流式細胞術(shù)檢測多發(fā)性骨髓瘤患者免疫表型的意義

鄧銀芬，袁紅建，孫善芳

（泰州市第二人民醫(yī)院血液科，江蘇 泰州 225500）

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2014年9月～2016年3月收治的多發(fā)性骨髓瘤患者40例作為本研究觀察組，其中男性26例，女性14例，年齡57～87歲，平均年齡（69±9）歲，經(jīng)臨床診斷與張之南等主編的《血液病診斷及療效標準》相符。血清免疫固定電泳檢查結(jié)果：40例患者中IgG型20例，IgA型14例，IgD型4例，輕鏈型2例。按照Durie-Salmon分期診斷標準：IA組2例，IIA組5例，IIB組4例，IIIA組23例，IIIB組6例。按照ISS分期診斷標準：I期8例，II期13例，III期19例。

1.2 方 法

1.2.1 試劑與儀器

流式細胞儀采用美國BD公司提供的FACScantoⅡ多參數(shù)流式細胞儀，鼠抗人單克隆抗體CD19、CD56、CD117、CD38、CD138、CD13、CD33、CD20、CD34以及紅細胞裂解液均由BD公司生產(chǎn)。

1.2.2 治療過程

所有MM患者入院后均給予對癥支持治療，并采用多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測其免疫表型。所有患者給予硼替佐米或沙利度胺為基礎(chǔ)的化療方案，并對患者進行隨訪，化療4療程后評估療效。

1.2.3 多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測

無菌操作下對患者進行骨髓穿刺，抽取骨髓液2 mL并給予肝素抗凝，將抗凝后的肝素用PBS制成5-10×106/mL的單細胞懸液。將各裝有20μL鼠抗人單克隆抗體CD19、CD56、CD117、CD38、CD138、CD13、CD33、CD20、CD34的流式管中加入100 μL骨髓單細胞懸液常溫孵育20 min，孵育時需進行避光處理。而后加入氯化銨溶血劑混勻并靜置，室溫避光靜置15 min后將呈透亮的液體離心10 min，轉(zhuǎn)速為1500 r/min。去除上清后加入PBS重懸，完成后上流式細胞儀檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

本研究中所有資料均采用IBM公司SPSS 17.0專業(yè)統(tǒng)計分析軟件進行分析，計數(shù)資料以例數(shù)（n）、百分數(shù)（%）表示，采用x2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 MM患者瘤細胞表面抗原表達情況

采用流式細胞術(shù)對40例MM患者進行免疫表型分析，其中40例（40/40，100%）CD38+患者、38例（38/40，95%）患者、29例（29/40，72.5%）患者5例（5/40，12.5%）患者3例（3/40，7.5%）、患者2例（2/40，5%）、患者9例（9/40，22.5%）。

2.2 MM患者不同分期的免疫表型特點

具體見表1。

表1 不同ISS分期患者免疫表型特點

2.3 MM患者免疫表型CD56、CD117、CD28與療效反應(yīng)的關(guān)系

結(jié)束4個療程的連續(xù)治療后，需要對患者PR以上的療效反應(yīng)率進行科學(xué)的評估，各指標和療效反應(yīng)關(guān)系之間的比較主要利用的是x2檢驗。結(jié)果顯示，CD56陽性的29例患者中26例達PR以上療效，CD56陰性的11例患者中4例達到PR以上療效，CD56陽性患者的療效明顯優(yōu)于CD56陰性患者（P＜0.05）；CD117陽性的3例患者中1例達到PR以上療

多發(fā)性骨髓瘤（MM）是一種高度異質(zhì)性的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，以骨髓內(nèi)單克隆惡性漿細胞增生伴多克隆免疫球蛋白或輕鏈增多為特征，約占血液系統(tǒng)惡性腫瘤的10%[2]。近年來由于新藥的出現(xiàn)和治療方案的改進，MM患者的平均生存期得以延長，但仍有部分患者對治療的反應(yīng)不理想，所以對患者進行準確的預(yù)后判斷，根據(jù)預(yù)后分組采取個體化治療尤為重要。近年來，在診斷和預(yù)后評估血液系統(tǒng)惡性腫瘤的過程中，多參數(shù)流式細胞免術(shù)的疫表型分析的應(yīng)用越來越廣泛，但此類研究報道較少，且尚需臨床數(shù)據(jù)加以驗證，本文通過多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測多發(fā)性骨髓瘤患者的免疫表型，在此基礎(chǔ)上深入研究和分析了這些患者骨髓瘤細胞免疫表型表達率、與臨床分期、對化療反應(yīng)和預(yù)后之間的關(guān)系，旨在為MM患者的預(yù)后評估及個體化治療提供參考，現(xiàn)將研究情況匯報如下。效，CD117陰性的37例患者有29例達到PR以上療效，CD117陰性患者的療效明顯優(yōu)于CD117陽性患者（P＜0.05）；CD28陽性的9例患者中4例達到PR以上療效，CD28陰性的31例患者中16例達到PR以上療效，CD28陽性和CD28陰性患者的療效反應(yīng)無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

