• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    延髓頭端腹外側(cè)部在腦梗死合并心律失常中的作用

    2017-02-28 09:33:01賈淑偉王玲焦?jié)櫳?/span>
    中國醫(yī)藥導(dǎo)報 2016年31期
    關(guān)鍵詞:心律失常谷氨酸腦梗死

    賈淑偉+王玲+焦?jié)櫳?/p>

    [摘要] 目的 探討延髓頭端腹外側(cè)部在腦梗死合并心律失常中的作用及可能機制。 方法 112只Wistar大鼠隨機分為3組:對照組(n=16)、假手術(shù)組(n=16)和模型組(n=80)。模型組再隨機分為造模后30 min、1 h、2 h、4 h 和8 h組,每組16只,觀察腦梗死后延髓頭端腹外側(cè)部神經(jīng)元活動的變化。另40只大鼠隨機分為5組:對照組(n=8)、生理鹽水組(10 μL,n=8)、L-谷氨酸組(0.5 μmol,10 μL,n=8)、谷氨酸非選擇性NMDA受體拮抗劑MK-801(4 nmol,10 μL)加L-谷氨酸組(n=8)和MK-801加模型組(n=8),以觀察谷氨酸在腦梗死誘發(fā)心律失常中的作用。心電圖用生物信號采集系統(tǒng)采集。腦梗死動物模型制作采用大鼠大腦中動脈栓塞(MCAO),給藥途徑為側(cè)腦室注射,以Fos蛋白作為神經(jīng)元激活的標(biāo)志物。 結(jié)果 對照組和假手術(shù)組大鼠心電圖均無明顯異常,模型組大鼠心律失常的發(fā)生率為78.75%(63/80),明顯高于對照組(P < 0.01),且在心律失常發(fā)生的相應(yīng)時間點延髓頭端腹外側(cè)部Fos蛋白表達(dá)明顯增加(P < 0.01)。側(cè)腦室注射生理鹽水組心電圖無明顯異常,側(cè)腦室注射L-谷氨酸后心律失常發(fā)生率為87.5%(7/8),明顯高于生理鹽水組(P < 0.01),心律失常類型類似于模型組,同時延髓頭端腹外側(cè)部Fos蛋白表達(dá)明顯增高(P < 0.05)。MK-801預(yù)處理后再造模和MK-801預(yù)處理后再側(cè)腦室注射L-谷氨酸組,均無心律失常發(fā)生,延髓頭端腹外側(cè)部Fos蛋白表達(dá)無顯著性變化(P > 0.05)。 結(jié)論 腦梗死合并心律失常的發(fā)生與延髓頭端腹外側(cè)部活動增強有關(guān),且此作用由谷氨酸激活NMDA受體介導(dǎo)。

    [關(guān)鍵詞] 延髓頭端腹外側(cè)部;腦梗死;心律失常;谷氨酸;NMDA受體

    [中圖分類號] R338 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721(2016)11(a)-0011-05

    腦梗死合并心律失常是腦梗死猝死的主要原因之一[1]。大量研究表明,腦自主神經(jīng)功能失衡,特別是交感神經(jīng)過度激活可致心律失常的發(fā)生[2]。合并心律失常的腦梗死患者存在著交感和副交感神經(jīng)活動失衡[3-4],但特異性的心電圖異常與局部顱內(nèi)病變之間的對應(yīng)關(guān)系尚未建立。延髓頭端腹外側(cè)部(rostral ventrolateral medulla,RVLM)是腦內(nèi)控制自主神經(jīng)功能和心血管活動的關(guān)鍵腦區(qū),本研究觀察了RVLM活動變化在腦梗死合并心律失常中的作用及可能機制,以期為臨床治療提供理論依據(jù),并豐富心血管功能活動調(diào)節(jié)的中樞機制。

    1 資料與方法

    1.1 實驗動物

    健康雄性Wistar大鼠,體重(230±20)g,由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實驗動物學(xué)部提供,實驗動物生產(chǎn)許可證號:SCXK(黑)2013-001,實驗動物使用許可證號:SYXK(黑)2013-002。

    1.2 藥物與試劑

    c-Fos多克隆抗體(sc-52,Santa Cruz)、AP標(biāo)記的山羊抗兔二抗(zb-2308)和AP標(biāo)記的馬抗小鼠二抗(zd-2310)均購自中杉金橋公司。GAPDH單克隆抗體(小鼠)購自碧云天生物技術(shù)研究所。TTC購自中國醫(yī)藥上?;瘜W(xué)試劑公司。

    1.3 儀器

    大鼠腦立體定位儀SN-3,日本Narishige;顯微圖像采集系統(tǒng),日本Olympus;石蠟切片機RM2016,德國徠卡;凝膠成像系統(tǒng),美國Alpha;RM6240B生物信號采集系統(tǒng),中國成都泰盟。

