癸壬化石丸對(duì)大鼠亞急性毒性實(shí)驗(yàn)研究

黃雨佳盧興鳳武偉楊樹(shù)娟萬(wàn)婕袁葉飛　唐喻瑩　劉勇劉珉甬

【摘 要】 目的：通過(guò)癸壬化石丸對(duì)大鼠亞急性毒性實(shí)驗(yàn)研究評(píng)價(jià)其安全性，為新藥開(kāi)發(fā)和臨床安全用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：將20只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組用50%吐溫80+生理鹽水灌胃3mL/（次·d）；實(shí)驗(yàn)組將癸壬化石丸浸膏+50%吐溫80+生理鹽水配置成濃度05g/mL混懸液（相當(dāng)于生藥濃度285g/mL），灌胃3mL/（次·d），連續(xù)給藥14d。觀察大鼠一般情況（血尿、大便、活動(dòng)度、體重、進(jìn)食量及死亡）；血液生化檢測(cè)ALT、AST、AST/ALT、Urea；大體解剖觀察心、肺、肝、腎外觀有無(wú)異常；HE染色光鏡下觀察肝、腎組織有無(wú)病理改變。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組一般情況比較：均無(wú)血尿，活動(dòng)度、大便性狀無(wú)異常，進(jìn)食量呈同步變化，體重變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）；血液生化各項(xiàng)指標(biāo)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）；肉眼觀察兩組大鼠心、肺、肝、腎無(wú)異常改變；光鏡觀察實(shí)驗(yàn)組僅見(jiàn)肝細(xì)胞輕度水腫；腎小管上皮輕度水腫，局灶可見(jiàn)空泡變性，間質(zhì)少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)論：在本實(shí)驗(yàn)條件下，癸壬化石丸無(wú)明顯的亞急性毒性，安全性較高。

【關(guān)鍵詞】 癸壬化石丸；大鼠；腎結(jié)石；亞急性毒性

【中圖分類號(hào)】R2855 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）23-0046-03

腎結(jié)石是泌尿系統(tǒng)常見(jiàn)病，發(fā)病率在15%左右，尤其是中國(guó)川南地區(qū)發(fā)病率極高[1]，且采用手術(shù)治療術(shù)后再發(fā)率高達(dá)50%左右[2-3]。西藥枸櫞酸鹽、鎂制劑、磷酸鹽、乙酰半胱氨酸等對(duì)結(jié)石直徑>06cm的患者效果不明顯，且副作用較大。癸壬化石丸治療腎結(jié)石在川南地區(qū)經(jīng)較長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用，臨床效果顯著，擬開(kāi)發(fā)為國(guó)家新藥。前期試驗(yàn)研究結(jié)果表明[4]，癸壬化石丸對(duì)大鼠的急性毒性經(jīng)口LD50>500g/kg，按急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，該受試物為無(wú)毒級(jí)。本研究進(jìn)行大鼠的亞急性毒性試驗(yàn)，旨在進(jìn)一步探討癸壬化石丸的毒性作用，對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)，為臨床提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

11 材料

111 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠20只，體重（200±20）g，雌雄各半，西南醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（川）2013-17。

112 藥物 生理鹽水（批號(hào)：15042343，美大康佳樂(lè)藥業(yè)）；5%吐溫80 （批號(hào)：080928，成都金山化學(xué)試劑）；癸壬化石丸浸膏（西南醫(yī)科大附屬中醫(yī)院制備）；戊巴比妥鈉（批號(hào)：F20050405，上?；瘜W(xué)）。

12 方法 前期采用限量實(shí)驗(yàn)，癸壬化石丸對(duì)大鼠的急性毒性經(jīng)口LD50>500g/kg，按急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，該受試物為無(wú)毒級(jí)。對(duì)照組用50%吐溫80+生理鹽水灌胃3mL/（次·d），連續(xù)14d。實(shí)驗(yàn)組用癸壬化石丸最大使用濃度灌胃，即癸壬化石丸浸膏+50%吐溫80+生理鹽水配置成05g/mL混懸液（相當(dāng)于生藥濃度285g/mL）灌胃3mL/（次·d），連續(xù)14d。每次癸壬化石丸浸膏灌胃劑量約75g/kg，相當(dāng)于3375g生藥/kg。

13 觀察指標(biāo)

131 一般情況 每天觀察記錄大鼠有無(wú)血尿，大便情況，活動(dòng)度，體重變化、進(jìn)食量及有無(wú)死亡。

132 血液生化 實(shí)驗(yàn)第15d用3%戊巴比妥鈉腹腔麻醉后，經(jīng)眼眶靜脈采血查ALT、AST、AST/ALT、Urea。

133 組織病理學(xué) 大鼠采血后斷頸處死并解剖，肉眼觀察心、肝、腎、肺外形、體積、顏色有無(wú)異常；將肝、腎用10%甲醛固定、石蠟包埋切片、HE染色后光鏡下觀察肝組織結(jié)構(gòu)、肝細(xì)胞，腎小管結(jié)構(gòu)、腎實(shí)質(zhì)改變。

14 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS190統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，兩組間均數(shù)比較采用兩獨(dú)立樣本成組t檢驗(yàn)和重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析，P<005表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

