黏蛋白陽(yáng)性的漿膜腔積液白細(xì)胞計(jì)數(shù)的改良方法

陸煒高，張宇，韋登球

(南寧市第八人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 南寧 530001)

·經(jīng)驗(yàn)交流·

黏蛋白陽(yáng)性的漿膜腔積液白細(xì)胞計(jì)數(shù)的改良方法

陸煒高，張宇，韋登球

(南寧市第八人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 南寧 530001)

目的 探討?zhàn)さ鞍钻?yáng)性的漿膜腔積液白細(xì)胞計(jì)數(shù)改良措施，以提高其計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。方法選取我院2015年5月至2016年4月280例漿膜腔積液中李凡它試驗(yàn)（Rivalta）陽(yáng)性的112例患者為研究對(duì)象，分別采用常規(guī)方法和改良法對(duì)其進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)，重復(fù)計(jì)數(shù)5次并取其平均值作為最終結(jié)果進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果改良法下112例黏蛋白陽(yáng)性的漿膜腔積液白細(xì)胞計(jì)數(shù)均值為155×106/L、標(biāo)準(zhǔn)差為5.7、離散度集中、白細(xì)胞結(jié)構(gòu)分明且清晰、背景清晰、分辨率清楚，而常規(guī)方法下黏蛋白陽(yáng)性的漿膜腔積液白細(xì)胞計(jì)數(shù)為125×106/L、標(biāo)準(zhǔn)差為8.5、離散度離散、白細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊且不清晰、背景模糊、干擾較多，二者相比較，改良法所得結(jié)果更加準(zhǔn)確，更易于標(biāo)準(zhǔn)化。結(jié)論對(duì)于黏蛋白陽(yáng)性的漿膜腔積液，采用改良法進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)有助于降低黏蛋白帶來(lái)的干擾，使得結(jié)果更加符合客觀實(shí)際，繼而為臨床診療工作開(kāi)展提供準(zhǔn)確的科學(xué)依據(jù)，值得在今后臨床工作中推廣使用。

黏蛋白陽(yáng)性；李凡它試驗(yàn)；漿膜腔積液；白細(xì)胞計(jì)數(shù)

漿膜腔積液是指患者機(jī)體處于病理狀態(tài)下胸腔、腹腔或者是心包腔之中積聚的過(guò)多液體，其本身就屬于疾病的一種臨床表現(xiàn)[1]。在目前臨床中漿膜腔積液可分為滲出液以及漏出液兩種，二者各自體現(xiàn)的疾病存在著顯著的差異性，同時(shí)對(duì)于后續(xù)的診療工作開(kāi)展同樣具有重要影響。李凡它試驗(yàn)則是用于黏蛋白定性試驗(yàn)的一種方法，如果漿膜腔積液伴有白色云霧狀混濁，則其結(jié)果為陽(yáng)性，絕大多數(shù)情況下性質(zhì)為滲出液。由于其操作簡(jiǎn)便而被廣泛應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)工作中。然而，隨著臨床工作的深入開(kāi)展，常規(guī)方法下漿膜腔積液白細(xì)胞計(jì)數(shù)僅考慮樣本是否為血性標(biāo)本，并不區(qū)分李凡它試驗(yàn)陰陽(yáng)性對(duì)其結(jié)果帶來(lái)的影響，使得血性標(biāo)本中黏蛋白對(duì)其帶來(lái)了較大的干擾，削弱結(jié)果的準(zhǔn)確性與客觀性，導(dǎo)致其計(jì)數(shù)偏差。鑒于此，本研究圍繞黏蛋白陽(yáng)性的漿膜腔積液白細(xì)胞計(jì)數(shù)的改良予以深入分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2015年5月至2016年4月280例漿膜腔積液中李凡它試驗(yàn)(Rivalta)陽(yáng)性的112例(40%)患者為研究對(duì)象，其中男性66例，女性46例；年齡35～68歲，平均(51.25±1.33)歲；病程15 d～3個(gè)月，平均(1.24±0.21)個(gè)月；漿膜腔積液來(lái)源：胸腔54例、腹腔57例、心包腔1例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)李凡它試驗(yàn)陽(yáng)性的漿膜腔積液標(biāo)本；(2)所有標(biāo)本均由臨床醫(yī)師行胸腔穿刺術(shù)、腹腔穿刺術(shù)、心包穿刺術(shù)采集所得。排除標(biāo)準(zhǔn)：凝塊、細(xì)胞變性、細(xì)胞破壞自溶等漿膜腔積液標(biāo)本。