    1.4 實驗分組

    所有大鼠監(jiān)測心電20 min,心電圖正常者用于實驗。為了觀察腦梗死后RVLM神經(jīng)元活動的變化,112只大鼠隨機分為3組:對照組(n=16)、假手術(shù)組(n=16)和模型組(n=80)。模型組再隨機分為造模后30 min、1 h、2 h、4 h和8 h組,每組16只。對照組和假手術(shù)組大鼠在麻醉后或假手術(shù)操作后2 h取材,模型組大鼠在造模后相應(yīng)的時間點取材。用免疫組織化學(xué)技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測每只大鼠右側(cè)腦(缺血側(cè))RVLM腦區(qū)Fos蛋白的表達(dá)。為了觀察谷氨酸在腦梗死誘發(fā)心律失常中的作用,40只大鼠隨機分為5組,每組8只:對照組、生理鹽水組(10 μL)、L-谷氨酸組(0.5 μmol,10 μL)、MK-801(4 nmol,10 μL)后20 min再L-谷氨酸組和MK-801(4 nmol,10 μL)后20 min再造模組。所有大鼠在側(cè)腦室注射后或術(shù)后30 min取材。用Western blot技術(shù)檢測每只大鼠右側(cè)腦RVLM腦區(qū)Fos蛋白表達(dá)。

    1.5 腦缺血動物模型制備

    水合氯醛(350 mg/kg)腹腔注射麻醉。栓線經(jīng)頸總動脈、頸內(nèi)動脈插入大腦中動脈,進(jìn)線長度距頸總動脈分叉(17.5 ± 0.5)mm[5]。假手術(shù)組栓線到大腦中動脈起始處后立即撤回,其余操作與模型組相同。

    1.6 模型鑒定

    神經(jīng)功能學(xué)評分大于2分且TTC染色梗死區(qū)明顯者計入模型組。

    1.6.1 神經(jīng)功能學(xué)評分 神經(jīng)功能學(xué)評分值為0~4分,其中,沒有神經(jīng)功能缺陷計0分;前肢屈曲計1分;對側(cè)前肢輕度抓爪計2分;讓大鼠自由活動,拉其尾巴后大鼠向輕癱側(cè)繞圈行走計3分;如果大鼠未受任何刺激自發(fā)向輕癱側(cè)繞圈行走計4分[6-8]。

    1.6.2 TTC染色 將大鼠腦做2 mm厚的連續(xù)冠狀切片,置于2%的2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)生理鹽水溶液中,37℃孵育15 min。紅色染色區(qū)為正常腦組織,白色未染色區(qū)為梗死區(qū)。

    1.7 免疫組化檢測

    大鼠灌注固定后將含RVLM的腦組織塊石蠟包埋,冠狀切片(5 μm),水化,修復(fù)抗原,10% H2O2滅活內(nèi)源性過氧化物后5% BSA封閉,兔來源的Fos抗體(1∶200)4℃孵育過夜,PBS洗3次,二抗(1∶500)37℃孵育30 min,DAB避光染色5 min,水沖,蘇木精染色30 s,水沖,再次脫水、透明,中性樹膠封片,顯微鏡下觀察計數(shù)。Fos表達(dá)陽性神經(jīng)元的核呈黃棕色染色,在高倍鏡(400×)下分別計數(shù)5個區(qū)域陽性神經(jīng)元數(shù),然后取平均值。

    1.8 Western blot檢測

    腦組織加入組織裂解液(RIPA∶PMSF為100∶1)研磨,4℃ 1000 r/min離心15 min得到勻漿液,取上清,BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,上樣,10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后將蛋白轉(zhuǎn)到聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride,PVDF)膜上,3%牛血清白蛋白37℃封閉1 h,TBST洗膜,孵一抗(1∶500)4℃過夜,TBST洗膜,孵二抗(1∶1000)37℃ 1 h,TBST洗膜,BCIP/NBT顯色。內(nèi)參為甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)。結(jié)果用Alphaview 3.1.1.0軟件分析。

    1.9 統(tǒng)計學(xué)方法

    采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,兩組間比較采用t檢驗;多組間比較采用單因素方差分析;以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 MCAO大鼠心電圖變化

    對照組和假手術(shù)組大鼠無心律失常發(fā)生,模型組大鼠心律失常的發(fā)生率高達(dá)78.75%(63/80),明顯高于對照組(P < 0.01),與臨床報道一致[1],但心律失常的發(fā)生率偏高,可能與實驗動物模型腦缺血程度相對均一,而腦梗死患者的損傷程度不可能均一有關(guān)。MCAO后大鼠會出現(xiàn)2次心律失常,分別在MCAO后(15.63±1.58)min,持續(xù)(31.02±1.85)min;(238.36±14.32)min,持續(xù)(26.28±1.36)min。心律失常類型主要是室性期前收縮(室性二聯(lián)律)和室性快速性心律失常。側(cè)腦室注射生理鹽水組心電圖無明顯異常,側(cè)腦室注射L-谷氨酸后心律失常發(fā)生率為87.5%(7/8),明顯高于生理鹽水組(P < 0.01),心律失常類型類似于模型組大鼠。側(cè)腦室注射谷氨酸非選擇性NMDA受體拮抗劑MK-801后的20 min內(nèi)未見心律失常的發(fā)生,20 min后行MCAO和20 min后側(cè)腦室注射L-谷氨酸都未見心律失常的發(fā)生,提示腦梗死能誘發(fā)心律失常,且與谷氨酸作用于NMDA受體的有關(guān)。