21 一般情況 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均無(wú)血尿、大便性狀正常、活動(dòng)度正常。實(shí)驗(yàn)組2只、對(duì)照組1只大鼠在灌胃后立即死亡，解剖觀察各臟器無(wú)異常改變，僅見(jiàn)胸腔內(nèi)約有2mL灌胃液，分析系灌胃溶液誤入氣管導(dǎo)致窒息死亡。對(duì)比進(jìn)食量，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組進(jìn)食量呈同步變化（見(jiàn)圖1）。隨時(shí)間推移，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組體重較前均穩(wěn)定增長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005），兩組平均體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005），時(shí)間與干預(yù)因素不存在交互作用（P>005），表明癸壬化石丸對(duì)體重?zé)o明顯影響。

22 血液生化 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。

23 肉眼觀察各臟器 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組心、肝、腎、肺外形、體積、顏色無(wú)異常。

24 病理組織檢查 對(duì)照組肝、腎均正常（見(jiàn)圖2、圖3）；實(shí)驗(yàn)組肝組織結(jié)構(gòu)基本正常，僅見(jiàn)肝細(xì)胞輕度水腫；腎小管結(jié)構(gòu)正常，皮髓質(zhì)分界清，腎小管上皮輕度水腫，局灶可見(jiàn)空泡變性，間質(zhì)少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)（見(jiàn)圖4、圖5）。

3 討論

中醫(yī)認(rèn)為腎結(jié)石本虛標(biāo)實(shí)，頑固難愈，非一般草木之品所能宣達(dá)，必借蟲(chóng)類走竄之品搜剔竄透，方能濁開(kāi)凝去，邪去正復(fù)。癸壬化石丸是根據(jù)中醫(yī)藥“清熱利濕，化瘀通絡(luò)，補(bǔ)益肝腎等法于一方，攻補(bǔ)兼施，溶排相合”理論，結(jié)合現(xiàn)代生物學(xué)研究，根據(jù)腎結(jié)石的特點(diǎn)研制的內(nèi)服中藥。前期研究表明癸壬化石丸無(wú)明顯毒副作用，為進(jìn)一步評(píng)價(jià)其安全性，開(kāi)展了本次研究。

動(dòng)物排尿、排便、活動(dòng)、進(jìn)食量、體重變化是綜合反映藥物毒性對(duì)機(jī)體代謝、健康狀況影響的基本指標(biāo)，本次實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組大鼠均未見(jiàn)血尿，大便性狀、活動(dòng)度正常，體重穩(wěn)定增長(zhǎng)，進(jìn)食量呈同步變化，表明癸壬化石丸經(jīng)口按劑量3375g生藥/kg灌胃，連續(xù)給藥14d對(duì)大鼠生長(zhǎng)代謝無(wú)明顯影響（P<005）。肝臟是外源化合物在體內(nèi)進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化的主要器官，由外源性化合物引起動(dòng)物肝臟損害時(shí)，會(huì)引起動(dòng)物血清中一系列相關(guān)酶的變化。腎臟是外源化合物及其代謝產(chǎn)物的主要排泄器官，也是本實(shí)驗(yàn)受試藥物的主要作用靶器官，通過(guò)對(duì)腎臟功能生化指標(biāo)的檢測(cè)，可了解受試藥物對(duì)腎臟功能的影響。本研究結(jié)果顯示對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、ALT/AST、尿素（Urea）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005），說(shuō)明癸壬化石丸連續(xù)給藥14d對(duì)大鼠肝腎功能無(wú)影響。內(nèi)臟是機(jī)體發(fā)揮生理功能的場(chǎng)所，其組織結(jié)構(gòu)的改變將對(duì)機(jī)體正常生理功能的發(fā)揮產(chǎn)生影響。病理組織檢查顯示實(shí)驗(yàn)組肝臟、腎臟有輕度細(xì)胞水腫，腎小管上皮局灶可見(jiàn)空泡變性，間質(zhì)少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，均屬可逆性改變，提示癸壬化石丸浸膏給藥劑量75g/kg，連續(xù)給藥14d對(duì)大鼠肝、腎臟產(chǎn)生了一定影響，發(fā)生機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

在上述實(shí)驗(yàn)條件下，癸壬化石丸浸膏灌胃的安全劑量約為75g/kg，相當(dāng)于3375g生藥/kg，相當(dāng)于人臨床用量的20250倍（人臨床用量為100g/60kg），連續(xù)經(jīng)口給藥14d對(duì)大鼠的體重、血液生化指標(biāo)等均無(wú)明顯影響，而在該劑量范圍內(nèi)對(duì)大鼠心、肝、腎、肺等臟器組織也無(wú)可見(jiàn)病變損傷，因此癸壬化石丸無(wú)明顯的亞急性毒性，安全性較高。

參考文獻(xiàn)

[1]師晶麗.中醫(yī)腎病臨床實(shí)踐[M].貴陽(yáng)：貴州科學(xué)技術(shù)出版社，2012：53-324.

[2]朱軍，沈玉華，謝安建，等.草酸鈣型尿結(jié)石的研究進(jìn)展[J].化學(xué)世界，2007，3：175-178.

[3]周向文，黃冬梅，呂建新.中醫(yī)藥治療泌尿系結(jié)石臨床研究進(jìn)展亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥[J].2011，4：151-152.

[4]張廣平，葉祖光.有毒中藥的“毒性”與毒性分級(jí)[J].世界中醫(yī)藥， 2014 ，9 （2）：175-177.

（編輯：梁志慶）