHS診斷標(biāo)準(zhǔn)，有典型睡眠打鼾伴呼吸暫停、日間嗜睡、Epworth嗜睡量表(ESS)≥9分等癥狀，存在上氣道任何部位狹窄或阻塞，AHI>5次/h；日間嗜睡不明顯(ESS評分<9分)者，AHI≥10 次/h或AHI≥5 次/h，且存在認(rèn)知功能障礙、高血壓、冠心病、腦血管疾病、糖尿病及失眠等1項或1項以上合并癥[5]。高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)：未使用降壓藥物的情況下，非同日3次測量血壓，收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓≥90 mmHg；或患者既往明確診斷高血壓，目前正在使用降壓藥物，血壓低于140/90 mmHg的患者[6]。

1.3 研究方法

1.3.1 多導(dǎo)睡眠圖(PSG):受試對象均采用美國凱迪泰SM-SW2000型多導(dǎo)睡眠儀行夜間7 hPSG檢查，系統(tǒng)自動分析后由睡眠專職醫(yī)師進(jìn)行復(fù)核。記錄呼吸暫停低通氣指數(shù)(AHI)、夜間最低血氧飽和度(LSaO2)、夜間平均血氧飽和度(MSaO2)等指標(biāo)。

1.3.2 ACE(I/D)多態(tài)性檢測:用PSG的次日晨取外周靜脈血3 mL，10 000 r/min離心1 min，吸去上清液，以天根生物科技有限公司TIANamp試劑盒提取DNA。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法擴(kuò)增ACE基因16內(nèi)含子，引物設(shè)計正向5′-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3′，反向5′-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3′。PCR反應(yīng)總體積25 μl，其中預(yù)混液12.5 μl，2種引物均為1 μl，模板1 μl，無菌雙蒸水9.5 μl；按94 ℃預(yù)變性4 min，94 ℃變性30 min，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，循環(huán)35次。PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳分離，紫外燈下鑒定基因型。基因型判讀：顯現(xiàn)490 bp 1條區(qū)帶者為Ⅱ基因型；顯現(xiàn)190 bp 1條區(qū)帶者為DD基因型；490 bp和190 bp 2條區(qū)帶均顯現(xiàn)者為ID基因型，見圖1(目錄后)。

2 結(jié)果

2.1 回族、漢族幾組研究對象一般指標(biāo)及PSG指標(biāo)比較：回族、漢族研究對象各組間性別構(gòu)成比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.75、2.01，P>0.05)?；刈錙SAHS合并高血壓組年齡、收縮壓高于其他2組，BMI、AHI、MSaO2、LSaO2、舒張壓3組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。漢族OSAHS合并高血壓組年齡、收縮壓、舒張壓高于對照組及單純OSAHS組(P<0.05)；單純OSAHS組、OSAHS合并高血壓組BMI高于對照組(F=23.1，P<0.05)；AHI、MSaO2、LSaO23組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.2 回族、漢族ACE(I/D)基因檢測結(jié)果：回族、漢族對照組ACE基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡，具有群體代表性(χ2=0.01、1.6，P>0.05)。回族、漢族之間進(jìn)行比較，對照組、單純OSAHS組、OSAHS合并高血壓組其Ⅱ基因型頻率、I等位基因頻率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.63、1.63、0.5、0.01、0.5、0.01，P>0.05)?；刈鍐渭僌SAHS組、OSAHS合并高血壓組Ⅱ基因型頻率及I等位基因頻率高于回族對照組(χ2=6.5、9.2，8.2、11.7，P<0.05)；漢族單純OSAHS組、OSAHS合并高血壓組Ⅱ基因型頻率及I等位基因頻率高于漢族對照組(χ2=6.2、11.2、6.7、15.3，P<0.05)?；刈濉h族單純OSASH組與OSASH合并高血壓組同種族間比較，Ⅱ基因型及I等位基因頻率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.2、0.5、0.2、1.4，P>0.05)，見表2。

表1 回族、漢族研究對象一般指標(biāo)及PSG指標(biāo)的比較±s)

表2 回族、漢族研究對象ACE基因型及等位基因頻率[n(%)]

2.3 不同ACE(I/D)基因型回族、漢族OSAHS患者PSG指標(biāo)比較：回族、漢族Ⅱ基因型OSAHS患者最長呼吸暫停時間較長(F=5.61、6.15，P<0.05)、LSaO2較低(F=4.64、5.75，P<0.05)，見表3。

表3 不同ACE基因型回族、漢族OSASH患者PSG指標(biāo)

3 討論

ACE是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)中的重要組成部分，血漿ACE濃度主要受到ACE基因影響，ACE基因位于17號染色體長臂2區(qū)3帶，由26個外顯子及25個內(nèi)含子組成[7]。ACE基因第16內(nèi)含子中插入或缺失一個長度為287 bp的堿基片段，從而ACE基因呈現(xiàn)DD、Ⅱ、ID 3種基因型，D、Ⅰ 2種等位基因，這種ACE基因存在2個以上基因型的現(xiàn)象被稱為ACE基因I/D多態(tài)性[8]。遺傳背景的不同可能導(dǎo)致同一地區(qū)生活的不同民族人群疾病患病率呈現(xiàn)差異。有研究報道，ACE基因DD基因型是寧夏回族冠心病發(fā)病的獨(dú)立危險因素；脂聯(lián)素基因基因+45T/G多態(tài)性與寧夏回族人群代謝綜合征發(fā)病有相關(guān)性，而與漢族無相關(guān)性[9-10]。流行病學(xué)調(diào)查顯示，寧夏地區(qū)漢族鼾癥及高血壓患病率分別為21.6%、27.6%，回族分別為17.7%、24.5%，漢族均高于回族，但本研究結(jié)果顯示ACE基因I/D多態(tài)性在寧夏回族、漢族人群間分布無差異性。

