大黃酸對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖分化及相關(guān)基因表達(dá)的影響

李佳佳，梁耀月，董世芬，楊蓉芳，肖叢瑞，王晶

(北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,北京 100102)

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中 藥 研 究

大黃酸對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖分化及相關(guān)基因表達(dá)的影響

李佳佳，梁耀月，董世芬，楊蓉芳，肖叢瑞，王晶*

(北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,北京 100102)

目的：研究大黃酸(1,8-dihydroxy-3-carboxyanthraquinone，Rhein，Rh)對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖分化及相關(guān)基因表達(dá)的影響，從分子生物學(xué)角度探討大黃酸降脂的作用機(jī)理。方法：體外培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞，采用噻唑藍(lán)法(MTT)研究大黃酸(5、10、20、40、80、160 μM)對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖活性的影響；大黃酸(20、40、80 μM)干預(yù)3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化，油紅O染色分析大黃酸對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中胞漿脂滴積累的影響；生化法檢測(cè)大黃酸對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞中甘油三酯(Triglyceride，TG)的影響；實(shí)時(shí)熒光PCR法檢測(cè)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(Peroxisome Proliferator Activated Receptor Gamma，PPARγ)、CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白(CCAAT/enhancer binding protein，C/EBPα)、脂肪酸合成酶(Fatty acid synthetase，F(xiàn)AS)mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果：大黃酸160 μM對(duì)3T3-L1前脂肪的增殖有顯著的抑制作用，大黃酸20、40、80 μM劑量依賴地降低3T3-L1脂肪細(xì)胞中脂滴的積累，同時(shí)顯著降低3T3-L1脂肪細(xì)胞中TG含量，并且下調(diào)3T3細(xì)胞中脂肪分化相關(guān)基因PPARγ、C/EBPα、FAS mRNA的表達(dá)。結(jié)論：大黃酸能夠抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，降低細(xì)胞內(nèi)TG含量，其作用機(jī)制可能與下調(diào)脂肪分化相關(guān)基因PPARγ、C/EBPα、FAS mRNA的表達(dá)有關(guān)。

大黃酸；3T3-L1前脂肪細(xì)胞；增殖分化；基因表達(dá)

肥胖是一種多因素引起的慢性代謝性疾病，是引發(fā)高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、糖尿病等肥胖相關(guān)疾病的重要因素。而肥胖是代謝綜合征的主要組成之一，亦是糖尿病、心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子[1]。前體脂肪細(xì)胞的過(guò)度分化直接導(dǎo)致肥胖的發(fā)生、發(fā)展。因此，抑制前體脂肪的分化，研究脂肪組織中調(diào)控前脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化為脂肪細(xì)胞的分子機(jī)制，對(duì)于預(yù)防肥胖的相關(guān)疾病有重要的意義。3T3-L1前脂肪細(xì)胞來(lái)源于小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，具有單一的分化潛能[2]，體外經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)分化后可以分化為成熟的脂肪細(xì)胞。目前已成為國(guó)內(nèi)外研究脂肪代謝最常用的細(xì)胞株之一。

大黃來(lái)源于蓼科植物掌葉大黃(RheumpalmatumL)、唐古特大黃(RheumtanguticumMaxim．ex Balf)或藥用大黃(RheumofficinaleBaill)的干燥根及根莖，性苦、寒，具有瀉下攻積、清熱瀉火、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)、利濕退黃之功效[3]?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》謂大黃“主下瘀血、血閉、寒熱，破癥瘕積聚，留飲宿食，蕩滌腸胃，推陳致新”，其所治病證與高脂血癥“痰濁”“污血”“濁血”“瘀血”的病機(jī)相符[4]?，F(xiàn)代研究表明，大黃具有減輕體質(zhì)量，降低血脂等作用[5]。大黃酸是大黃主要有效成分之一，為蒽醌衍生物，具有降血糖[6]、抗病原微生物[7]、抗腫瘤[8]等藥理作用，并且大黃酸也是大黃提取物中唯一吸收入血檢測(cè)到的蒽醌類成分[9]。研究發(fā)現(xiàn)，大黃酸可以降低糖尿病肥胖大鼠脂肪組織抵抗素的表達(dá)，降低游離脂肪酸和血脂水平[10-11]；能夠降低高脂血癥小鼠肝臟脂肪含量，抑制脂肪在肝臟的沉積[12]。然而，目前其降脂的作用機(jī)制尚未完全清楚。本研究以3T3-L1前脂肪細(xì)胞為研究對(duì)象，探討大黃酸對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖分化以及對(duì)脂肪分化相關(guān)基因表達(dá)的影響，以期為闡明大黃降脂的作用機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 細(xì)胞來(lái)源

