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    類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型研究進(jìn)展

    2017-01-14 21:50:43吳晶金
    關(guān)鍵詞:發(fā)病機(jī)制動(dòng)物模型類風(fēng)濕

    吳晶金

    【摘 要】 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型復(fù)制是研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制及藥物治療效果的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。構(gòu)建一種經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便、與人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病理特點(diǎn)相符合的動(dòng)物模型尤為重要。近年來,建立的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型,主要包括膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎模型、佐劑性關(guān)節(jié)炎模型、膠原抗體誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型、降植烷誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型、聯(lián)合免疫缺陷小鼠模型和卵清蛋白誘導(dǎo)的兔類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型,但均存在各自的優(yōu)缺點(diǎn)。通過對(duì)近幾年常用的幾種類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型進(jìn)行綜述,以期為今后研究更接近人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病理特征的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)P吞峁﹨⒖肌?/p>

    【關(guān)鍵詞】 關(guān)節(jié)炎,類風(fēng)濕;動(dòng)物模型;發(fā)病機(jī)制;綜述

    類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種以侵蝕性關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的全身性自身免疫

    病[1]。本病以女性多發(fā),男女患病比例約1∶3。RA控制不佳可致殘,因此研究本病的發(fā)病機(jī)制,探索控制或延緩病情進(jìn)展的治療方法,對(duì)提高患者生活質(zhì)量具有經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。然而如何復(fù)制出更接近RA的動(dòng)物病理模型一直成為困擾風(fēng)濕免疫專業(yè)學(xué)者的難題,尋找與RA發(fā)病機(jī)制更為接近的動(dòng)物模型對(duì)研究疾病潛在病理、藥物發(fā)現(xiàn)和療效驗(yàn)證具有重要意義[2-3]。近年來,針對(duì)RA動(dòng)物模型的研究方興未艾,除了經(jīng)典的膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)模型及佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)模型以外,又有了膠原抗體誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CAIA)模型、降植烷誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(PIA)模型、聯(lián)合免疫缺陷小鼠(SCID)模型和卵清蛋白誘導(dǎo)的兔RA(OVA)模型。本文就上述模型最新進(jìn)展做一綜述。

    1 常用模型

    1.1 CIA模型

    1.1.1 CIA模型概述 CIA模型是1977年由Trentham團(tuán)隊(duì)構(gòu)建的免疫性炎癥關(guān)節(jié)炎模型,以多發(fā)性的四肢末端關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)[4]。CIA發(fā)病是由T細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)激活、炎性因子釋放、Ⅱ型膠原抗體產(chǎn)生等環(huán)節(jié)共同決定的[5]。

    1.1.2 CIA模型造模方法[6] 用雙蒸水將冰醋酸稀釋成0.01 mol·L-1,0.2 μm微孔膜過濾除菌,4 ℃保存過夜。用2.5 mL冰醋酸稀釋10 mg牛

    Ⅱ型膠原,制成終質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4 mg·mL-1的溶液。錫箔紙保存避光,4 ℃環(huán)境下完全溶解過夜(該溶液可在-20 ℃環(huán)境下儲(chǔ)存6周)。使用時(shí)根據(jù)動(dòng)物數(shù)量與完全弗氏佐劑按1∶1比例混合,在0 d時(shí)鼠尾根部皮內(nèi)注射,每只DBA/1小鼠給予0.1 mL

    乳劑,21 d后加強(qiáng)免疫(與不完全弗氏佐劑等比混合),建立CIA模型。C57BL/6小鼠需使用雞Ⅱ型膠原。

    1.1.3 CIA模型特點(diǎn) 在造模30 d后出現(xiàn)炎癥高峰,表現(xiàn)為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雙側(cè)足爪明顯腫脹,可累及前爪,造模時(shí)間與疾病進(jìn)行性加重呈正相關(guān)。優(yōu)勢(shì)是免疫學(xué)過程和關(guān)節(jié)表現(xiàn)與人類具有較高的一致性[7-8]。

    1.2 AA模型

    1.2.1 AA模型概述 AA又稱弗氏佐劑關(guān)節(jié)炎模型,是一種使用廣泛的風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型,可用于預(yù)測(cè)許多藥物對(duì)RA的臨床療效。致病原理主要是基于抗原模擬機(jī)制,位于結(jié)核桿菌上的某個(gè)蛋白分子在結(jié)構(gòu)上與關(guān)節(jié)滑膜上的某個(gè)糖蛋白分子相似,由此形成的抗體誘發(fā)了針對(duì)關(guān)節(jié)的免疫反應(yīng)。

