肺炎衣原體抗體兩種檢測(cè)方法的對(duì)比分析

胡利清，周玉球，吳洪秋

(珠海市婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣東珠海519001)

肺炎衣原體抗體兩種檢測(cè)方法的對(duì)比分析

胡利清，周玉球，吳洪秋

(珠海市婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣東珠海519001)

目的探討酶聯(lián)免疫法(ELISA)和間接免疫熒光法（IIFA）在肺炎衣原體（CP）感染早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法對(duì)該院兒科2015年1月至2016年7月疑因CP感染的225例住院患兒采用ELISA和IIFA檢測(cè)血清CP－IgM結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，比較兩種方法檢測(cè)CP－IgM陽(yáng)性率的差異。結(jié)果ELISA和IIFA各檢出CP－IgM陽(yáng)性81例和87例，陽(yáng)性檢出率分別為36．0%和38．7%，ELISA和IIFA陽(yáng)性檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。兩法的陽(yáng)性符合率為94．2%，陰性符合率為96．5%，總符合率為96．9%。同時(shí)采用這兩種方法檢測(cè)CP－IgM，則陽(yáng)性檢出率可達(dá)到39．1%，敏感性明顯高于任一單一方法。結(jié)論IIFA檢測(cè)CP－IgM較ELISA敏感，兩者聯(lián)合檢測(cè)可以提高CP感染診斷陽(yáng)性率，酶聯(lián)免疫法ELISA抗體診斷試劑適合在臨床檢測(cè)中推廣應(yīng)用。

肺炎衣原體；肺炎衣原體抗體；間接免疫熒光法

肺炎衣原體(Chlamydia pneumoniae，CP)是常見社區(qū)感染的呼吸道病原體之一[1]，起病緩慢，老人與幼兒較成人易感染該病原體[2]，常引起急性呼吸道感染，尤其是咽炎，鼻竇炎，支氣管炎，肺炎，并可誘發(fā)支氣管哮喘急性發(fā)作，臨床常表現(xiàn)為咽痛、咳嗽、咳痰、發(fā)熱等，一般癥狀較輕。但在有基礎(chǔ)疾病的前提下，CP感染不但可以引起非典型肺炎，還可引起神經(jīng)、循環(huán)等肺外其他系統(tǒng)的并發(fā)癥，可引起虹膜炎、肝炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎及結(jié)節(jié)性紅斑等。是艾滋病、惡性腫瘤或白血病等疾病發(fā)生繼發(fā)感染的重要病原體之一。另發(fā)現(xiàn)在一些疾病如惡性腫瘤、腦血管病、腎功能不全、帕金森綜合征、肝硬化及糖尿病患者，均可檢出較高陽(yáng)性率的肺炎衣原體抗體。肺炎衣原體肺部感染的臨床癥狀及X線表現(xiàn)均無特異性，難以和其他非典型肺炎相區(qū)別，尤其是肺炎支原體肺炎，故確診有賴于實(shí)驗(yàn)室診斷。CP的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法有很多，包括CP直接涂片和培養(yǎng)法、免疫熒光直接抗原檢測(cè)法、補(bǔ)體結(jié)合抗體檢測(cè)、核酸擴(kuò)增檢測(cè)法和血清檢測(cè)法等，本文回顧性分析225例CP肺炎患兒臨床資料，探討酶聯(lián)免疫法(ELISA)和間接免疫熒光法（IIFA）檢測(cè)CP抗體在兒童CP感染早期診斷的價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1．1一般資料選擇2015年1月至2016年7月在本院兒科住院同時(shí)做ELISA和IIFA檢測(cè)的患兒225例，其中男121例，女104例，年齡1～9歲，中位年齡3歲。

1．2方法CP－IgM ELISA和IIFA檢測(cè)試劑盒分別購(gòu)自珠海麗珠試劑公司和鄭州安圖生物工程股份有限公司。采用日本Olympus公司生產(chǎn)的CX22LKDRFS1型熒光顯微鏡用于IIFA熒光觀察。嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行操作。ELISA每次測(cè)試均設(shè)置空白、陰性和陽(yáng)性對(duì)照，與待測(cè)標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)。IIFA每次測(cè)試均設(shè)置陰性、陽(yáng)性對(duì)照，與待測(cè)標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)。待檢血清經(jīng)過IgG吸附劑處理后，加在包被有CP抗原的生物玻片上，熒光顯微鏡下觀察內(nèi)部質(zhì)控孔陰性，陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)預(yù)期結(jié)果，以標(biāo)本中McCoy細(xì)胞中的CP出現(xiàn)蘋果綠熒光判斷為陽(yáng)性，否則為陰性。

1．3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 19．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理和分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，兩種檢測(cè)方法陽(yáng)性率的比較采用配對(duì)χ2檢驗(yàn)，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1檢測(cè)CP－IgM的陽(yáng)性率采用ELISA和IIFA從上述患兒血清中檢出CP－IgM陽(yáng)性有81例和87例，陽(yáng)性率分別為36．0%．和38．7%，IIFA檢測(cè)陽(yáng)性率高于ELISA，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=196．59，P＞0．05）。