3T3-L1前脂肪細(xì)胞株，購(gòu)自北京協(xié)和細(xì)胞資源中心。

1.2 試劑與材料

大黃酸(北京華威銳科化工有限公司，批號(hào)16HC0210-2)；胎牛血清(Fetal bovine serum，F(xiàn)BS)(美國(guó)Corning公司，批號(hào)35076115)；DMEM高糖培養(yǎng)基(美國(guó)Corning公司，批號(hào)21115003)；新生牛血清(四季青生物工程公司，批號(hào)20151113)；牛胰島素(Insullin，美國(guó)Sigma公司，批號(hào)11070-73-8)；3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(3-Isobutyl-1-methylxanthine，IBMX)(美國(guó)Sigma公司，批號(hào)10163375)；地塞米松(美國(guó)Sigma公司，批號(hào)D1756)；噻唑藍(lán)(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-diphenytetrazoliumromid，MTT)(北京Biodee公司，批號(hào)298-93-1)；油紅O(北京Biodee公司，批號(hào)1320-06-5)；Triton-X100(北京Biodee公司，批號(hào)9002-93-1)；總蛋白定量測(cè)試盒(BCA法)(南京建成生物科技有限公司，批號(hào)20160704)；甘油三酯(TG)測(cè)試盒(南京建成生物科技有限公司，批號(hào)20160525)；Trizol試劑盒(美國(guó)Thermo公司，批號(hào)113705)；Revert Aid First Stand cDNA Synthesis Kit(美國(guó)Thermo公司，批號(hào)00285939)；SYBR Select Mast Mix: ABI(美國(guó)Thermo公司，批號(hào)1510506)；Fast Reaction Tubes: Applied Biosystems(美國(guó)Thermo公司，批號(hào)4323032)。

1.3 儀器

CO2恒溫培養(yǎng)箱(RCO-3000T-5V型，美國(guó)G.S.公司)；酶標(biāo)儀(ThermoLabsystems Multiskan Mk3，美國(guó)Thermo公司)；倒置相差顯微鏡(DMILHC，德國(guó)Leica公司)；電泳儀(DYCP-31DN型，北京市六一儀器廠)；凝膠成像分析儀(Tannon 1600，上海天能科技有限公司)；Nano-200超微量核酸分析儀(杭州奧盛儀器有限公司)；StepOne Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(ABI，美國(guó))。

2 方法

2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)

3T3-L1前脂肪細(xì)胞，用含10%新生牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)液在5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2～3 d更換1次培養(yǎng)液，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況，細(xì)胞融合度達(dá)到80%時(shí)，用0.25% EDTA胰酶消化種板。

2.2 MTT法檢測(cè)大黃酸對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖活性的影響

選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的3T3-L1前脂肪細(xì)胞，按1×104個(gè)/mL接種于96孔板，每孔加入細(xì)胞懸液200 μL，置于CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h后，吸棄培養(yǎng)孔中的培養(yǎng)基，給藥組分別加入含一定濃度梯度的大黃酸(5、10、20、40、80、160 μM)培養(yǎng)基干預(yù)培養(yǎng)，每組設(shè)5個(gè)平行復(fù)孔，另設(shè)前脂肪細(xì)胞組(Preadipocyte)和DMSO溶劑對(duì)照組(DMSO)，分別培養(yǎng)24 h、48 h、72 h。至所需的時(shí)間后，棄去培養(yǎng)孔中的培養(yǎng)基，PBS洗1次。加入終濃度為1 mg/mL的MTT溶液，200 μL/孔，37℃培養(yǎng)箱孵育4 h后，細(xì)胞內(nèi)形成藍(lán)紫色結(jié)晶。棄去MTT溶液，每孔加入150 μL的DMSO，輕微震蕩10min，使細(xì)胞內(nèi)藍(lán)紫色結(jié)晶完全溶解后，于酶標(biāo)儀490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(A)。用GraphPad Prism 6計(jì)算公式，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的IC50值。

