Galectin-3、Midkine和VEGF表達(dá)在甲狀腺癌診斷中的價(jià)值

王超宇 朱 昕 陳 源

(貴州省人民醫(yī)院血管甲狀腺外科，貴州 貴陽(yáng) 550002)

Galectin-3、Midkine和VEGF表達(dá)在甲狀腺癌診斷中的價(jià)值

王超宇 朱 昕 陳 源

(貴州省人民醫(yī)院血管甲狀腺外科，貴州 貴陽(yáng) 550002)

目的探討半乳糖凝集素(Galectin)-3(Gal-3)、中期因子(MK)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在甲狀腺乳頭狀癌(PTC)及良性甲狀腺病變中表達(dá)的差異及其在鑒別診斷甲狀腺良惡性腫瘤中的應(yīng)用價(jià)值。方法采用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測(cè)100例PTC和100例良性甲狀腺組織(80例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和20例甲狀腺腺瘤)中Gal-3、MK、VEGF的表達(dá)情況。結(jié)果Gal-3、MK和VEGF在PTC中的陽(yáng)性率與良性病變中的陽(yáng)性表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中VEGF、MK的表達(dá)高于未轉(zhuǎn)移組(P<0.05)；在PTC中Gal-3的表達(dá)在有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論Gal-3、MK和VEGF對(duì)于PTC及良性病變的診斷及鑒別有很好的臨床意義，在PCT組織中MK、VEGF的表達(dá)對(duì)預(yù)警淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否均具有較好的提示作用。

甲狀腺乳頭狀癌；半乳糖凝集素-3；中期因子；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

甲狀腺癌為頭部常見(jiàn)惡性腫瘤，占全身腫瘤的0.2～1.0%〔1〕。目前甲狀腺乳頭狀癌(PTC)在甲狀腺癌中十分常見(jiàn)，是其中的亞型表現(xiàn)形式，大約占75%以上〔2〕。淋巴管轉(zhuǎn)移是PTC最常見(jiàn)的轉(zhuǎn)移渠道，PTC具有特殊性的乳頭狀結(jié)構(gòu)和明顯的細(xì)胞核形態(tài)〔3〕。然而，對(duì)PTC診斷及鑒別目前所面臨的困擾是某些良性病變比如結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及甲狀腺腺瘤并有乳頭狀增生且出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本研究旨在探究半乳糖凝集素(Galectin)-3(Cal-3)、中期因子(MK)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)水平對(duì)PTC的診斷價(jià)值及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)聯(lián)。

1 材料與方法

1.1臨床資料 選擇貴州省人民醫(yī)院病理科2014年1月至2016年12月100例PTC(其中合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例)和100例良性甲狀腺病變(80例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和20例腺瘤患者)行手術(shù)切除的樣本。病理學(xué)診斷均按照世界衛(wèi)生組織(WHO)甲狀腺組織學(xué)分類(lèi)原則。PTC組男47例，女53例，年齡42～75歲；良性病變組男39例，女61例，年齡44～76歲。

1.2方法 用10%甲醛穩(wěn)定甲狀腺組織樣本并作一般處理，然后用石蠟包埋進(jìn)行連續(xù)切片，行蘇木素-伊紅(HE)染色。免疫組化利用EnVision法，步驟以說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。磷酸鹽緩沖液(PBS)替換一抗作陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性的組織作陽(yáng)性對(duì)照，工作液及免疫組化試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

1.3結(jié)果判斷 根據(jù)Beeskey分級(jí)方法〔3〕：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性數(shù)<10%為陰性(-)；陽(yáng)性數(shù)≥10%且<25%是弱陽(yáng)性(+)，陽(yáng)性數(shù)≥25%且<50%是中度陽(yáng)性()，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥50%為強(qiáng)陽(yáng)性()；VEGF為無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為-；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥5%且<15%為+，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥15%且<30%為，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥30%為。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，條件不足者用Fisher確切概率法。