2．2 ELISA和IIFA檢測(cè)的一致性兩種方法陽(yáng)性符合率為94．2%（81/87）、陰性符合率為96．5%（138/143）。IIFA檢測(cè)呈陽(yáng)性而ELISA檢測(cè)呈陰性有7例，IIFA檢測(cè)呈陰性而ELISA檢測(cè)呈陽(yáng)性有1例。同時(shí)采用這兩種方法檢測(cè)CP－IgM，則陽(yáng)性檢出率可達(dá)到39．1%，敏感性明顯高于任一單一方法。見表1。

表1 ELISA與IIFA測(cè)定CP-Ig M結(jié)果比較（n）

3 討論

肺炎衣原體(Cp)是一類嚴(yán)格寄生于真核細(xì)胞內(nèi)，具有獨(dú)特發(fā)育周期，并能通過細(xì)菌濾器的原核細(xì)胞型微生物，經(jīng)呼吸道傳播具有高度傳染性。肺炎衣原體無動(dòng)物儲(chǔ)存宿主，感染后潛伏期平均為15～30d左右，肺炎衣原體侵入人體后，主要引起單核巨噬細(xì)胞反應(yīng)，肺泡巨噬細(xì)胞作為病原體貯存和傳播的載體，造成其在宿主體內(nèi)的持續(xù)感染。有研究表明肺炎衣原體在機(jī)體內(nèi)持續(xù)感染可長(zhǎng)達(dá)9年，甚至在應(yīng)用抗生素治療期間仍存在持續(xù)感染[3]。CP感染是5歲以上兒童及成人常見呼吸系統(tǒng)感染性疾病的病原體，主要由上呼吸道和肺部感染引起成人及青少年的非典型肺炎，亦可引起咽炎、喉炎、支氣管炎，以及百日咳樣疾病與反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎[4，5]等。據(jù)統(tǒng)計(jì)是引起感染性性肺炎的第三位主要病原體[6]。在呼吸系統(tǒng)感染的患者中檢測(cè)血清肺炎衣原體抗體陽(yáng)性率為22．8%～55．8%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他國(guó)家的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)[7]。研究表明，隨著患者年齡增長(zhǎng)CP的感染率也會(huì)隨之升高，老年人最高可達(dá)到75%[8]。CP感染分布呈雙峰型，臨床上小兒患者感染后癥狀和體征較輕，而老年感染患者合并慢性阻塞性肺疾病，心、腦、腎等神經(jīng)循環(huán)系統(tǒng)疾病，代謝病等基礎(chǔ)疾病時(shí)，臨床癥狀表現(xiàn)則比較嚴(yán)重。有研究表明．肺炎衣原體感染還與慢性阻塞性肺疾病(COPD)[9]，肺氣腫[10]以及動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)[11，12]。

近些年來，CP感染的發(fā)病率逐漸增高，其感染初期癥狀不典型，臨床上常規(guī)用藥治療效果欠佳，因此，早期診斷、早期治療對(duì)減少患者并發(fā)癥、降低病人住院費(fèi)用有重要意義。目前實(shí)驗(yàn)室對(duì)肺炎衣原體的檢測(cè)方法主要有三種，一種是病原學(xué)檢查，是確診本病的可靠方法，但臨床診斷不常用，如直接涂片后用Giemsa或直接培養(yǎng)法檢測(cè)出肺炎衣原體包涵體及原體。二是免疫學(xué)檢查以熒光或酶標(biāo)記的特異性單克隆抗體直接檢測(cè)標(biāo)本中肺炎衣原體抗原或抗體，主要包括ELISA法和間接免疫熒光法。三是PCR法檢測(cè)肺炎衣原體DNA，其敏感性和特異性更高，且可和其他種衣原體區(qū)分，但這種方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境有特殊要求，實(shí)驗(yàn)室還必須配備有高端設(shè)備和高級(jí)技術(shù)人員，且PCR方法假陽(yáng)性率難以控制，因此一般實(shí)驗(yàn)室難以開展[13]。而通過上面的試驗(yàn)研究和分析表明，ELISA法適用于檢測(cè)CP感染患者血清中特異性抗體的變化，其敏感度好，特異性強(qiáng)，方法操作簡(jiǎn)便，價(jià)格低廉且與間接免疫熒光法IIFA檢測(cè)結(jié)果比較，陽(yáng)性率無顯著差異(P＞0．05)，適合臨床大批量篩查和流行病學(xué)調(diào)查，在普通實(shí)驗(yàn)室均可開展[14]。IIFA靈敏度、特異性高，但也存在一定的局限性，如需要非常有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員進(jìn)行試驗(yàn)和分析、待測(cè)標(biāo)本保存時(shí)間有限、試劑有效期較短、需要熒光顯微鏡且試劑價(jià)格不菲等。CP檢測(cè)有助于指導(dǎo)臨床醫(yī)師判斷患者的病情發(fā)展程度，為臨床制定有效的診療方案提供科學(xué)依據(jù)。

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10．3969/j.issn.1674－1129．2017．02．045

2016-10-20；

2017-03-10)