    1.2.2 AA模型造模方法[9] 將熱滅活的結(jié)核分枝桿菌混懸于0.1 mL弗氏完全佐劑,以0.1 mL劑量皮下注射6周齡Lewis大鼠。表現(xiàn)為致炎18 h

    后出現(xiàn)足腫脹,通常于造模后2~3周內(nèi)達(dá)炎癥高峰,隨后有自愈傾向,繼發(fā)病變一般出現(xiàn)于

    10 d左右,20 d左右達(dá)高峰。雖然所有的大鼠發(fā)病過程相似,但它們的炎癥表現(xiàn)不盡相同,這為探索初期炎癥的嚴(yán)重程度和關(guān)節(jié)功能之間的聯(lián)系提供了機(jī)會(huì)。

    1.2.3 AA模型特點(diǎn) 早期炎癥反應(yīng)的部位常出現(xiàn)在造模對(duì)側(cè)和前爪,呈進(jìn)行性加重,活動(dòng)不便,耳和尾部出現(xiàn)類風(fēng)濕結(jié)節(jié),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體質(zhì)量下降,特別是繼發(fā)性自身免疫性腫脹,這些表現(xiàn)與人RA表現(xiàn)相近,提示AA大鼠與RA患者在關(guān)節(jié)腫脹方面具有相似性[10]。AA具有發(fā)病迅速的特點(diǎn),病程具有自限性,缺乏慢性改變過程,造模43 d后病理改變基本恢復(fù)正常[11]。

    1.3 CAIA模型

    1.3.1 CAIA模型概述 早在1998年,人們就在運(yùn)用膠原抗體來誘導(dǎo)RA的CAIA模型。此模型適用于BALB/C小鼠、DBA/1小鼠,而C57BL/6小鼠模型反應(yīng)性低。此模型是研究RA發(fā)病機(jī)制和治療藥物篩選的理想模型。

    1.3.2 CAIA模型造模方法[12] 8周齡雄性DBA/1小鼠,在0 d時(shí)腹膜腔注射鼠單克隆Ⅱ型膠原抗體(An Arthrogen-CIA? 5-clone cocktail kit),每只1.5 mg·(0.15 mL)-1,3 d后,腹膜腔注射大

    腸桿菌脂多糖,每只50 μg·(0.1 mL)-1。炎癥達(dá)峰期在14 d左右,發(fā)病率為83%左右。

    1.3.3 CAIA模型特點(diǎn) 關(guān)節(jié)炎癥評(píng)分通常在第10天達(dá)高峰,CAIA小鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),侵蝕滑膜并破壞軟骨。這與RA關(guān)節(jié)病理存在高度一致性[13]。CAIA模型具有發(fā)病率高、發(fā)病迅速、穩(wěn)定性高和可重復(fù)性好的特點(diǎn),同時(shí)該模型的建立不需要弗氏佐劑的誘導(dǎo),亦不受MHC分子的限制,各種品系的小鼠均可誘導(dǎo)發(fā)病,所以該模型的應(yīng)用范圍更廣,更適宜于各種干預(yù)性藥物實(shí)驗(yàn)研究[14]。

    1.4 PIA模型

    1.4.1 PIA模型概述[15] 降植烷(2,6,10,14-四甲基十五烷)是葉綠素分解后的產(chǎn)物,是一種常用的致炎劑,能促進(jìn)小鼠B淋巴細(xì)胞瘤的發(fā)生,誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)小鼠產(chǎn)生狼瘡特異性抗體,表現(xiàn)出明顯的系統(tǒng)性紅斑狼瘡特征。因此推斷降植烷主要通過體液免疫激發(fā)炎癥反應(yīng)。

    1.4.2 PIA模型造模方法[17] 6~8周雌性BALB/C

    小鼠,分別于0,9,18周腹膜腔注射0.5 mL降植烷,21周時(shí)實(shí)驗(yàn)小鼠表現(xiàn)出明顯的關(guān)節(jié)炎癥狀,發(fā)病率為73.7%,炎癥達(dá)峰期8~13 d。

    1.4.3 PIA模型特點(diǎn) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物關(guān)節(jié)滑膜有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),以單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞為主,滑膜增生,有血管翳形成,軟骨和骨組織破壞明顯,與人RA病理表現(xiàn)類似[16]。Holmberg等[17]研究發(fā)現(xiàn),降植烷是一種非免疫原性佐劑,主要通過免疫系統(tǒng)的非特異性刺激引起自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞活化,而非影響T細(xì)胞或B細(xì)胞特異性識(shí)別。降植烷所致急性關(guān)節(jié)炎癥,在短暫的急性炎癥期后隨即進(jìn)入慢性進(jìn)展和反復(fù)發(fā)作階段,表現(xiàn)為一個(gè)較長(zhǎng)的慢性遷延期。因此,在免疫學(xué)特征方面更類似于RA患者,更適于RA病理機(jī)制的研究。

    1.5 SCID模型

    1.5.1 SCID模型概述 SCID小鼠由于其免疫缺陷的特點(diǎn),可用于建立人鼠嵌合模型。近年來研究發(fā)現(xiàn),植入SCID小鼠背部的RA滑膜能維持其特征12周以上,用于研究發(fā)病機(jī)制,特別是用于研究新藥的療效和機(jī)制,并可作為人源化RA模型。