細(xì)胞存活率(%)=A藥物組/A對(duì)照組×100%

2.3 3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化

將3T3-L1前脂肪細(xì)接種到24孔或者6孔板中進(jìn)行誘導(dǎo)分化。培養(yǎng)至接觸抑制后第2天，脂肪細(xì)胞組(Adipocyte)開(kāi)始誘導(dǎo)分化，更換誘導(dǎo)液Ⅰ(含10%FBS，5 μg/mL胰島素，1 μmol/L地塞米松，0.5 mmol/L IBMX的DMEM高糖培基)，這一天記為誘導(dǎo)分化D0。D2，吸棄舊的培養(yǎng)基，更換誘導(dǎo)液I繼續(xù)培養(yǎng)。D3，吸棄舊的培養(yǎng)基，更換誘導(dǎo)液Ⅱ(含5 μg/mL胰島素的10% FBS的DMEM高糖培基)培養(yǎng)。D4，吸棄舊的培養(yǎng)基，更換誘導(dǎo)液Ⅲ(含10% FBS的DMEM高糖培養(yǎng)基)培養(yǎng)。這之后，每隔1 d，用誘導(dǎo)液Ⅲ換液，至D10收集細(xì)胞測(cè)定。

大黃酸分為20 μM組(Rh 20 μM)、40μM組(Rh 20 μM)、80 μM組(Rh 20 μM)和0.2% DMSO組(0.2% DMSO)，從誘導(dǎo)分化的D3開(kāi)始給藥。D3藥物溶于誘導(dǎo)液II處理細(xì)胞，D4開(kāi)始，藥物溶于誘導(dǎo)液III處理細(xì)胞，隔天換液，至D10天收集細(xì)胞測(cè)定。

另設(shè)前脂肪細(xì)胞組從誘導(dǎo)分化D0開(kāi)始，用誘導(dǎo)液Ⅲ培養(yǎng)細(xì)胞，隔天換液。

2.4 油紅O染色

3T3-L1前脂肪細(xì)胞接種于24孔板中，第10 d后，吸棄培養(yǎng)液，PBS漂洗2次后用中性甲醛固定30 min。棄固定液，PBS漂洗后加入油紅O工作液，每孔400 μL，室溫染色1 h。吸棄油紅染液，用60%的異丙醇洗去浮色，PBS漂洗后在PBS液中鏡下觀察拍照。拍照結(jié)束，吸棄PBS液，加入4% NP-40(溶于異丙醇中)，溫和振蕩5 min，經(jīng)油紅O染色的3T3-L1脂肪細(xì)胞可溶于4% NP-40溶液中，收集溶液，于540 nm處測(cè)定A值，即可定量測(cè)得油紅O染色脂滴含量。

細(xì)胞分化抑制率(%)=(A對(duì)照組-A藥物組)/A對(duì)照組×100%

2.5 TG含量測(cè)定

誘導(dǎo)分化完成后，細(xì)胞刮刀收集細(xì)胞，2% Triton X-100裂解細(xì)胞，超聲細(xì)胞破碎儀破碎細(xì)胞1 min，參照試劑盒說(shuō)明書，檢測(cè)3T3-L1脂肪細(xì)胞中甘油三酯含量。BCA法測(cè)定蛋白濃度，以mmol/g prot校正細(xì)胞內(nèi)TG含量。

2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)相關(guān)基因的表達(dá)

誘導(dǎo)分化完成后，用Trizol試劑提取各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中的總RNA，超微量核酸分析儀計(jì)算濃度，Revert Aid First Stand cDNA Synthesis Kit合成cDNA，SYBR Select Mast Mix: ABI配制10 μl反應(yīng)體系，采用StepOne Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)3T3-L1脂肪細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)。PCR引物序列(見(jiàn)表1)。以β-actin為內(nèi)參基因，分別計(jì)算各組2-ΔΔCT，表示脂肪細(xì)胞分化轉(zhuǎn)錄因子PPARγ、C/EBPα、FAS的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

表1 PCR引物序列及產(chǎn)物大小

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)用SAS 9.3軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。多組之間的比較用單因素方差分析，方差不齊或兩組之間的比較用t檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)皆以(Means±SD)表示，P<0.05為有顯著性差異。

3 結(jié)果與分析

3.1 大黃酸對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖的影響

由圖1可以看出，大黃酸對(duì)3T3-L1前脂肪增殖有抑制作用。隨著劑量的增大，抑制作用逐漸增強(qiáng)。給藥24 h、48 h、72 h后，大黃酸對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的IC50值分別為187.70 μM、285.44 μM、230.95 μM。由此可見(jiàn)，大黃酸在20～80 μM之間對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的增殖無(wú)明顯影響，由此設(shè)大黃酸20、40、80 μM三個(gè)劑量組，考察大黃酸對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化的影響。

圖1 大黃酸對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖活性的影響(Meams±SD，n=5)注：與Preadipocyte組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3.2 大黃酸對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞分化的影響

