HBsAg灰區(qū)在Maglumi4000化學(xué)發(fā)光分析儀上的建立

郭唯

(深州市醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 深州 053800)

HBsAg灰區(qū)在Maglumi4000化學(xué)發(fā)光分析儀上的建立

郭唯

(深州市醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 深州 053800)

灰區(qū)；低濃度HBsAg；化學(xué)發(fā)光；ELISA；膠體金；中和確證實(shí)驗(yàn)

目前檢測乙肝的方法主要有ELISA、膠體金和化學(xué)發(fā)光，化學(xué)發(fā)光與前兩種方法相比具有靈敏度高、樣本不需要稀釋、能定量等優(yōu)點(diǎn)，對于位于窗口期和隱性感染的人群能夠更好的檢出，因而定量檢測對于臨床輸血、流行病學(xué)研究、動態(tài)觀察和治療具有非常重要的意義。但是化學(xué)發(fā)光靈敏度的增高，檢測下線的降低[1]，使一些弱陽性標(biāo)本在定性的判讀上出現(xiàn)一些問題，而弱陽性結(jié)果給臨床的分析和解釋工作帶來了不便。確定實(shí)驗(yàn)室所使用化學(xué)發(fā)光儀器的灰區(qū)，并對灰區(qū)結(jié)果進(jìn)行正確解讀，成為必需。

本實(shí)驗(yàn)室通過ELISA、膠體金、中和確證實(shí)驗(yàn)對Maglumi4000測出的三組不同低濃度HBsAg進(jìn)行檢測比對，建立Maglumi4000化學(xué)發(fā)光儀在本實(shí)驗(yàn)室HBsAg的灰區(qū)，從而對臨床結(jié)果的解釋更具科學(xué)性，避免了醫(yī)療糾紛。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年1月至2015年6月我院使用Maglumi4000化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行乙肝定量檢測的低濃度HBsAg患者243例，其中標(biāo)本濃度1～10 index/ mL 72例，11～30 index/mL 108例，31～40 index/mL 63例。Maglumi4000化學(xué)發(fā)光儀乙肝HBsAg的正常值為0～1 index/mL。

1.2 試劑與儀器 深圳新產(chǎn)業(yè)Maglumi4000化學(xué)發(fā)光儀及配套試劑；深圳匯松MB-580酶標(biāo)儀；上海榮盛公司生產(chǎn)的ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒；廈門英科新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn)的膠體金乙型肝炎表面抗原測定試劑盒；珠海麗珠公司生產(chǎn)的HBsAg中和確證實(shí)驗(yàn)試劑盒。

1.3 方法 對化學(xué)發(fā)光三個(gè)濃度值內(nèi)的標(biāo)本分別用ELISA、膠體金和中和確證試劑進(jìn)行驗(yàn)證，操作嚴(yán)格按照說明書。ELISA法當(dāng)Cut off值為S/CO≥1時(shí)判為陽性，＜1時(shí)判為陰性，并參考本實(shí)驗(yàn)室SOP文件，實(shí)際0.8～1.2之間為可疑；膠體金法按說明書對照線和檢測線位置出現(xiàn)兩條紫紅色線為陽性，試紙只在對照線位置出現(xiàn)一條紫紅色為陰性；中和確證實(shí)驗(yàn)標(biāo)本與證實(shí)試劑反應(yīng)的COI標(biāo)本與對照試劑反應(yīng)的COI＜50%確認(rèn)陽性，標(biāo)本與證實(shí)試劑反應(yīng)的COI標(biāo)本與對照試劑反應(yīng)的COI＞50%確認(rèn)陰性，標(biāo)本與對照試劑反應(yīng)的COI＜1.0不確定(可疑)。三種實(shí)驗(yàn)結(jié)果以確證實(shí)驗(yàn)為準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

三組低濃度梯度標(biāo)本，隨濃度的增加，三種方法的陽性率逐漸上升。1～10 index/mL組，Maglumi4000假陽性率為93.2%(68/73），11～30 index/mL組，Maglumi4000陽性率為62%(67/108），31～40 index/mL組，Maglumi4000陽性率為95.2%(60/63），見表1。

表1 三組不同低濃度HBsAg標(biāo)本用ELISA、膠體金、中和確證實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果分布情況（例）

