防風(fēng)配方顆粒的提取工藝優(yōu)化以及含量測定

趙粉榮　劉斌　田志杰

【摘 要】 目的：優(yōu)選防風(fēng)配方顆粒的提取工藝，建立升麻素苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量測定方法，為有效控制該制劑的質(zhì)量提供參考。方法：以升麻素苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷提取量和出膏率為評價指標(biāo)，采用正交試驗考察加水量、提取時間和提取次數(shù)對防風(fēng)配方顆粒提取工藝的影響。采用HPLC 測定升麻素苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷含量。結(jié)果：最佳提取工藝為浸泡05h，加10、8、6倍量水提取3次，每次05h；升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷分別在624～624μg、568～568μg與峰面積呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率依次為9963%、9975%，RSD分別為013%、104%。結(jié)論：該提取工藝和含量測定方法穩(wěn)定可行，有效成分提取效率高，為防風(fēng)配方顆粒的生產(chǎn)和質(zhì)量控制提供參考。

【關(guān)鍵詞】 防風(fēng)配方顆粒；升麻素苷；5-O-甲基維斯阿米醇苷；浸膏得率； 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

【中圖分類號】R2842 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）23-0024-03

防風(fēng)是常用中藥，為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikovia divaricata（Turcz.）Schischk的干燥根。具有祛風(fēng)解表，勝濕止痛，止痙之功效。用于感冒頭痛，風(fēng)濕麻痹，風(fēng)疹瘙癢，破傷風(fēng)。春、秋二季采挖未抽花莖植株的根，除去須根和泥沙，曬干[1]。主要成分有升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷等?！吨袊幍洹罚?015年版）規(guī)定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷為防風(fēng)藥材質(zhì)量控制的指標(biāo)成分。防風(fēng)配方顆粒是將防風(fēng)飲片經(jīng)現(xiàn)代制藥工藝提取、濃縮、干燥、制粒而成的顆粒劑。目前有關(guān)防風(fēng)配方顆粒的工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究尚未有報道，但配方顆粒研究前景廣闊。故本實驗通過正交試驗，利用HPLC測定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量，并結(jié)合干浸膏得率作為質(zhì)量指標(biāo)，優(yōu)選防風(fēng)藥材水提取的最佳工藝，為中藥防風(fēng)配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考。

1 儀器與材料

11 儀器 高效液相色譜儀（島津）；BP211D 型電子天平（德國 Sautoris 公司）；KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

12 材料 升麻素苷對照品（批號：111522-201511 中國食品藥品檢定研究院）；5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品（批號：111523-201509 中國食品藥品檢定研究院）；防風(fēng)藥材（安國義通中藥材有限公司），甲醇（色譜純），水（超純水）。

2 方法與結(jié)果

21 配方顆粒的制備 稱取防風(fēng)藥材，按優(yōu)選的工藝條件提取，合并煎液，濃縮后干燥，得干浸膏粉，粉碎過3號篩，加入適量輔料，混勻，經(jīng)過制粒、整粒，得防風(fēng)配方顆粒。

22 高效液相色譜含量測定

221 色譜條件 十八硅烷鍵合硅膠為填充劑C18色譜柱（ 46mm×250mm，5μm），流動相：甲醇-水（40∶60），流速10mL·min-1，檢測波長254nm，理論板數(shù)按升麻素苷峰計算應(yīng)不低于2000。

222 對照品溶液的制備 精密稱取升麻素苷對照品312mg，5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品284mg，加甲醇溶解并定容至50mL，分別制成624μg·mL-1和568μg·mL-1對照品溶液，備用。

223 供試品溶液的制備 取本品顆粒適量，研細(xì)，取約05g，精密稱定，置50mL錐形瓶中，精密加入80%甲醇20mL，稱定重量，超聲處理15min，取出，放冷，用80%甲醇補足減失重量，濾過，取續(xù)濾液，得供試品溶液。見圖1。

224 檢測波長的選擇 取升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液在200～400nm進(jìn)行全波長掃描，結(jié)果顯示在254nm處有最大吸收且靈敏度最高， 故確定其檢測波長254nm。