1.2 方法

1.2.1 蛋白定性試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)原理：通常情況下胸腔、腹腔或者是心包腔滲出液中包含有大量的漿膜黏蛋白，在漿膜腔積液標(biāo)本處于酸性條件下可發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而生成白色霧狀沉淀[2]。具體試驗(yàn)方法如下：取無(wú)菌干凈的100 mL量筒，向其中加入50 mL蒸餾水之后滴入0.1 mL乙酸，pH 3～5，在用力混勻之后于室溫條件下靜置15 min后將漿膜腔積液標(biāo)本靠近量筒液面下逐滴滴入，并且在黑色背景下觀察量筒中是否有白色霧狀沉淀生成以及沉淀物的下降速度[3]。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：如果漿膜腔積液滴入后肉眼可見(jiàn)濃厚的白色霧狀沉淀物并且其下沉速度較快，形成帶狀，則結(jié)果為李凡它試驗(yàn)陽(yáng)性，反之產(chǎn)生的白色霧狀沉淀物不明顯，緩慢下沉并在下沉過(guò)程中逐漸消失者為陰性[4]。

1.2.2 白細(xì)胞計(jì)數(shù) 為了驗(yàn)證黏蛋白陽(yáng)性的漿膜腔積液白細(xì)胞計(jì)數(shù)改良方法的實(shí)用性，本次研究首先依照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》要求對(duì)漿膜腔積液標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)白細(xì)胞計(jì)數(shù)，即：將充分混勻的漿膜腔積液標(biāo)本采用白細(xì)胞稀釋液或者是冰醋酸進(jìn)行稀釋后予以計(jì)數(shù)，具體稀釋的比例可參照實(shí)際細(xì)胞總量自行決定[5]。隨后將所得結(jié)果帶入到以下公式中進(jìn)行校正：白細(xì)胞校正數(shù)=漿膜腔積液標(biāo)本白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果-漿膜腔積液標(biāo)本紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果×外周血白細(xì)胞數(shù)÷外周血紅細(xì)胞數(shù)[6]。在常規(guī)方法計(jì)數(shù)完畢后采用改良法進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)，具體方法如下：采用蒸餾水替代白細(xì)胞稀釋液對(duì)李凡他試驗(yàn)陽(yáng)性的漿膜腔積液標(biāo)本進(jìn)行稀釋?zhuān)谟?jì)數(shù)前將濃度為2%的冰醋酸溶液吸入到毛細(xì)管中，隨即將其打出，促使毛細(xì)管內(nèi)壁完全沾有冰醋酸，之后將已經(jīng)稀釋好的漿膜腔積液標(biāo)本吸入毛細(xì)管，充池，靜置10 min待紅細(xì)胞充分溶解后按照規(guī)程要求進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)[7]。為了最大程度上避免誤差，取5次重復(fù)計(jì)數(shù)結(jié)果的均值作為最終白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果，質(zhì)量得分在B級(jí)以上時(shí)保留結(jié)果并采用變異百分?jǐn)?shù)評(píng)價(jià)法對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.3 觀察指標(biāo) 本研究選取的觀察指標(biāo)為白細(xì)胞計(jì)數(shù)的均值、標(biāo)準(zhǔn)差、離散度、白細(xì)胞結(jié)構(gòu)和形態(tài)、背景五項(xiàng)內(nèi)容。