有研究報道，老年高血壓患者DD基因型及D等位基因頻率高于對照組，DD基因型及D等位基因是高血壓發(fā)病的危險因素[11]；Meta分析顯示DD基因型及D等位基因個體易患原發(fā)性高血壓[12]；DD基因型攜帶者血清ACE水平約為Ⅱ基因型的2倍，不同基因型血漿ACE水平趨勢為DD>ID>Ⅱ[13]；無論性別，DD基因型血漿ACE水平均高于ID及Ⅱ基因型[14]。由此認(rèn)為，ACE基因型DD基因型及D等位基因與原發(fā)性高血壓存在關(guān)聯(lián)性。

本研究無論回族或漢族受試對象，單純OSAHS及OSAHS合并高血壓患者Ⅱ基因型及I等位基因頻率均高于同民族對照組，而單純OSAHS組與OSAHS合并高血壓組進(jìn)行同民族間比較，其Ⅱ基因型及Ⅰ等位基因頻率無差異，提示Ⅱ基因型及I等位基因與寧夏回族、漢族OSAHS發(fā)病及OSAHS合并高血壓存在關(guān)聯(lián)性。國內(nèi)外研究報道，Ⅰ等位基因與Ⅱ基因型是OSAHS發(fā)病及OSAHS合并高血壓的危險因素[15-17]；Meta分析顯示Ⅱ基因型是亞洲人群OSAHS合并高血壓的危險因素[18]，以上研究結(jié)果均與本研究一致。研究報道攜帶I等位基因的OSAHS患者睡眠過程中快動眼睡眠期(REM 期)比例更高，REM期睡眠中呼吸暫停持續(xù)時間長、血氧飽和度下降顯著，因此I等位基因與OSAHS嚴(yán)重程度呈正相關(guān)性[19]。本研究OSAHS患者中，Ⅱ基因型攜帶者呼吸暫停持續(xù)時間更長、缺氧更嚴(yán)重，提示Ⅱ基因型還與OSAHS嚴(yán)重程度存在一定關(guān)聯(lián)性。

本研究顯示，ACE基因I/D多態(tài)性與原發(fā)性高血壓及OSAHS合并高血壓的關(guān)聯(lián)性不一致，而高血壓及OSAHS均是復(fù)雜疾病，多基因及基因間交互作用與以上2種疾病的發(fā)生均相關(guān)，沿用單基因遺傳病的研究方法可能存在不足。此外，OSAHS可導(dǎo)致繼發(fā)性血壓增高。研究報道OSAHS患者血漿ACE、血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)濃度增高，長期無創(chuàng)機(jī)械通氣可使OSAHS患者血壓及Ang Ⅱ水平下降[20-22]。為突出OSAHS合并高血壓在發(fā)病機(jī)制、臨床表現(xiàn)、治療等方面與原發(fā)性高血壓不同之處，我國專家共識提出“阻塞性睡眠呼吸暫停相關(guān)性高血壓”這一概念，從而規(guī)范OSAHS合并高血壓的診斷及治療[23]。而分析OSAHS對血壓的繼發(fā)作用，需根據(jù)血清ACE、Ang Ⅱ等指標(biāo)，結(jié)合對OSAHS有效治療后以上指標(biāo)變化，進(jìn)一步探究OSAHS與高血壓相關(guān)性的機(jī)制。

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StuRelationship between angiotensin converting enzyme gene polymorphism and OSAHS accompanied hypertension in the Hui and Han nationalities in Ningxia

HUANGXiaobo,SHAOPing,WANGJianfeng,QIChunlei,ZHUJing,LIULu,RENHongyan,CHENLijun,XUWang.

DepartmentofRespiration,TheFirstPeople’sHospitalofYinchuan,Yinchuan750001,China

XUWang，Email: hotdog_20081234@126.com

Objective To[Abstract] Objective To explore the association of angiotensin converting enzyme (ACE) gene polymorphism with obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome (OSAHS) accompanied hypertension in the Hui and Han nationality in Ningxia.Methods 157 Han and 112 Hui patients with OSAHS were divided into hypertensive group and normotensive group; and 60 Hui and 92 Han healthy subjects enrolled as normal control. DNA was extracted from blood sample and amplified by polymerase chain reaction, the distribution of ACE I/D allele and gene type were compared between different nationality and different group.Results The genotype and allele had no significantly different between different nationalities in three group (P>0.05). In Hui nationality, frequency of II genotype and I allele were higher in the hypertensive OSAHS and normotensive OSASH than those in the normal controls (P<0.05);And in Han nationality , II genotype and I allele were higher in the hypertensive OSAHS and normotensive OSAHS than those in the normal controls (P<0.05). The frequency of II genotype and I allele had no significantly different between the normotensive OSAHS patients and hypertensive OSAHS in same nationality (P>0.05).Conclusion The distribution of ACE gene hasd no significantly different between Hui and Han nationalities. The I allele and II genotype arewere correlatinged with Hui and Han OSAHS and OSAHS accompanied hypertension in Ningxia.

Obstructivesleepapnea-hypopneasyndrome;Hypertension;Angiotensinconvertingenzyme;Gene;Huinationality;Hannationality

10.13621/j.1001-5949.2017.04.0326

寧夏自然科學(xué)基金資助項目(NZ1280)

寧夏銀川市第一人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，寧夏 銀川 750001

許旺，Email：hotdog_20081234@126.com

http://kns.cnki.net/kcms/detail/64.1008.R.20170313.0935.026.html

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A

2016-09-23 [責(zé)任編輯]李 潔