    2.2 MCAO后RVLM內(nèi)Fos蛋白表達(dá)免疫組化結(jié)果

    筆者先期進(jìn)行室旁核[8]研究時,分別觀察了MCAO后15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h和16 h室旁核活動的改變與心律失常發(fā)生的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)對照組和假手術(shù)組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0.05);室旁核的活動從15 min開始增強,持續(xù)到30 min時達(dá)峰值,認(rèn)為30 min的增強是15 min的延續(xù);16 h后室旁核的活動改變差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0.05)。故本研究只觀察了MCAO后30 min、1 h、2 h、4 h和8 h RVLM活動的改變,發(fā)現(xiàn)在對照組,RVLM內(nèi)只可見極少量淡染的陽性神經(jīng)元;在模型組,RVLM內(nèi)陽性神經(jīng)元數(shù)量明顯增加且染色加深,與對照組比較,MCAO后30 min和4 h RVLM內(nèi)神經(jīng)元Fos陽性表達(dá)的增加,且差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01)。見圖2(封四)。

    2.3 MCAO后RVLM內(nèi)Fos蛋白表達(dá)Western blot結(jié)果

    與對照組比較,MCAO后RVLM神經(jīng)元Fos蛋白表達(dá)在30 min和4 h明顯增加(P < 0.01)(圖3),與免疫組化結(jié)果一致,表明MCAO后RVLM神經(jīng)元被激活了兩次,分別在30 min和4 h左右,與MCAO后心律失常發(fā)生時間點相對應(yīng),說明MCAO后心律失常的發(fā)生與RVLM激活有關(guān)。

    2.4 RVLM內(nèi)Fos蛋白表達(dá)的谷氨酸能機制

    與對照組比較,側(cè)腦室注射生理鹽水后RVLM內(nèi)Fos蛋白表達(dá)無明顯變化(P > 0.05),側(cè)腦室注射L-谷氨酸后RVLM內(nèi)Fos蛋白的表達(dá)明顯增加(P < 0.05),側(cè)腦室注射MK-801可阻斷側(cè)腦室注射L-谷氨酸(P > 0.05)和MCAO(P > 0.05)引起的Fos蛋白表達(dá)的增加(圖4)。提示腦梗死后RVLM的激活由腦內(nèi)高水平的谷氨酸作用于NMDA受體所介導(dǎo)。

    A:對照、側(cè)腦室注射生理鹽水(10 μL)、側(cè)腦室注射L-谷氨酸(0.5 μmol,10 μL)以及MK-801(4 nmol,10 μL)預(yù)處理后給予谷氨酸和MCAO后RVLM內(nèi)Fos蛋白表達(dá)的Western blot條帶;B:上述不同條件下RVLM內(nèi)Fos蛋白表達(dá)變化的統(tǒng)計圖,與對照組比較,*P < 0.05

    和MCAO后RVLM內(nèi)Fos蛋白表達(dá)的Western blot結(jié)果

    3 討論

    腦梗死早期合并心律失?;颊撸鸩〖?,變化快,不能用腦疝來解釋[9],許多合并心律失常的腦梗死患者并無原發(fā)心臟病史[10],提示腦梗死合并心律失常的發(fā)生源于中樞神經(jīng)系統(tǒng)。腦自主神經(jīng)功能失衡,特別是交感神經(jīng)過度激活可誘導(dǎo)致命性心律失常的發(fā)生[2],而且合并心律失常的腦梗死患者確實存在交感和副交感神經(jīng)活動失衡[3]。有研究發(fā)現(xiàn),電或化學(xué)刺激RVLM,可使交感神經(jīng)興奮性增加,心率加快,血壓上升和誘發(fā)心電異常,而損毀兩側(cè)RVLM,可使交感神經(jīng)興奮性降低和交感節(jié)律消失,血壓降到神經(jīng)節(jié)阻斷和脊椎動物水平[11-12],可見RVLM是脊髓以上中樞調(diào)控交感神經(jīng)輸出的重要通路,是中樞調(diào)控心血管活動的重要腦區(qū)之一,且可因其活動增強使交感神經(jīng)過度激活而誘發(fā)心電異常。本研究發(fā)現(xiàn)MCAO后,78.75%出現(xiàn)心律失常的大鼠RVLM活動增強,提示腦梗死后心律失常的發(fā)生與RVLM活動增強導(dǎo)致的交感神神經(jīng)過度興奮有關(guān)。