3T3-L1脂肪細(xì)胞分化成熟時(shí)，體積增大，細(xì)胞胞漿出現(xiàn)脂滴，經(jīng)過(guò)油紅O染色，呈現(xiàn)“戎環(huán)”樣，是分化成熟的標(biāo)志。如圖3所示，與對(duì)照組比，大黃酸40 μM、80 μM均可以減少脂滴的數(shù)目和體積；將脂滴溶解于NP-40中，測(cè)定OD值可以定量檢測(cè)脂滴積累情況，前脂肪細(xì)胞組細(xì)胞未分化，基本沒(méi)有脂滴出現(xiàn)，大黃酸20 μM、40 μM、80 μM三個(gè)劑量組分別不同程度地抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞的分化。其中大黃酸40 μM、80 μM可顯著地抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞的分化(P<0.05或P<0.01)，抑制率分別為16.47%、51.76%。(見(jiàn)圖2)。

圖2 大黃酸對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞分化的影響(Meams±SD，n=4)注：與Adipocyte組比較，*P<0.05，**P<0.01。

圖3 油紅O染色示意圖(×200)注：A.對(duì)照組；B.Rh 40 μM；C.Rh 80 μM。

3.3 大黃酸對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞TG的影響

從圖4可以看出，前脂肪細(xì)胞組3T3-L1前脂肪細(xì)胞中，TG含量極低。與對(duì)照組相比，大黃酸20 μM、40 μM、80 μM均顯著降低了3T3-L1脂肪細(xì)胞中TG含量(P<0.01，P<0.001)。

圖4 大黃酸對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞TG的影響(Meams±SD，n=3)注：與Adipocyte組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

3.4 大黃酸對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的影響

大黃酸作用于3T3-L1脂肪細(xì)胞后，與對(duì)照組相比，各劑量組均不同程度降低了PPARγ、C/EBPα mRNA的相對(duì)表達(dá)量。其中大黃酸80 μM顯著地降低了3T3-L1脂肪細(xì)胞中PPARγ、C/EBPα的表達(dá)量(P<0.001)。FAS是脂肪細(xì)胞內(nèi)的主要酶，大黃酸給藥干預(yù)后，與對(duì)照組比，20 μM劑量組FAS相對(duì)表達(dá)量增高(P<0.05)，40 μM、80 μM兩個(gè)劑量組FAS的表達(dá)量顯著降低(P<0.01或P<0.001)見(jiàn)圖5。

圖5 大黃酸對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的影響(Meams±SD，n=3)注：與Adipocyte組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

4 討論

脂肪是生物體內(nèi)能量貯存的主要形式，具有極其重要的生理功能，與機(jī)體的代謝密切相關(guān)，脂肪細(xì)胞分化異常可引起脂肪過(guò)多的積聚，從而導(dǎo)致肥胖、心血管疾病及糖尿病等的發(fā)生[13]。大黃酸干預(yù)3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化結(jié)果顯示，大黃酸20 μM、40 μM、80 μM均可以顯著地抑制3T3-L1細(xì)胞的分化，減少胞漿中的脂滴的積聚；對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞中TG含量定量檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，大黃酸20 μM、40 μM、80 μM顯著地降低細(xì)胞中TG含量，隨著劑量增大，抑制作用增強(qiáng)，在降脂方面具有研究?jī)r(jià)值。

3T3-L1前脂肪細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化過(guò)程需經(jīng)過(guò)細(xì)胞融合前增殖、融合/生長(zhǎng)停滯、激素誘導(dǎo)/克隆擴(kuò)增、永久性生長(zhǎng)停滯/分化這四個(gè)階段，最終分化成為脂肪細(xì)胞[14]。3T3-L1脂肪細(xì)胞分化過(guò)程，受到多種激素、基因以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控。眾多轉(zhuǎn)錄因子PPARs、C/EBPs、aP2、LPL等參與脂肪細(xì)胞分化過(guò)程。PPAR和C/EBPα在調(diào)控中起決定性的作用[15-16]。在誘導(dǎo)分化早期，C/EBPβ與C/EBPδ是最早表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，能夠誘導(dǎo)PPARγ及C/EBPα的表達(dá)[17-18]，誘導(dǎo)分化的第2天，PPARγ、C/EBPα基因開(kāi)始表達(dá)，3～5天后達(dá)到高峰[15,19]。PPARγ是棕色、白色脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中必須的調(diào)控因子[20]，在胰島素抵抗、動(dòng)脈粥樣硬化、脂質(zhì)代謝與糖代謝、脂肪細(xì)胞分化和能量平衡方面起著重要的調(diào)節(jié)作用[21]，能夠調(diào)節(jié)C/EBP、脂代謝關(guān)鍵酶、以及轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等的表達(dá)，進(jìn)而影響脂肪細(xì)胞分化進(jìn)程。C/EBPα是CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白(C/EBPs)家族的重要成員，參與前脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控[22]，只有PPARγ存在的條件下，C/EBPα才能誘導(dǎo)成脂化發(fā)生，而當(dāng)不表達(dá)PPARγ時(shí)，C/EBPα不能促使脂化發(fā)生[23]，同時(shí)PPARγ能夠刺激前脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞，與脂肪形成密切相關(guān)。為進(jìn)一步探討大黃酸抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞分化的作用機(jī)制，在誘導(dǎo)分化的第3 d給予大黃酸干預(yù)，考察大黃酸對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞早期標(biāo)記因子PPARγ和C/EBPα mRNA表達(dá)的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大黃酸80 μM能夠顯著下調(diào)脂肪誘導(dǎo)分化轉(zhuǎn)錄因子PPARγ和C/EBPα mRNA的表達(dá)，這可能是大黃酸抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化的機(jī)制之一。

