美洲大蠊提取物CⅡ—3對(duì)家兔血常規(guī)及抗氧化活性的影響

邵維莉吳道勛彭芳劉光明　陳俊雅　王濤

【摘 要】 目的：研究美洲大蠊提取物CⅡ-3對(duì)正常家兔血常規(guī)和血清抗氧化能力的影響。方法：給予正常家兔高（16mg/kg）、中（8mg/kg）、低（4mg/kg）耳緣靜脈注射CⅡ-3，對(duì)各劑量組血常規(guī)和血清中抗氧化因子活性進(jìn)行測定。結(jié)果：單次給藥后，高劑量CⅡ-3能夠明顯降低正常家兔血液中白細(xì)胞、紅細(xì)胞的數(shù)量（P<005）；多次給藥后，與NS組比較，CⅡ-3對(duì)CAT、MPO的含量及T-AOC活性均有一定的提高作用（P<005）。結(jié)論：美洲大蠊提取物CⅡ-3具有一定的抗炎和抗氧化活性。

【關(guān)鍵詞】 美洲大蠊；血常規(guī)；抗炎；抗氧化

【中圖分類號(hào)】R967 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）23-0036-03

美洲大蠊（Periplaneta americana L.）為蜚蠊目蜚蠊科昆蟲，俗稱蟑螂。據(jù)《本草綱目》記載，蟑螂以干燥或新鮮全體入藥，有活血化瘀、解毒消疳、利水消腫等功效[1]。自20世紀(jì)70年代以來，國內(nèi)外學(xué)者從其體內(nèi)分離純化出多種活性物質(zhì)，如與組織再生有關(guān)的p10蛋白[2]、促進(jìn)血細(xì)胞吸收感染細(xì)菌的防御型分子脂多糖結(jié)合蛋白[3]以及具有利尿作用的多肽[4]等。并開發(fā)了美洲大蠊系列昆蟲藥品，如康復(fù)新液、心脈隆注射液和肝龍膠囊等[5]。實(shí)驗(yàn)通過測定美洲大蠊醇提取物CⅡ-3對(duì)家兔外周血細(xì)胞因子和血清液中抗氧化因子的含量，進(jìn)一步闡明美洲大蠊的抗炎及抗氧化作用，為其進(jìn)一步研究提供參考。

1 儀器與材料

11 美洲大蠊提取物的制備 受試藥物CⅡ-3（批號(hào)：20140823，由大理大學(xué)藥學(xué)院劉光明教授提供）為棕褐色凍干粉末，其制備過程如下：用溶劑提取粉碎后的美洲大蠊蟲體干品，濃縮回收溶劑，得到的濃縮液經(jīng)大孔吸附樹脂材料柱層析，水洗，然后用醇溶劑洗脫，所得洗脫液經(jīng)減壓濃縮至無醇味，干燥后得到產(chǎn)品CⅡ-3[6]。實(shí)驗(yàn)前受試藥物用生理鹽水分別配制成不同濃度的藥液，然后用022 μm的微孔濾膜進(jìn)行過濾滅菌。

12 動(dòng)物與試劑 家兔42只，體重15～20kg，由大理大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SYXK（滇）2011-0004，普通級(jí)別。過氧化氫酶（CAT，批號(hào)：20150707）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px，批號(hào)：20150421）、髓過氧化物酶（MPO，批號(hào)：20150415）、總抗氧化能力（T-AOC，批號(hào)：20150706）等試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；XFA6000動(dòng)物血細(xì)胞分析儀用稀釋液（批號(hào)：PD1501）、HB探針清洗液（批號(hào)：PB9407）；ANI-3D溶血?jiǎng)ㄅ?hào)：PF2402）；HB含酶清洗液（批號(hào)：PB7501）等購自南京普朗醫(yī)療設(shè)備有限公司。

13 儀器 TL-16R高速冷凍離心機(jī)（上海市離心機(jī)機(jī)械研究所）；EMP-168G半自動(dòng)生化分析儀（深圳市恩普電子技術(shù)有限公司）；XFA6000全自動(dòng)動(dòng)物血細(xì)胞分析儀（南京普朗醫(yī)療設(shè)備有限公司）。

2 方法

21 單次給藥對(duì)家兔血細(xì)胞含量的影響 體重15～20kg健康雄性家兔18只，隨機(jī)分為3組，每組6只，即CⅡ-3高（16mg/kg）、中（8mg/kg）、低（4mg/kg）劑量組。各組家兔按給藥量2mL/kg通過耳緣靜脈給藥1次，分別于給藥前，給藥后5、15、30、60、120、240min耳緣靜脈采血20μL，全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀上檢測不同時(shí)間點(diǎn)家兔血液中白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板等含量的變化。

22 連續(xù)給藥對(duì)家兔血清中抗氧化因子含量的影響 體重15～20kg健康雄性家兔24只，按體重隨機(jī)分為4組，每組6只，分別為3個(gè)給藥組（與21中相同）和1個(gè)生理鹽水對(duì)照組（NS組）。給藥組家兔每日耳緣靜脈給藥，給藥量均為2mL/kg，NS組給予生理鹽水，連續(xù)給藥5d。末次給藥后24 h，心臟采血5 mL，并分離血清，參照試劑盒說明書分別測定血清中過氧化氫酶（Catalase；CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（Myeloperoxidase；GSH-PX）、髓過氧化物酶（Myeloperodidase；MPO）的含量以及血清總抗氧化能力（Total Antioxidant Capacity ；T-AOC）的活性。