    RVLM內(nèi)可見谷氨酸免疫陽性結(jié)構(gòu)[13-15],刺激RVLM組織切片上的多數(shù)交感節(jié)前神經(jīng)元所產(chǎn)生的快興奮性突觸后電位可被谷氨酸受體阻斷藥消除[16],RVLM內(nèi)微量注射谷氨酸能引起血壓升高和心率加快,刺激丘腦下部所引起的心血管效應(yīng),能被RVLM內(nèi)注射谷氨酸受體阻斷藥阻斷[17]。形態(tài)學(xué)證實,RVLM內(nèi)既存在內(nèi)源性谷氨酸能神經(jīng)元,也存在外源性的谷氨酸能神經(jīng)傳入。前者可投射到脊髓中間外側(cè)柱的交感節(jié)前神經(jīng)元,興奮交感神經(jīng)[18],是延髓到交感節(jié)前神經(jīng)元的所有興奮性傳出的關(guān)鍵部位;后者可能來自孤束核、室旁核(paraventricular nucleus,PVN)等中樞核團(tuán)的纖維投射,這些投射到RVLM的谷氨酸能神經(jīng)元可通過NMDA受體介導(dǎo)交感緊張性興奮[19]。本研究發(fā)現(xiàn),側(cè)腦室注射L-谷氨酸后,RVLM被激活,此激活可被NMDA受體拮抗劑MK-801阻斷,且MK-801也能阻斷MCAO后RVLM的激活。這些結(jié)果提示腦梗死后腦內(nèi)異常增高的谷氨酸可能通過作用于NMDA受體使RVLM激活,進(jìn)而激活脊髓中間外側(cè)柱交感節(jié)前神經(jīng)元,使交感神經(jīng)輸出增加,誘發(fā)心律失常。解剖學(xué)研究發(fā)現(xiàn),貓的PVN存在向RVLM的纖維投射,電刺激PVN細(xì)胞可順行激活RVLM,損毀雙側(cè)RVLM幾乎去除電刺激PVN引起的增壓反應(yīng),表明RVLM介導(dǎo)PVN的增壓反應(yīng),RVLM神經(jīng)元是PVN下行交感興奮通路的一部分,構(gòu)成的PVN-RVLM-脊髓通路在交感神經(jīng)系統(tǒng)和心血管活動的調(diào)節(jié)中起著重要作用[14-15]。Yang等[20]研究發(fā)現(xiàn),刺激PVN可使心率增加、腎交感神經(jīng)興奮,RVLM內(nèi)注射谷氨酸也能使心率增加、腎交感神經(jīng)興奮,若是在刺激PVN的同時給予谷氨酸受體拮抗劑犬尿烯酸,上述現(xiàn)象不再出現(xiàn)。說明從PVN到RVLM的突觸中谷氨酸是作為興奮性神經(jīng)遞質(zhì)而起作用。筆者前期研究發(fā)現(xiàn),MCAO后PVN活動增高[8],提示腦梗死后RVLM活動的增強也可能是腦內(nèi)高濃度的谷氨酸使PVN活動增強的結(jié)果,進(jìn)而使交感神經(jīng)的輸出增加,誘發(fā)心律失常。

    總之,腦梗死合并心律失常的發(fā)生與腦梗死后RVLM活動增強有關(guān),且此作用由谷氨酸激活NMDA受體所介導(dǎo)。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1] Wira CR,Rivers E,Martinez-Capolino C,et al. Cardiac complications in acute ischemic stroke [J]. West J Emerg Med,2011,12(4):414-420.

    [2] S?觟r?觟s P,Hachinski V. Cardiovascular and neurological causes of sudden death after ischaemic stroke [J]. Lancet Neurol,2012,11(2):179-188.

    [3] Colivicchi F,Bassi A,Santini M,et al. Prognostic implications of right-sided insular damage,cardiac autonomic derangement and arrhythmias after acute ischemic stroke [J]. Stroke. 2005,36(8):1710-1715.

    [4] Chen CF,Lin HF,Lin RT,et al. Relationship between ischemic stroke location and autonomic cardiac function [J]. J Clin Neurosci,2013,20(3):406-409.

    [5] 賈淑偉,夏青.線栓法建立局灶性腦缺血模型的方法與探討[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2014,11(24):33-35.

    [6] Sun L,Ai J,Wang N,et al. Cerebral Ischemia Elicits Aberration in Myocardium Contractile Function and Intracellular Calcium Handling [J]. Cell Physiol Biochem,2010, 26(3):421-430.

    [7] Ji H,Wang L,Bi H,et al. Mechanisms of lumbrokinase in protection of cerebral ischemia [J]. Eur J Pharmacol,2008, 590(1-3):281-289.