2 結(jié) 果

2.1Gal-3的表達(dá)情況 Gal-3往往在細(xì)胞質(zhì)可見(jiàn)，然而某些病例可有細(xì)胞核著色。在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和腺瘤中的表達(dá)以陰性為主(78例和17例)，僅見(jiàn)2例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和3例甲狀腺腺瘤呈局灶弱陽(yáng)性表達(dá)；在PTC中則以中度及強(qiáng)度陽(yáng)性表達(dá)為主，陽(yáng)性率為97%(+2例，45例，50例)，僅3例陰性表達(dá)。PTC與甲狀腺良性病變之間Gal-3陽(yáng)性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PTC中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Gal-3均呈陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為100%(+1例，2例，13例)；PTC中無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者其陽(yáng)性表達(dá)率為96.4%(-3例，+1例，43例，37例)，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2MK的表達(dá)情況 MK定位于細(xì)胞質(zhì)染色。在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和甲狀腺腺瘤中的表達(dá)以陰性為主(78例和17例)，僅見(jiàn)2例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和3例甲狀腺腺瘤呈局灶弱陽(yáng)性表達(dá)；而在絕大多數(shù)PTC中大部分細(xì)胞的胞質(zhì)呈中度及強(qiáng)度陽(yáng)性顯色，陽(yáng)性率為81%(-19例，+3例，38例，40例)。PTC與良性病變間的MK陽(yáng)性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PTC中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)K均呈陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為100%(+2例，6例，8例)；PTC中無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者其陽(yáng)性表達(dá)率為77.4%(-19例，+1例，32例，32例)，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3VEGF的表達(dá)情況 VEGF陽(yáng)性定位于細(xì)胞質(zhì)。在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和甲狀腺腺瘤中的表達(dá)以陰性為主，無(wú)1例強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為26%(其中-58 vs 16例，+15 vs 2例，7 vs2例)；而在PTC中則以中度及強(qiáng)度陽(yáng)性表達(dá)為主，陽(yáng)性率為70%(-30例，+8例，47例，15例)。PTC與甲狀腺良性病變之間VEGF陽(yáng)性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PTC中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，VEGF以陽(yáng)性表達(dá)為主，陽(yáng)性率為93.8%(-1例，+2例，9例，4例)；PTC中無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，其陽(yáng)性表達(dá)率為65.5%(-29例，+6例，38例，11例)，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

目前診斷PTC患者常依靠其特征性的乳頭狀結(jié)構(gòu)和典型的細(xì)胞核改變。然而某些良性病變會(huì)作為不典型病例，比如結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及腺瘤等形成的假乳頭或伴隨乳頭狀增生而形成十分像PTC中的“真乳頭”結(jié)構(gòu)，并經(jīng)常性地出現(xiàn)于甲狀腺病變的病理學(xué)診斷中，這極大程度上困擾了對(duì)PTC與良性病變的判斷。病理檢驗(yàn)中甲狀腺腺瘤上的某些生物分子標(biāo)志物在疾病診斷中具有較高的特異性。本研究表明，Gal-3、MK、VEGF在PTC中的表達(dá)對(duì)該病的診斷與鑒別均具有非常重要的臨床價(jià)值。Gal是一類(lèi)多功能蛋白質(zhì)，在大部分組織中參與著細(xì)胞過(guò)程，在機(jī)體組織細(xì)胞內(nèi)外均扮演著重要角色〔4〕。其中Gal-3是植物凝集素蛋白家族成員的β半乳糖結(jié)合蛋白，具有重要的生理作用，如免疫系統(tǒng)的發(fā)育和激活〔5〕。此外，有研究證實(shí)Gal-3在肺癌、卵巢癌、胃癌等惡性腫瘤中出現(xiàn)高表達(dá)水平，認(rèn)為其可能作為主要蛋白直接參與了腫瘤進(jìn)展〔6〕。研究顯示，Gal-3在PTC中陽(yáng)性率明顯高于良性病變〔7〕。其可能原因是Gal-3能夠增殖機(jī)體組織中的正常細(xì)胞，若其在某些因素作用下發(fā)生過(guò)度表達(dá)將會(huì)引起細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞〔8〕。本研究結(jié)果認(rèn)為，在鑒別診斷PTC與良性病變時(shí)，Gal-3有很好的參考價(jià)值。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于甲狀腺癌轉(zhuǎn)移灶中有關(guān)Gal-3表達(dá)的相關(guān)文獻(xiàn)尚不多，本研究結(jié)果提示Gal-3對(duì)預(yù)測(cè)PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移意義不大。MK屬于一類(lèi)新的結(jié)合肝素的生長(zhǎng)因子家族，具有多種生物學(xué)功能，并在胚胎發(fā)育期與細(xì)胞生長(zhǎng)及分化有關(guān)。MK是一種有絲分裂原，腫瘤的生成與其有著重要的關(guān)聯(lián)；MK還可通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡而保護(hù)細(xì)胞，從而達(dá)到增殖細(xì)胞的功能，其可能原因是作為一類(lèi)拮抗細(xì)胞凋亡的因子。研究發(fā)現(xiàn)多種腫瘤中MK表達(dá)量有增加的現(xiàn)象，在腫瘤病人血清中的水平表現(xiàn)為明顯升高，因此其與腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展及預(yù)后存在密切相關(guān)〔9〕。楊鵬飛等〔10〕研究表明，甲狀腺惡性結(jié)節(jié)患者血清中MK濃度明顯高于良性結(jié)節(jié)患者和正常人群。本研究說(shuō)明MK作為一種新的分子生物標(biāo)志物，對(duì)PTC的診斷及鑒別診斷具有較好的提示意義。PTC患者中MK的表達(dá)水平可能與腫瘤惡性程度有關(guān)，需進(jìn)一步研究證明其相關(guān)性。VEGF最初是在肝癌組織中發(fā)現(xiàn)，其高表達(dá)對(duì)肝癌新生血管形成及腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移起重要作用。癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移依賴新生血管的形成，VEGF是最有效的促血管生長(zhǎng)因子。VEGF可通過(guò)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的調(diào)控因子使其表達(dá)增強(qiáng)〔11〕。相關(guān)研究認(rèn)為VEGF的表達(dá)水平有助于腺瘤組織學(xué)類(lèi)型的鑒別，其表達(dá)量越高，惡性程度也越高，檢測(cè)VEGF有助于評(píng)估甲狀腺良惡性病變的診斷和鑒別診斷〔12〕。本研究結(jié)果認(rèn)為，造成PTC發(fā)生轉(zhuǎn)移的可能原因是癌細(xì)胞易侵入淋巴管道，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。因此，VEGF可作為生物學(xué)指標(biāo)診斷及鑒別PTC與良性病變和淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移。將Gal-3、MK及VEGF三種生物分子標(biāo)志物作為一個(gè)組合進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)可提高結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1楊 帆，王永麗，文 智.甲狀腺癌CT與超聲影像特征的對(duì)照分析〔J〕.實(shí)用放射學(xué)雜志，2013；29(12)：1919-22.

