苤藍(lán)化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)及抗腫瘤活性篩選

張明燕，李婷婷，張雪紅

（廣西師范學(xué)院化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院, 廣西 南寧 530001）

苤藍(lán)化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)及抗腫瘤活性篩選

張明燕，李婷婷，張雪紅

（廣西師范學(xué)院化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院, 廣西 南寧 530001）

采用化學(xué)反應(yīng)鑒定法，通過多種指示劑和顯色劑的顏色反應(yīng)或沉淀反應(yīng)，對(duì)苤藍(lán)的石油醚提取液、乙酸乙酯提取液、甲醇提取液和水提取液中的化學(xué)成分進(jìn)行初步鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，苤藍(lán)中含有氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖、苷、皂苷、黃酮、酚類、有機(jī)酸、蒽醌、香豆素與內(nèi)脂、強(qiáng)心苷、植物甾醇、生物堿和揮發(fā)油等物質(zhì)。使用MTT法對(duì)以上4 種提取液進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選，4種提取液中，只有甲醇提取液對(duì)Hela細(xì)胞的體外增殖有抑制作用。這可能與黃酮類、蒽醌類、植物甾醇類和生物堿類這幾種通常具有藥理作用的活性成分，主要存在于甲醇提取液中有關(guān)。

苤藍(lán)；化學(xué)成分；鑒定；抗腫瘤；篩選

苤藍(lán)（Brassica oleracea var. caulorapa），形狀如球，又稱茄蓮，學(xué)名球莖甘藍(lán)，為十字花科二年生草本植物[1]，自古以來(lái)就是藥食兩用植物。苤藍(lán)富含維生素C和維生素E。鮮品絞汁服用，可治療胃病，并促進(jìn)胃與十二指腸潰瘍的愈合。苤藍(lán)內(nèi)含大量水分和膳食纖維，可寬腸通便，防治便秘，排除毒素。苤藍(lán)含有抗壞血酸、吲哚類、微量元素鉬等，因而具有增強(qiáng)人體免疫、防癌抗癌等作用[2]。日本國(guó)家癌癥研究中心最近公布的20種抗癌蔬菜排行榜，苤藍(lán)也位列其中[3]。目前，還未見有苤藍(lán)化學(xué)成分的系統(tǒng)分析及其抗腫瘤活性的研究報(bào)道。

本文用不同的溶劑對(duì)苤藍(lán)中的活性成分進(jìn)行提取，并用化學(xué)反應(yīng)鑒定法對(duì)每種提取物進(jìn)行了化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)。此外，還用MTT法測(cè)試了每種提取物的抗腫瘤活性，希望能為苤藍(lán)的活性成分研究及抗腫瘤活性的深入研究提供一定的理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 原料、試劑及儀器

購(gòu)買市售春季產(chǎn)綠皮苤藍(lán)，取其肉質(zhì)球莖，將其洗凈、切片、低溫烘干、粉碎，過0.15mm篩，備用。實(shí)驗(yàn)所用試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。

HH-S4數(shù)顯恒溫水浴鍋，R1001-VN旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，Multiskan MK3酶標(biāo)儀。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 供試品溶液的制備

稱取一定量的苤藍(lán)粉末，按1∶1的料液比加入溶劑，分別用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和熱水提取苤藍(lán)球莖中的化學(xué)物質(zhì)。提取液經(jīng)減壓旋蒸濃縮后，得到石油醚相、乙酸乙酯相、甲醇相和水相供試品溶液。

1.2.2 化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)

按照中國(guó)藥典和相關(guān)參考文獻(xiàn)[4-8]，配制化學(xué)鑒定需要的各類試劑，并按照操作規(guī)程進(jìn)行化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 抗腫瘤活性篩選

按照文獻(xiàn)操作[9-10]，使用MTT法，測(cè)定苤藍(lán)提取液對(duì)腫瘤細(xì)胞體外增殖的影響。具體操作如下：選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 HeLa 細(xì)胞，用含有10%胎牛血清FBS、1%的青霉素/鏈霉素（P/S）的RPMI-1640培養(yǎng)液制成細(xì)胞混懸液（1×105～2×105cell·mL-1）。每孔100μL接種于96孔板中，在95%濕度、37℃、5% CO2條件下培養(yǎng)24h。向?qū)嶒?yàn)組中加入不同濃度的樣品溶液50μL，對(duì)照組加入等體積培養(yǎng)液，每個(gè)濃度5個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)44h，然后向各孔中加入100μL的MTT溶液（5mg·mL-1），繼續(xù)培養(yǎng)1h后棄去上清液。每孔加入100μL的DMSO，震蕩10min后在波長(zhǎng)490nm處測(cè)定每孔的吸光度。按下式計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率：

增殖抑制率/%=（1-A樣品/A對(duì)照）×100%

2 結(jié)果與討論

2.1 化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)