    [8] Jia SW,Xia Q,Zhang BP,et al. Involvement of the paraventricular nucleus in the occurrence of arrhythmias in middle cerebral artery occlusion rats [J]. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases,2015,24(4):844-851.

    [9] 楊賢義,劉梅,朱艷霞,等.急診室成功搶救腦心綜合征致猝死11例分析[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2012, 10(1):123-124.

    [10] Dogan A,Tunc E,Ozturk M,et al. Electrocardiographic changes in patients with ischaemic stroke and their prognostic importance [J]. Int J Clin Pract,2004,58(5):436-440.

    [11] 周蘇婭,朱一平,高峰,等.腓深神經(jīng)對最后區(qū)心血管中樞活動的調(diào)節(jié)作用[J].中國應(yīng)用生理學(xué)雜志,2003,19(1):27-29.

    [12] 陳志雄,張榮寶.延髓頭端腹外側(cè)區(qū)不同核團(tuán)對心血管活動的影響[J].浙江醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,1992,21(3):97-101.

    [13] Kang YM,Gao F,Li HH,et al. NF-κB in the paraventricular nucleus modulates neurotransmitters and contributes to sympathoexcitation in heart failure [J]. Basic Res Cardiol,2011,106(6):1087-1097.

    [14] Li YF,Jackson KL,Stern JE,et al. Interaction between glutamate and GABA systems in the integration of sympathetic outflow by the paraventricular nucleus of the hypothalamus [J]. Am J Physiol Heart Circ Physiol,2006, 291(6):H2847-2856.

    [15] Biancardi VC,Campos RR,Stern JE. Altered balance of gamma-aminobutyric acidergic and glutamatergic afferent inputs in rostral ventrolateral medulla-projecting neurons in the paraventricular nucleus of the hypothalamus of renovascular hypertensive rats [J]. J Comp Neurol,2010,518(5):567-585.

    [16] 范偉.延髓腹外側(cè)區(qū)的有關(guān)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)在調(diào)節(jié)心血管活動中的作用[J].生理科學(xué)進(jìn)展,1991,82(4):329-332.

    [17] 魯彥,李斌,蔡紅艷,等.尾端延髓腹外側(cè)區(qū)硫化氫的血壓和心率調(diào)節(jié)效應(yīng)與ATP敏感性鉀通道開放和谷氨酸受體激動有關(guān)[J].中華高血壓雜志,2014,22(5):463-467.

    [18] Caverson MM,Ciriello J,Calaresu FR. Direct pathway from cardiovascular neurons in the ventrolateral medulla to the region of the intermediolateral nucleus of the upper thoracic cord: an anatomical and electrophysiological investigation in the cat [J]. J Auton Nerv Syst,1983,9(2-3):451-475.

    [19] 肖振祥,王偉忠,施善芬,等.大鼠頭端延髓腹外側(cè)區(qū)NMDA受體在動脈壓力感受器反射中的作用[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2000,21(8):739-741.

    [20] Yang Z,Bertram D,Coote JH. The role of glutamate and vasopressin in the excitation of RVL neurones by paraventricular neurones [J]. Brain Res,2001,908(1):99-103.

    (收稿日期:2016-06-13 本文編輯:程 銘)