FAS主要存在于肝臟、脂肪等組織中，在體內(nèi)催化單酰輔酶A和丙二酰輔酶A結(jié)合成長(zhǎng)鏈脂肪酸，是合成脂肪酸的關(guān)鍵酶[24]，與肥胖等疾病密切相關(guān)。研究表明，高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠脂肪組織FAS的mRNA水平升高，而肥胖抵抗的大鼠脂肪組織FAS的mRNA的表達(dá)顯著降低[25]。FAS出現(xiàn)在脂肪分化的中后期，當(dāng)脂肪細(xì)胞分化時(shí)，脂滴增多，F(xiàn)AS表達(dá)增加[26]，F(xiàn)AS也是PPARγ下游涉及脂類存儲(chǔ)和調(diào)節(jié)脂代謝的靶基因[27-28]，受PPARγ的調(diào)控，增加脂肪細(xì)胞中脂滴的積聚，大黃酸40 μM、80 μM能夠顯著降低FAS mRNA的表達(dá)，表明大黃酸通過(guò)降低FAS mRNA的表達(dá)，從而抑制胞漿內(nèi)脂質(zhì)積累，減少了前脂肪細(xì)胞向脂肪細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。

綜上所述，大黃酸能夠抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，降低細(xì)胞內(nèi)TG含量，下調(diào)脂肪分化相關(guān)基因PPARγ、C/EBPα、FAS mRNA的表達(dá)，在降血脂、防治心血管疾病方面具有潛在價(jià)值。但體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)還是存在一定差異，因此進(jìn)一步研究大黃酸對(duì)于脂質(zhì)代謝的影響，探討其在體內(nèi)作用機(jī)制具有重要的意義。

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Effect of Rhein on 3T3-L1 Preadipocyte Differentiation and Related Gene Expression

LI Jia-jia, LIANG Yao-yue, DONG Shi-fen, YANG Rong-fang, XIAO Cong-rui, WANG Jing*

(SchoolofChinesePharmacy,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China)

Objective:The effect of rhein (1,8-dihydroxy-3-carboxyanthraquinone，Rhein，Rh) on the proliferation and differentiation of 3T3-L1 adipocyte and the related gene mRNA expression was investigated. Method:MTT assay was used to detect 3T3-L1 cell proliferation by rhein (5,10,20,40,80,160 μM), rhein intervention 3T3-L1 adipocytes induced differentiation, oil red O staining and colorimetric analysis of the impact of rhein on 3T3-L1 adipocyte differentiation process of the accumulation of lipid droplets in the cytoplasm, biochemical detected rhein 3T3-L1 adipocytes triglyceride (TG). The expression of CCAAT enhancer binding proteins (C/EBPα), fatty acid synthetase (FAS), peroxisome proliferators activated receptor γ (PPARγ) genes was measured by real-time PCR. Results:The results showed that rhein(20,40,80 μM) could inhibit adipocyte differentiation and reduce intracellular TG content in a dose-dependent manner. Furthermore, rhein down-regulated the mRNA expression of C/EBPα, FAS, and PPARγ genes. Conclusion:Rhein can inhibit the differentiation of 3T3-L1 adipocytes,and the mechanism of action may be related to reducing adipose differentiation-related gene PPARγ,C/EBPα and FAS expression.

Rhein; 3T3-L1 preadipocytes; Proliferation and differentiation; Gene expression

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81503287，81430094)；教育部博士點(diǎn)基金項(xiàng)目(No.20130013120002)

李佳佳(1990-)，女，碩士，主要研究方向：中藥防治心腦血管疾病的研究。

王晶*(1973-)，女，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要研究方向：中藥防治心腦血管疾病的研究。

2016-08-16

R285.5

A

1002-2406(2017)01-0001-05

修回日期：2016-09-10