3 討 論

多發(fā)性骨髓瘤是B細胞起源的漿細胞惡性克隆性增生性疾病，發(fā)病人群以中老年患者為主，其臨床表現(xiàn)及預(yù)后具有高度異質(zhì)性。流式細胞術(shù)是一種常規(guī)的MM診斷技術(shù)，能夠?qū)⒛[瘤性漿細胞的免疫表型特征進行準確的鑒別，在此基礎(chǔ)上可以將骨髓瘤細胞免疫表型的異質(zhì)性揭示出來。不同的免疫表型特征和患者預(yù)后是否有直接關(guān)系，是當下研究骨髓瘤免疫表型的熱門話題，本身所存在的爭議比較多。本文對我院的40例MM患者進行了流式細胞檢測，通過對不同分期患者免疫表型特點的科學(xué)分析，希望可以對免疫表型與不同分期及療效的相關(guān)性進行充分的了解。

CD56是一種介導(dǎo)血細胞粘附的粘附分子，屬于免疫球蛋白超家族，在骨髓瘤細胞與其基質(zhì)的相互作用中有重要意義，有研究表明CD56與MM的病情發(fā)展程度具有相關(guān)性[4-5]。Chang等學(xué)者研究證實接受常規(guī)化療的CD56-患者較CD56+患者預(yù)后差，但接受大劑量化療和自體骨髓移植的患者預(yù)后與CD56的表達與否相關(guān)性仍未明確，且CD56+與CD56-MM患者在總生存期及無進展生存期上無顯著差異[6]。我們的研究中MM患者的CD56表達陽性率達75.5%，在不同分期中CD56陽性表達率無統(tǒng)計學(xué)差異，CD56陽性患者的療效明顯優(yōu)于CD56陰性患者（P＜0.05），提示CD56陰性的患者可能預(yù)后較CD56陽性患者差。CD117是一種能有效介導(dǎo)絡(luò)氨酸酶抑制劑抑制作用的跨膜蛋白受體，由c-kit原癌基因編碼，是一種與腫瘤密切相關(guān)的標志性分子，某些研究表明，CD117可能是預(yù)后較差風險類別的代表[7]，或者CD117+MM患者預(yù)后良好[8]。研究結(jié)果的差異可能與樣本量以及治療的異質(zhì)性有關(guān)。我們的研究表明，CD117+患者常見于更嚴重的臨床分期，常有腫瘤高負荷表現(xiàn)，對化療敏感性較差，提示可能預(yù)后較差，但我們的樣本量較少，還有待于臨床累積病例數(shù)進一步驗證。CD28作為T淋巴細胞的一種表達抗原，也是T細胞在活化過程中所產(chǎn)生的重要抗原之一。CD28在正常的漿細胞中不表達，其過表達與疾病進展和復(fù)發(fā)有關(guān)[9]。研究發(fā)現(xiàn)，骨髓瘤細胞的高增殖性、腫瘤的侵襲性和治療的失敗在一定程度上決定了CD28的表達，并且與MM的非二倍體也有很多關(guān)系，這也是預(yù)后差的指標之一[10-11]。我們的研究表明，CD28+患者更常見有腎功能損害、多發(fā)骨質(zhì)破壞，但CD28+患者及CD28-患者對化療的有效率無明顯統(tǒng)計學(xué)差異?？傊诙喟l(fā)性骨髓瘤的診斷中多參數(shù)流式細胞術(shù)獲得較為廣泛的應(yīng)用，正常與異常漿細胞金額圖通過過檢測免疫表型的差異來區(qū)分，評價瘤細胞表面異?？乖磉_率與臨床特征的關(guān)系，為MM的診斷、鑒別診斷、病情的評估、預(yù)后的判斷等提供了更多的參考依據(jù)。而我們的研究病例數(shù)尚少，尚有待于臨床累積更多的數(shù)據(jù)來驗證結(jié)果。

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