2 結(jié) 果

改良法下112例黏蛋白陽(yáng)性的漿膜腔積液白細(xì)胞計(jì)數(shù)所得結(jié)果相較于常規(guī)方法更加準(zhǔn)確且更易于標(biāo)準(zhǔn)化，具體比對(duì)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 傳統(tǒng)方法與改良法方法結(jié)果比較

3 討 論

李凡它試驗(yàn)即為漿液黏蛋白定性實(shí)驗(yàn)，由于漿膜蛋白為多糖(polysaccharide)以及蛋白質(zhì)(protein)所組成的復(fù)合物，等電點(diǎn)PI 3～5，又被稱之為酸性糖蛋白(acidglycoprotein，AAG)[8]。當(dāng)漿膜腔積液標(biāo)本處于稀釋的醋酸溶液中將會(huì)產(chǎn)生大量的白色沉淀，通過(guò)該實(shí)驗(yàn)可以為臨床判定其具體為漏出液還是滲出液提供準(zhǔn)確的科學(xué)依據(jù)。在臨床實(shí)踐過(guò)程中證實(shí)，漿膜腔積液為漏出液時(shí)，其所包含的黏蛋白含量相對(duì)較少，李凡它試驗(yàn)結(jié)果多為陰性，而滲出液則與之相反，在大量黏蛋白參與下結(jié)果多為陽(yáng)性。此點(diǎn)對(duì)于疾病的臨床診斷尤為重要。然而，依據(jù)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》所開(kāi)展的臨床檢驗(yàn)工作中漿膜腔積液白細(xì)胞計(jì)數(shù)并不考慮李凡它試驗(yàn)陰性及陽(yáng)性所帶來(lái)的影響，僅僅關(guān)注該標(biāo)本是否為血性標(biāo)本。由于漿膜腔積液標(biāo)本中黏蛋白的客觀存在，使得白細(xì)胞計(jì)數(shù)受到較大干擾，所得結(jié)果與實(shí)際情況存在著較為明顯的偏差，給后續(xù)臨床診療方案取得的效果增添了不確定性。所以，改良黏蛋白陽(yáng)性的漿膜腔積液白細(xì)胞計(jì)數(shù)在當(dāng)前顯得尤為重要。

本次研究中改良法下112例黏蛋白陽(yáng)性的漿膜腔積液白細(xì)胞計(jì)數(shù)均值為155×106/L、標(biāo)準(zhǔn)差為5.7、離散度集中、白細(xì)胞結(jié)構(gòu)分明且清晰、背景清晰、分辨率清楚，而常規(guī)方法下黏蛋白陽(yáng)性的漿膜腔積液白細(xì)胞計(jì)數(shù)為125×106/L、標(biāo)準(zhǔn)差為8.5、離散度離散、白細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊且不清晰、背景模糊、干擾較多。結(jié)果表明改良法所得結(jié)果的準(zhǔn)確性及客觀性更高，更能夠滿足當(dāng)前臨床檢驗(yàn)工作需求。其原因在于李凡它試驗(yàn)陽(yáng)性的漿膜腔積液標(biāo)本中由于李凡它試劑中含有少量的冰醋酸，如果再次向標(biāo)本中滴入含有冰醋酸的白細(xì)胞稀釋液直接進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)，必然會(huì)因冰醋酸過(guò)多而使得白色霧狀沉淀更濃，最終導(dǎo)致其結(jié)果的準(zhǔn)確性大打折扣。而本次研究采取的改良法，則是采用適量的蒸餾水來(lái)替代白細(xì)胞稀釋液對(duì)漿膜腔積液標(biāo)本進(jìn)行稀釋?zhuān)越档屠罘菜囼?yàn)陽(yáng)性程度，即：從+++或者是++++程度降低至+[9]。換而言之，改良法的本質(zhì)在于確保白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確性的基礎(chǔ)上采用蒸餾水來(lái)降低李凡它試驗(yàn)陽(yáng)性程度，從而最大限度上降低漿膜腔積液標(biāo)本中黏蛋白對(duì)于整個(gè)白細(xì)胞計(jì)數(shù)工作帶來(lái)的不利影響，使得白細(xì)胞結(jié)構(gòu)及形態(tài)更加清晰，背景干凈[10]。而實(shí)踐證明此種方法無(wú)論是從理論上還是實(shí)踐應(yīng)用上均具備了較高的可行性。此外，相較于常規(guī)白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法，本次采用的改良法在標(biāo)準(zhǔn)化方面具有著十分明顯的優(yōu)勢(shì)，整個(gè)操作過(guò)程中無(wú)需使用特殊的溶液或者是試劑，蒸餾水的質(zhì)量管控已經(jīng)全面貫徹落實(shí)在了臨床檢驗(yàn)工作中，使得此種白細(xì)胞計(jì)數(shù)法推廣使用性大幅提升。