    猜你喜歡
    心律失常谷氨酸腦梗死
    64排CT在腦梗死早期診斷中的應(yīng)用及影像學(xué)特征分析
    基于正交設(shè)計的谷氨酸發(fā)酵條件優(yōu)化
    N-月桂?;劝彼猁}性能的pH依賴性
    問:如何鑒定谷氨酸能神經(jīng)元
    參松養(yǎng)心膠囊治療心律失常的研究分析
    中西醫(yī)結(jié)合治療冠心病心律失常療效觀察
    今日健康(2016年12期)2016-11-17 19:31:51
    曲美他嗪治療急性心肌炎心律失常和心功能療效研究
    今日健康(2016年12期)2016-11-17 12:26:26
    β受體阻滯劑治療心律失常的效果分析
    氧自由基和谷氨酸在致熱原性發(fā)熱機制中的作用與退熱展望
    脈血康膠囊治療老年恢復(fù)期腦梗死30例
    国产欧美日韩综合在线一区二区 | 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 秋霞伦理黄片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 精品久久久噜噜| 国产亚洲91精品色在线| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| av卡一久久| 亚洲电影在线观看av| 久久久欧美国产精品| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 男女边摸边吃奶| 久久毛片免费看一区二区三区| 成人无遮挡网站| 美女主播在线视频| 男女国产视频网站| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 精品午夜福利在线看| 色94色欧美一区二区| 18禁动态无遮挡网站| 97在线视频观看| 少妇高潮的动态图| 亚洲精品国产av成人精品| 99热网站在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产精品女同一区二区软件| 在线观看免费日韩欧美大片 | 久久久久网色| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲电影在线观看av| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 51国产日韩欧美| 亚洲精品色激情综合| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 少妇精品久久久久久久| 日韩亚洲欧美综合| 日韩av免费高清视频| 高清黄色对白视频在线免费看 | 中文天堂在线官网| 中文字幕久久专区| 免费高清在线观看视频在线观看| a级片在线免费高清观看视频| 国产精品蜜桃在线观看| 成人二区视频| 一级毛片aaaaaa免费看小| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲综合精品二区| 国产精品三级大全| 少妇被粗大猛烈的视频| 内射极品少妇av片p| 亚洲精品第二区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| av福利片在线观看| 亚洲性久久影院| 伦理电影大哥的女人| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 亚洲精品,欧美精品| 七月丁香在线播放| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 好男人视频免费观看在线| 狂野欧美激情性bbbbbb| 中文字幕制服av| 亚洲三级黄色毛片| 久久精品国产亚洲av涩爱| 99精国产麻豆久久婷婷| 这个男人来自地球电影免费观看 | 插逼视频在线观看| 久久久久久久久大av| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲三级黄色毛片| 日韩人妻高清精品专区| 97在线视频观看| 久久人人爽人人片av| 午夜免费男女啪啪视频观看| 中文欧美无线码| 日韩成人av中文字幕在线观看| 丝袜在线中文字幕| 国产在线视频一区二区| 久久久久精品久久久久真实原创| 一本大道久久a久久精品| 丝袜喷水一区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 免费av中文字幕在线| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 最近最新中文字幕免费大全7| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 最近手机中文字幕大全| 观看免费一级毛片| 国产av精品麻豆| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久久久久久大尺度免费视频| 老熟女久久久| 国产精品人妻久久久久久| 久久久久久久久久人人人人人人| 色网站视频免费| 亚洲欧美精品专区久久| 亚洲人与动物交配视频| 国产精品三级大全| 国产免费视频播放在线视频| 美女内射精品一级片tv| 美女cb高潮喷水在线观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 午夜老司机福利剧场| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲成人一二三区av| 观看免费一级毛片| 国产一区有黄有色的免费视频| 在线观看一区二区三区激情| 久久久国产精品麻豆| 少妇人妻一区二区三区视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美日韩亚洲高清精品| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲三级黄色毛片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久国产精品大桥未久av | 视频区图区小说| 视频区图区小说| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲精品国产av成人精品| 久久久久久人妻| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 黑人猛操日本美女一级片| av不卡在线播放| 国产片特级美女逼逼视频| 女性被躁到高潮视频| 欧美3d第一页| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 三级经典国产精品| 亚洲精品,欧美精品| 午夜激情久久久久久久| 一级二级三级毛片免费看| 美女内射精品一级片tv| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 日韩在线高清观看一区二区三区| 精品亚洲成国产av| 日韩电影二区| 99re6热这里在线精品视频| a级毛片在线看网站| 69精品国产乱码久久久| 亚洲国产av新网站| 国产成人精品婷婷| 嫩草影院入口| 99热全是精品| 伊人久久国产一区二区| 波野结衣二区三区在线| 国产成人91sexporn| 午夜老司机福利剧场| 水蜜桃什么品种好| 国产精品久久久久久久久免| 少妇 在线观看| 国产91av在线免费观看| 久久久久久久久久成人| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 黄色毛片三级朝国网站 | 久久热精品热| 爱豆传媒免费全集在线观看| 久久午夜福利片| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 大陆偷拍与自拍| 看非洲黑人一级黄片| 国产综合精华液| 久久精品久久久久久久性| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 涩涩av久久男人的天堂| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲av二区三区四区| 