3 討論

本研究結(jié)果顯示，1～10 index/mL的低濃度組72例，ELISA和膠體金完全不能檢出，中和實(shí)驗(yàn)檢出1例陽性，可疑3例，且均集中在濃度接近于10 index/mL的地方，假陽性率高達(dá)93.2%，在這一區(qū)間國產(chǎn)Maglumi4000的陽性結(jié)果意義很小，同時(shí)也說明國產(chǎn)發(fā)光在這一區(qū)域內(nèi)的精確度存在問題。在11～30 index/mL這個(gè)濃度區(qū)間，ELISA與膠體金檢出比率很小，但確證實(shí)驗(yàn)卻高達(dá)67例陽性，陽性率為62%，說明這一區(qū)域Maglumi 4000測出的陽性標(biāo)本價(jià)值很高，化學(xué)發(fā)光的高靈敏度主要體現(xiàn)這一區(qū)域。31～40 index/mL濃度區(qū)的63例標(biāo)本，ELISA和膠體金與化學(xué)發(fā)光的符合率很高，陽性率為95.2%。以上實(shí)驗(yàn)中ELISA和膠體金陽性標(biāo)本均能夠被中和實(shí)驗(yàn)確證陽性。灰區(qū)設(shè)立的目的是找出ELISA和膠體金等方法無法測出的真陽性標(biāo)本占大多數(shù)的區(qū)間，11～30 index/mL范圍正好符合上面要求。通過控制灰區(qū)范圍內(nèi)的標(biāo)本，達(dá)到控制臨界陽性標(biāo)本的目的[2]，通過以上檢測分析，建立起我室HBSAg在Maglumi4000上的灰區(qū)為11～30 index/mL。

我國是乙肝的高發(fā)區(qū)，低濃度乙肝的檢測一直是乙肝檢測的一個(gè)熱點(diǎn)。近年來化學(xué)發(fā)光定量檢測乙肝使得檢出下限大大降低，但高靈敏度的同時(shí)也帶來了另一個(gè)問題，怎樣確定化學(xué)發(fā)光的灰區(qū)，以排除定量低濃度陽性樣本中的假陽性，并對真陽性低濃度人群進(jìn)行臨床合理解釋。在國外ELISA試劑通常定義一段“灰區(qū)”的檢測范圍，結(jié)果報(bào)告可疑，而國內(nèi)無論是ELISA、膠體金，還是發(fā)光試劑的廠家，都沒有對HBsAg的灰區(qū)進(jìn)行設(shè)定[3]。隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，國內(nèi)一些實(shí)驗(yàn)室開始嘗試建立自己實(shí)驗(yàn)室的灰區(qū)。

本實(shí)驗(yàn)室通過幾種方法的聯(lián)合檢測，基本確定了Maglumi4000檢測灰區(qū)，并在檢驗(yàn)中對這一區(qū)域內(nèi)的標(biāo)本進(jìn)行嚴(yán)格登記、解釋，建議患者定期復(fù)查乙肝和肝功，以觀察HBsAg的轉(zhuǎn)歸。事實(shí)證明這一區(qū)域內(nèi)的真陽性患者，一部分慢慢成為真正的乙肝患者，一部分病毒清除，產(chǎn)生了抗體，灰區(qū)的設(shè)立有效提高了弱反應(yīng)標(biāo)本檢測中的臨床價(jià)值[4]。

Maglumi4000灰區(qū)設(shè)置的原因，緣于定量實(shí)驗(yàn)對結(jié)果進(jìn)行定性解釋時(shí)所遇到的問題，事實(shí)上從量變到質(zhì)變不是一個(gè)實(shí)驗(yàn)給出的一個(gè)數(shù)字就能決定的，在乙肝表面抗原的判定上到現(xiàn)在還沒有一個(gè)統(tǒng)一的醫(yī)學(xué)決定水平。

[1]吳子安,徐寧,邱智詠,等.乙肝表面抗原ELISA試劑盒檢測灰區(qū)的探討[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2013,29(10):1679-1682.

[2]吳偉健,郭如華.ELISA試驗(yàn)灰區(qū)設(shè)置方法的探討[J].中國生物制品學(xué)雜志,2008,21(10):911.

[3]陳霞,黃麗,姜標(biāo).ELISA法檢測HBsAg灰區(qū)設(shè)置的探討[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2011,13(1):63-64.

[4]姚家奎,丁德坤,張素華,等.EIecsysHBsAg確證試驗(yàn)在灰區(qū)及弱反應(yīng)性標(biāo)本檢測中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,28(6): 106-109.

R446.6

B

1003—6350（2017）03—0504—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.03.055

2015-12-21)

郭唯。E-mail：2636904142@qq.com