綜上所述，對(duì)于黏蛋白陽(yáng)性的漿膜腔積液，采用改良法進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)有助于降低黏蛋白帶來(lái)的干擾，使得結(jié)果更加符合客觀實(shí)際，繼而為臨床診療工作開(kāi)展提供準(zhǔn)確的科學(xué)依據(jù)，值得在今后臨床工作中推廣使用。

[1]唐玉鳳,魏永毅,陳紅,等.全自動(dòng)尿液有形成分分析儀檢測(cè)漿膜腔積液時(shí)出現(xiàn)“管型”信息的意義[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2016,13(8): 1093-1095.

[2]滕士階,周彥,徐承來(lái),等.體液細(xì)胞計(jì)數(shù)自動(dòng)化檢測(cè)影響因素的研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2016,37(9):1290-1292.

[3]袁晃堆,肖燕青.腫瘤標(biāo)志物及生化指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)在良惡性胸腹腔積液診斷中的作用[J].中外醫(yī)療,2014,33(32):26-27.

[4]葉小英,范春麗,陸敏,等.SYSMEXXN-1000血球儀在腦脊液和胸腹水白細(xì)胞計(jì)數(shù)中的可行性探討[J].海南醫(yī)學(xué),2016,27(6): 955-956.

[5]張金花,胡娟,李君安.SysmexXE-5000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀體液模式對(duì)胸、腹腔積液白細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類(lèi)計(jì)數(shù)的結(jié)果分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2015,36(1):45-46.

[6]郭翀,李軼勛,趙陽(yáng).XN-2000血細(xì)胞分析儀體液模式對(duì)腹腔積液和胸腔積液腫瘤細(xì)胞篩查作用的探討[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2015,36(15):2150-2151.

[7]Di Bonito P,Pacifico L,Chiesa C,et al.White blood cell count may identify abnormal cardiometabolic phenotype and preclinical organ damage in overweight/obese children[J].Nutr Metab Cardiovasc Dis,2016,26(6):502-509.

[8]李勤,嚴(yán)春潮.胸腹腔積液中有核細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類(lèi)兩種方法的比較——SysmexTX-4000i全自動(dòng)血液分析儀及光學(xué)顯微鏡手工法的比較[J].數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志,2014,27(1):14-16.

[9]管學(xué)平,陳鑫,耿波,等.全血白細(xì)胞計(jì)數(shù)危急值與臨床的關(guān)系[J].海南醫(yī)學(xué),2013,24(11):1639-1641.

[10]Hastings C,Gaynon PS,Nachman JB,et al.Increased post-induction intensification improves outcome in children and adolescents with a markedly elevated white blood cell count(≥200×109/L)with T cell acute lymphoblastic leukaemia but not B cell disease:a report from the C hildren's O ncology G roup[J].Br J Haematol,2015,168(4): 533-546.

R446.63

B

1003—6350（2017）03—0502—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.03.054

2016-08-09)

陸煒高。E-mail：luweig@126.com