制服丝袜香蕉在线| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产av精品麻豆| 国产 一区精品| 青春草亚洲视频在线观看| 丝袜脚勾引网站| 日本欧美视频一区| 亚洲成色77777| 日韩伦理黄色片| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 男人添女人高潮全过程视频| 国产av码专区亚洲av| 视频区图区小说| 嫩草影院入口| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 99视频精品全部免费 在线| 国产亚洲5aaaaa淫片| 一边亲一边摸免费视频| 大香蕉97超碰在线| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 熟女电影av网| 国产精品女同一区二区软件| tube8黄色片| 国产亚洲5aaaaa淫片| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久这里有精品视频免费| av免费观看日本| 国产精品熟女久久久久浪| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲av在线观看美女高潮| 成人毛片a级毛片在线播放| 日日爽夜夜爽网站| 欧美三级亚洲精品| 色视频在线一区二区三区| 99热这里只有是精品50| 在线观看免费日韩欧美大片 | 国产一区有黄有色的免费视频| 国产精品福利在线免费观看| 亚洲av免费高清在线观看| 99re6热这里在线精品视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产av码专区亚洲av| 亚洲国产精品一区三区| 观看免费一级毛片| 国产 一区精品| 婷婷色综合www| 亚洲av不卡在线观看| 中文字幕久久专区| 免费大片黄手机在线观看| 伊人亚洲综合成人网| 国产精品人妻久久久影院| 校园人妻丝袜中文字幕| 免费在线观看成人毛片| 欧美成人午夜免费资源| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产高清国产精品国产三级| 一级毛片aaaaaa免费看小| 又大又黄又爽视频免费| 狂野欧美激情性bbbbbb| 插逼视频在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 夜夜爽夜夜爽视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产精品久久久久久精品电影小说| 欧美+日韩+精品| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲精品亚洲一区二区| 插阴视频在线观看视频| 国产成人freesex在线| 一边亲一边摸免费视频| 乱人伦中国视频| 日日啪夜夜撸| 人妻少妇偷人精品九色| 三级经典国产精品| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久这里有精品视频免费| www.色视频.com| 国产精品一二三区在线看| 日本-黄色视频高清免费观看| 天堂8中文在线网| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产一区二区在线观看av| 国产精品一二三区在线看| 日本黄大片高清| av卡一久久| 久久av网站| 欧美精品国产亚洲| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲熟女精品中文字幕| 欧美精品亚洲一区二区| av福利片在线观看| 久久青草综合色| 少妇的逼水好多| 一级毛片 在线播放| 日本黄色片子视频| av网站免费在线观看视频| 成人无遮挡网站| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲精品国产成人久久av| 丁香六月天网| 日本wwww免费看| 一级av片app| 久久久久久久久久久久大奶| 一本久久精品| 国产av精品麻豆| 国精品久久久久久国模美| av视频免费观看在线观看| 黑人高潮一二区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产黄片美女视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产伦精品一区二区三区四那| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久久久久久国产电影| 日本与韩国留学比较| 国产老妇伦熟女老妇高清| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲精品国产成人久久av| 午夜影院在线不卡| 女人精品久久久久毛片| 少妇人妻精品综合一区二区| 97超碰精品成人国产| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 18禁在线播放成人免费| 日本欧美国产在线视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 在线观看av片永久免费下载| 春色校园在线视频观看| 久久久久久久久久人人人人人人| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 久久午夜综合久久蜜桃| 另类亚洲欧美激情| 夫妻午夜视频| 国产免费又黄又爽又色| 日韩大片免费观看网站| 日日啪夜夜爽| 一级毛片 在线播放| 久久精品国产亚洲av天美| 日韩中字成人| 特大巨黑吊av在线直播| 久久国产乱子免费精品| 欧美3d第一页| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久热精品热| 免费黄色在线免费观看| a级毛片在线看网站| 亚洲国产色片| 伊人亚洲综合成人网| 女性被躁到高潮视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 99久久精品国产国产毛片| 欧美区成人在线视频| 国产精品久久久久久av不卡| 三级经典国产精品| av卡一久久| av有码第一页| 精品卡一卡二卡四卡免费| 精品酒店卫生间| 免费观看性生交大片5| 色5月婷婷丁香| 青春草亚洲视频在线观看| 免费看不卡的av| 97在线视频观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 激情五月婷婷亚洲| 免费看不卡的av| 亚洲精品国产成人久久av| 99久久精品一区二区三区| 久久久国产一区二区| 在线观看一区二区三区激情| 国产亚洲欧美精品永久| 久久狼人影院| 免费av中文字幕在线| 一级毛片aaaaaa免费看小| 一级片'在线观看视频| 成人美女网站在线观看视频| 少妇的逼好多水| 精品久久久噜噜| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 99九九线精品视频在线观看视频| 欧美+日韩+精品| 色视频在线一区二区三区| 欧美+日韩+精品| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产成人一区二区在线| 9色porny在线观看| 99国产精品免费福利视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| www.av在线官网国产| 亚洲,一卡二卡三卡| 国模一区二区三区四区视频| 熟女电影av网| 成年人午夜在线观看视频| 高清黄色对白视频在线免费看 | 最新的欧美精品一区二区| 51国产日韩欧美| 日韩人妻高清精品专区| 99热全是精品| 69精品国产乱码久久久| 极品教师在线视频| 久久99一区二区三区| 一级毛片电影观看| 久热久热在线精品观看| 亚洲中文av在线| 免费人妻精品一区二区三区视频| 成人影院久久| 观看免费一级毛片| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 9色porny在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 午夜福利视频精品| 99视频精品全部免费 在线| 