2Aschebrook-Kilfoy B，Ward MH，Sabra MM，etal.Thyroid cancer incidence patterns in the united states by histologic type，1992-2006〔J〕.Thyroid，2011；21(2)：125-34.

3Beesley MF，McLaren KM.Cytokeratin 19 and galectin-3 immunohistochemistry in the differential diagnosis of solitary thyroid nodules〔J〕.Histopathology，2002；41(3)：236-43.

4Gray CA，Dunlap KA，Burghardt RC，etal.Galectin-15 in ovine uteroplacental tissues〔J〕.Reproduction，2005；130(2)：231-40.

5Liu FT，Rabinovich GA.Galectins as modulators of tumour progression〔J〕.Nat Rev Cancer，2005；5(1)：29-41.

6Giordano M，Croci DO，Rabinovich GA.Galectins in hematological malignancies〔J〕.Curr Opin Hematol，2013；20(4)：327-35.

7許文瓊，梅金紅，湯佳珍，等.Galectin-3、HBME-1和VEGF在甲狀腺乳頭狀癌的表達(dá)及診斷意義〔J〕.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2015；25(18)：26-30.

8陳 帥，任建強(qiáng)，潘 炯.GAL-3、CK19、HBME-1在甲狀腺乳頭狀癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值〔J〕.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2012；28(22)：3692-4.

9孫常銘，王麗萍，劉 敏.沉默人肺癌A 5 4 9細(xì)胞中期因子基因表達(dá)對(duì)細(xì)胞凋亡的影響〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2015；44(5)：608-12.

10楊鵬飛，李 娟，張建中，等.甲狀腺結(jié)節(jié)患者血清Midkine檢測(cè)及其臨床意義〔J〕.湖北科技學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2016；30(1)：7-10.

11Laskin DL，Sunil VR，Gardner CR，etal.Macrophages and tissue injury：agents of defense or destruction〔J〕?Annu Rev Pharmacol Toxicol，2011；51：267-88.

12Zhou ZH，Cui XN，Xing HG，etal.Changes and prognostic value of serum vascular endothelial growth factor in patients with differentiated thyroid cancer〔J〕.Med Princ Pract，2013；22(1)：24-8.

王超宇(1983-)，男，主治醫(yī)師，主要從事甲狀腺及血管疾病診治研究。

R73

A

1005-9202(2017)20-5082-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.20.057

〔2017-04-25修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)