23 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS170分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，單次給藥數(shù)據(jù)采用配對(duì)t檢驗(yàn)，多次給藥數(shù)據(jù)均數(shù)的比較用單因素方差分析，P<005為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

31 單次給藥美洲大蠊提取物CⅡ-3對(duì)家兔血細(xì)胞含量的影響

311 單次給藥后CⅡ-3對(duì)家兔白細(xì)胞含量的影響 與給藥前比較，給藥后30、60min時(shí)，高劑量組家兔血液中白細(xì)胞含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。結(jié)果見表1。

312 單次給藥CⅡ-3對(duì)家兔紅細(xì)胞含量的影響 與給藥前比較，給藥后240min時(shí)高劑量CⅡ-3組紅細(xì)胞數(shù)量的減少較明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。結(jié)果見表 2。

313 單次給藥CⅡ-3對(duì)家兔血小板含量的影響 與給藥前比較，CⅡ-3各劑量組對(duì)家兔血小板的影響不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。結(jié)果見表 3。

32 多次給藥CⅡ-3對(duì)正常家兔血清中抗氧化因子含量的影響 與NS組比較，CⅡ-3能夠明顯增強(qiáng)正常家兔血清中MPO的活性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。低劑量、中劑量CⅡ-3能使血清中CAT的含量顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005），中劑量CⅡ-3還可以顯著提高血清中T-AOC的活性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；另外，高劑量CⅡ-3也能提高血清中GSH-PX的含量，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。結(jié)果見表4。

4 討論

血常規(guī)檢查是血液細(xì)胞部分的檢查，也是臨床一項(xiàng)基本的常規(guī)檢查[7-8]。根據(jù)其數(shù)量和分布的變化，可以作為疾病診斷的輔助手段。紅細(xì)胞各項(xiàng)參數(shù)出現(xiàn)異常時(shí)，可對(duì)一些疾病的診斷提供依據(jù)。白細(xì)胞可以保護(hù)機(jī)體避免各種病毒性和細(xì)菌性感染，以及其他異物的入侵[9]。有證據(jù)表明[10]，血小板對(duì)急性炎癥和損傷，包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腦型瘧和急性肺損傷等起主要作用。試驗(yàn)中，高劑量CⅡ-3能夠降低正常家兔血液中白細(xì)胞、紅細(xì)胞的數(shù)量，提示其具有一定的抗炎作用。

過氧化氫酶（CAT）能夠刺激H2O2生成水并且可以清除機(jī)體氫過氧化物，且過氧化氫酶利用H2O2可以氧化一些毒素，包括酚類、甲酸、甲醛和酒精等[11]。過氧化氫作為機(jī)體代謝過程中產(chǎn)生的廢物，能夠?qū)C(jī)體造成損害。為了避免這種損害，過氧化氫必須被快速地轉(zhuǎn)化為其他無害或毒性較小的物質(zhì)，而過氧化氫酶就是常常被細(xì)胞用來催化過氧化氫分解的工具。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與NS組相比，低、中劑量CⅡ-3能夠明顯增強(qiáng)家兔血清中過氧化物酶的活力（P<005）。谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的抗氧化酶，它在信號(hào)平衡、免疫調(diào)節(jié)[12]，以及清除氫過氧化物，避免氧化損傷中發(fā)揮重要作用[13-14]。實(shí)驗(yàn)中，中、高劑量CⅡ-3可以增加家兔血清中谷胱甘肽過氧化物酶的含量。髓過氧化物酶（MPO）存在于吞噬細(xì)胞中，是抗微生物系統(tǒng)和炎癥調(diào)節(jié)的基本成分[15]，其活性的變化可對(duì)早期組織損傷做出較敏感的反應(yīng)[16]。作為中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的標(biāo)志酶[17]，其水平與細(xì)胞數(shù)量成正比，與血常規(guī)中的中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞數(shù)的增加一致；且根據(jù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，各劑量CⅡ-3均能明顯提高家兔血清中MPO的活性（P<005）。而從整體抗氧化水平而言，總抗氧化能力（T-AOC）對(duì)防御體的抗氧化作用主要通過消除自由基和活性氧，分解過氧化物，去除催化作用的金屬離子等來實(shí)現(xiàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，中劑量CⅡ-3能夠明顯增加家兔血清中T-AOC水平（P<005）。根據(jù)所測定家兔血清中抗氧化因子的活性和水平，可以認(rèn)為CⅡ-3具有一定的體內(nèi)抗氧化作用。

實(shí)驗(yàn)通過對(duì)正常家兔外周血細(xì)胞含量及抗氧化因子進(jìn)行測定，結(jié)果顯示，給予美洲大蠊提取物CⅡ-3后，正常家兔血液中白細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)量減少，對(duì)抗氧化因子MPO、CAT、GSH-PX、T-AOC具有一定的提高作用，從而表明美洲大蠊提取物CⅡ-3具有一定的抗炎、抗氧化作用，這一結(jié)果將為美洲大蠊的下一步研究提供理論依據(jù)。

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