苤藍(lán)化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。由表1可知，苤藍(lán)中含有氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖、苷、皂苷、黃酮、酚類、有機(jī)酸、蒽醌、香豆素與內(nèi)脂、強(qiáng)心苷、植物甾醇、生物堿和揮發(fā)油等物質(zhì)。其中氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、糖、多糖、苷類、皂苷類和酚類主要存在于水提取液中。此外，水提取液中還含有少量黃酮類和蒽醌類化合物。黃酮類、蒽醌類、強(qiáng)心苷類、植物甾醇、三萜類和生物堿類，則主要存在于甲醇提取液中。此外，甲醇提取液中還含有少量氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)。揮發(fā)油及油脂主要存在于石油醚及乙酸乙酯提取液中，香豆素與內(nèi)脂主要存在于石油醚提取液中，而有機(jī)酸則存在于每一種提取液中。

2.2 HeLa 細(xì)胞體外增殖抑制實(shí)驗(yàn)

苤藍(lán)提取液對(duì) HeLa 腫瘤細(xì)胞的體外增殖抑制實(shí)驗(yàn)表明，石油醚提取液、乙酸乙酯提取液、甲醇提取液及水提取液中，只有甲醇提取液對(duì)HeLa細(xì)胞的體外增殖有明顯的抑制作用，其它3種提取液對(duì)HeLa細(xì)胞的增殖無(wú)抑制作用。苤藍(lán)甲醇提取液對(duì)HeLa細(xì)胞的增殖抑制率如圖1所示。

表1 苤藍(lán)化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1 苯藍(lán)甲醇提取液對(duì)HeLa細(xì)胞的增殖抑制率

由圖1可知，苤藍(lán)甲醇提取液對(duì)HeLa細(xì)胞的體外增殖有明顯的抑制作用。其增殖抑制率在20～120μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)，隨濃度的增大而增大。植物中具有抗腫瘤作用的活性成分通常是黃酮類、蒽醌類、植物甾醇類、酚類或生物堿類，從預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，苤藍(lán)含有這幾種活性成分，而且這幾種活性成分除酚類外，主要存在于甲醇提取液中，在其它3種提取液中或者不存在，或者含量很少。這可能是苤藍(lán)的甲醇提取液具有體外抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性，而其它3種提取液不具有此活性的原因。

3 小結(jié)

植物中的黃酮類、酚類、蒽醌類、香豆素類、植物甾醇類及生物堿類，是具有重要藥理活性的化學(xué)物質(zhì)[11-17]。苤藍(lán)化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，苤藍(lán)中含有氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖、苷、皂苷、黃酮、酚類、有機(jī)酸、蒽醌、香豆素與內(nèi)脂、強(qiáng)心苷、植物甾醇、生物堿和揮發(fā)油等物質(zhì)，說明作為傳統(tǒng)藥食兩用植物的苤藍(lán)，可能具有很高的藥用價(jià)值。苤藍(lán)甲醇提取液對(duì)HeLa細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用，也進(jìn)一步證實(shí)了這個(gè)觀點(diǎn)。

本文對(duì)苤藍(lán)進(jìn)行了化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn), 初步確定了苤藍(lán)中可能存在的化學(xué)成分。同時(shí)，本文還對(duì)苤藍(lán)不同溶劑的提取液進(jìn)行了抗腫瘤活性篩選，明確了苤藍(lán)中具有抗腫瘤活性成分，而且這些抗腫瘤活性成分主要集中在甲醇提取液中。這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可為以后苤藍(lán)生物活性成分的提取、分離、純化和抗腫瘤活性研究提供科學(xué)依據(jù)。

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Preliminary Experiment of Chemical Composition from Kohlrabi and its Anti-tumor Activity Screening

ZHANG Mingyan, LI Tingting, ZHANG Xuehong
(College of Chemistry and Material Science, Guangxi Teachers Education University, Nanning 530001, China)

The chemical substances from kohlrabi were extracted with petroleum ether, ethyl acetate, methyl alcohol, and hot water, respectively. Their chemical compositions were surveyed by chemical reaction identification method, such as the color change and the appearance and disappearance of precipitation. In additional, the anti-tumor activities of different solvent extracts were screened by MTT method. The experiment results showed that the component of kohlrabi included amino acid, protein, polysaccharide, glycosides, saponin, flavone, phenols, organic acid, anthraquinone, coumarin, cardenolide, phytosterol, alkaloid, and essential oil. None had inhibition effect on the proliferation of Hela tumor cell in vitro except methanol extract. The reason may be that many active components including flavone, anthraquinone, phytosterol, and alkaloid, usually had important pharmacological activity, were found in methanol extract.

kohlrabi; chemical composition; anti-tumor; screen

R 284.2

A

1671-9905(2017)01-0010-03

合成與天然功能分子化學(xué)廣西高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題

張雪紅（1973-），女，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事天然產(chǎn)物分離分析研究

2016-11-14