免费观看的影片在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 最新的欧美精品一区二区| 国产69精品久久久久777片| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲人成网站在线播| 少妇人妻 视频| videos熟女内射| 97超视频在线观看视频| 国产淫语在线视频| 男女国产视频网站| 久久精品国产亚洲av涩爱| 日日爽夜夜爽网站| 黑丝袜美女国产一区| 最后的刺客免费高清国语| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲精品日本国产第一区| 在线观看av片永久免费下载| 免费看av在线观看网站| 99热国产这里只有精品6| 亚洲精品一区蜜桃| 国产男人的电影天堂91| a级一级毛片免费在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久久久国产网址| 性色avwww在线观看| 精品国产露脸久久av麻豆| 日韩亚洲欧美综合| 久久久午夜欧美精品| 男人狂女人下面高潮的视频| 少妇人妻 视频| 一个人免费看片子| 色哟哟·www| 91精品一卡2卡3卡4卡| 日韩成人av中文字幕在线观看| 五月开心婷婷网| 最后的刺客免费高清国语| 久久99一区二区三区| 少妇 在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 午夜精品国产一区二区电影| 一级毛片 在线播放| 精品视频人人做人人爽| 久久久久人妻精品一区果冻| 免费大片黄手机在线观看| 成人无遮挡网站| 国产精品一区二区性色av| 亚洲精品第二区| 69精品国产乱码久久久| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 少妇的逼好多水| 国产伦理片在线播放av一区| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲电影在线观看av| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产一区二区三区av在线| 丝瓜视频免费看黄片| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产男女内射视频| a级片在线免费高清观看视频| 一区二区三区四区激情视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 水蜜桃什么品种好| 日韩中字成人| 久久久国产欧美日韩av| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲久久久国产精品| 一区二区三区免费毛片| 日韩人妻高清精品专区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲精品色激情综合| 日韩欧美一区视频在线观看 | 全区人妻精品视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产一区二区在线观看日韩| 久久久a久久爽久久v久久| 国产成人免费观看mmmm| 十八禁高潮呻吟视频 | 啦啦啦啦在线视频资源| 国产成人精品无人区| videossex国产| 在线精品无人区一区二区三| 99久久综合免费| 亚洲av欧美aⅴ国产| 婷婷色av中文字幕| 亚洲av男天堂| 少妇的逼水好多| 免费观看无遮挡的男女| 色网站视频免费| 亚洲欧美一区二区三区国产| 99热国产这里只有精品6| 免费少妇av软件| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产精品久久久久久精品古装| 99久久精品热视频| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 久久ye,这里只有精品| 岛国毛片在线播放| 麻豆成人午夜福利视频| 美女主播在线视频| 中文字幕久久专区| 黄色怎么调成土黄色| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 99热6这里只有精品| av福利片在线| 夜夜爽夜夜爽视频| 免费观看性生交大片5| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 青春草国产在线视频| 亚洲国产精品专区欧美| 人人妻人人看人人澡| av卡一久久| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲av免费高清在线观看| 街头女战士在线观看网站| 在线观看人妻少妇| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 美女国产视频在线观看| 久久久欧美国产精品| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 欧美区成人在线视频| 亚洲av免费高清在线观看| 深夜a级毛片| 老女人水多毛片| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久国产精品大桥未久av | 搡女人真爽免费视频火全软件| 在线观看免费视频网站a站| 日日爽夜夜爽网站| 22中文网久久字幕| 熟妇人妻不卡中文字幕| 男女国产视频网站| 大陆偷拍与自拍| 青春草国产在线视频| 一级毛片 在线播放| 尾随美女入室| 大香蕉97超碰在线| 免费观看a级毛片全部| 国产成人精品一,二区| 日本爱情动作片www.在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 三上悠亚av全集在线观看 | 岛国毛片在线播放| 水蜜桃什么品种好| 国产一区二区在线观看av| 97超碰精品成人国产| 一本久久精品| 国产精品无大码| 国产色婷婷99| 国产成人免费无遮挡视频| 日韩av不卡免费在线播放| 久久久久久久久久久丰满| av天堂久久9| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品伦人一区二区| 国产男人的电影天堂91| 大香蕉久久网| 亚洲精品第二区| 日韩大片免费观看网站| 伊人久久精品亚洲午夜| 人妻少妇偷人精品九色| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| a级片在线免费高清观看视频| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 2022亚洲国产成人精品| 久久久a久久爽久久v久久| 精品少妇久久久久久888优播| 寂寞人妻少妇视频99o| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 看十八女毛片水多多多| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久久久视频综合| 国产在线免费精品| 99热6这里只有精品| 97超视频在线观看视频| www.av在线官网国产| 精品久久久久久久久亚洲| 久热久热在线精品观看| 亚洲av.av天堂| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 国产精品人妻久久久久久| 大片电影免费在线观看免费| 精品久久久噜噜| 亚洲欧洲日产国产| 国产午夜精品一二区理论片| 成人漫画全彩无遮挡| 欧美人与善性xxx| 男男h啪啪无遮挡| av.在线天堂| 少妇 在线观看| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲精品一区蜜桃| 高清av免费在线| 欧美+日韩+精品| 日韩欧美精品免费久久| 成人毛片60女人毛片免费| 色视频www国产| 精品一区二区免费观看| 精品一区二区三卡| 免费大片18禁| 波野结衣二区三区在线| 下体分泌物呈黄色| 91aial.com中文字幕在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| av又黄又爽大尺度在线免费看| 熟女av电影| 毛片一级片免费看久久久久| 交换朋友夫妻互换小说|