    1.5.2 SCID模型造模方法[18] 該模型用到的是4~8周齡天然免疫及適應(yīng)性免疫均缺乏的SCID-NOD小鼠,無菌條件下麻醉小鼠,在其背部正中做一切口,取一大小約0.1~0.2 cm3的人RA滑膜組織植入其皮下,植入物需避開切口。移植后第3,6或12周又可將移植物取出凍存于冰箱,以備后用。個(gè)別學(xué)者在滑膜植入期間,配合使用熒光染料標(biāo)記的人外周血淋巴細(xì)胞鼠尾靜脈輸注,以提高成模率。實(shí)驗(yàn)證明,在第3周和12周時(shí)RA-SCID小鼠血清中可檢測(cè)到人白細(xì)胞介素-6和免疫球蛋白。這些研究表明,RA-SCID具有滑膜炎的特性,與RA病理一致性高。

    1.5.3 SCID模型特點(diǎn)[19] RA-SCID小鼠血清中炎癥腫瘤壞死因子-α水平顯著升高,RA組織滑膜增生、軟骨侵蝕和軟骨降解過程與人RA病理非常類似。由于動(dòng)物模型與人的種屬差異是研究中一個(gè)重要影響因素,RA-SCID小鼠作為人源化滑膜侵蝕模型,在探討RA病理機(jī)制特別是軟骨破壞及治療方面可能有明顯優(yōu)勢(shì)。

    1.6 OVA模型

    1.6.1 OVA模型概述 卵清蛋白誘導(dǎo)模型首次出現(xiàn)在1962年,其可能的發(fā)病機(jī)制在于以抗原的形式刺激關(guān)節(jié)腔出現(xiàn)抗體,持續(xù)形成抗原-抗體-補(bǔ)體(C3)復(fù)合物,募集大量的淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞,從而引起局部的炎癥反應(yīng),刺激滑膜產(chǎn)生血管翳,導(dǎo)致關(guān)節(jié)破壞[20]。

    1.6.2 OVA模型造模方法 將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20 mg·mL-1的卵清蛋白乳劑于兔肩胛間區(qū)進(jìn)行皮內(nèi)注射,每次選5個(gè)部位,每周1次,連續(xù)3次,進(jìn)行基礎(chǔ)致敏。28 d后在脛骨結(jié)節(jié)最高點(diǎn)與髕骨下緣連線之中點(diǎn)的髕韌帶兩側(cè),以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10 mg·mL-1的雞卵清蛋白乳劑雙膝各注射1 mL加強(qiáng)[21]。

    1.6.3 OVA模型評(píng)價(jià) 該模型造模4周后即可出現(xiàn)明顯的關(guān)節(jié)腫脹、僵硬,活動(dòng)受限,不能負(fù)重,甚至關(guān)節(jié)變形。且模型廉價(jià)易于復(fù)制,模型成功率可高達(dá)100%,適合較大規(guī)模的飼養(yǎng)與造模,同時(shí)本模型血清學(xué)、病理學(xué)改變均接近人RA[22]。

    2 展望與討論

    RA動(dòng)物模型復(fù)制是研究RA發(fā)病機(jī)制及藥物治療效果的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。成功的RA動(dòng)物模型應(yīng)在病理學(xué)特征上滿足RA病理特點(diǎn),同時(shí)需具備操作簡(jiǎn)單、可重復(fù)的特征,且用于造模的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、試劑需易購買[23]。在上述模型中,CIA與AA模型建立較早,是RA的經(jīng)典模型,已較為成熟,與人類病理過程有一定的相似性。但CIA模型缺乏統(tǒng)一的操作標(biāo)準(zhǔn),各種大、小鼠成模率高低不同,且

    Ⅱ型膠原注射劑量、注射部位、加強(qiáng)免疫方法不盡相同,這使實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性、可操作性大打折扣。AA模型有自愈傾向,依然不能反映RA作為慢性病的臨床特點(diǎn)[24],存在發(fā)病程度不均一、成模率低等局限性。雖然CAIA模型、PIA模型和SCID模型在一定程度上解決了經(jīng)典模型的不足之處,具有慢性遷延的病程、成模率高、與人RA病理高度吻合的優(yōu)勢(shì);但其不足之處表現(xiàn)在CAIA模型所需試劑昂貴、不利于購買;PIA模型造模耗時(shí)長(zhǎng),實(shí)驗(yàn)進(jìn)度緩慢,其復(fù)制能否成功取決于動(dòng)物周齡、雌雄比例、屏障環(huán)境等多個(gè)因素;SCID模型所需的人類滑膜組織不容易獲得、操作復(fù)雜;而OVA模型又存在兔源化抗體稀少,后期研究困難的缺陷。所以,探索一種經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便,與人RA病理特點(diǎn)更符合的動(dòng)物模型仍是今后模型研究的方向。

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    收稿日期:2016-07-15;修回日期:2016-10-19

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