23 線性關(guān)系考察 精密吸取升麻素苷（624μg·mL-1）和5-O-甲基維斯阿米醇苷（568μg·mL-1）對照品溶液100mL、200mL、400mL、600mL、800mL、100mL，分別置10mL量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按221項下色譜條件測定，以峰面積為縱坐標(biāo)，樣品含量為橫坐標(biāo)，得回歸方程依次為Y=119530X+74362，R2=09997（n=6），Y =121669X + 42184， R2=09997（n=6），結(jié)果表明升麻素苷在624～624 μg范圍、5-O-甲基維斯阿米醇苷在568～568μg范圍呈良好的線性關(guān)系。

24 精密度試驗 精密吸取升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣 6 次，按221項下色譜條件測定，計算峰面積的RSD為分別039%與045%，表明儀器精密度良好。

25 重復(fù)性試驗 精密稱取同一批樣品，按223項下方法制備供試品溶液，共6份，按221項下色譜條件測定，計算峰面積的RSD分別為044%與042%，表明該方法重復(fù)性良好。

26 穩(wěn)定性試驗 精密取同一供試品溶液10μL，按0h、1h、2h、4h、8h、10h時間間隔，分別進(jìn)樣分析，測定色譜峰面積。結(jié)果表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好，其RSD分別為113%與111%。

27 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的防風(fēng)配方顆粒樣品約025g，共6份，分別精密加入升麻素苷對照溶液10mL（濃度為624μg·mL-1），或5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液6mL（濃度為568μg·mL-1），按上述色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果見表1、2。平均加樣回收率9963%與9975%，RSD為013%與104%，表明樣品回收率良好。

3 提取工藝的正交試驗

31 正交設(shè)計 在預(yù)試驗基礎(chǔ)上，固定浸泡時間05 h，選擇加水量（A）、提取時間（B）、提取次數(shù)（C）作為考察因素。以升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的總含量和出膏率為評價指標(biāo)。采用L9（34） 正交表設(shè)計，因素水平詳見表3。

32 實驗方法 取內(nèi)蒙防風(fēng)藥材9份，每份40 g，按表4設(shè)計的工藝條件進(jìn)行提取，合并水煎煮提取液，濾過，水煎液均定容到1000mL容量瓶中，備用。從定容到1000mL的水煎液中吸取5mL至25mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。用微孔濾膜濾過，取濾液，進(jìn)樣，測定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷總含量。

33 正交試驗結(jié)果及方差分析 按上述實驗方法進(jìn)行正交試驗得到9份供試品溶液，按照含量測定方法進(jìn)行含量測定，并計算總含量。正交試驗結(jié)果見表4，方差分析結(jié)果見表5。

由直觀分析可知， 各因素影響提取效果的順序為C>B>A。方差分析表明因素C對提取工藝具有顯著性影響，其他因素則影響不明顯，考慮大生產(chǎn)節(jié)約成本等因素，最佳提取工藝條件為A1B1C3，即加10、8、6倍量水提取3次，每次05h。

34 優(yōu)選工藝的驗證試驗 按最佳提取工藝進(jìn)行了3次驗證試驗，取防風(fēng)藥材500g，結(jié)果升麻素苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0506%、0509%、0528%，5-O-甲基維斯阿米醇苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0357%、0350%、0381%，出膏率依次為419%、445%、438%， 說明該工藝穩(wěn)定可行。因此，確定防風(fēng)配方顆粒提取工藝為：加10、8、6倍量水提取3次，每次05h。

4 配方顆粒樣品含量測定

按照最優(yōu)提取工藝，制備出防風(fēng)配方顆粒。精密稱取防風(fēng)配方顆粒約05 g，按223項下方法制備供試品溶液，按221項下色譜條件測定，計算升麻素苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為237、229、232 mg·g-1，5-O-甲基維斯阿米醇苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為131 、128、139mg·g-1，故暫定本品配方顆粒每1g含升麻素苷（ C22H28O11）和5-O-甲基維斯阿米醇苷（C22H28O10）總量不得少于30 mg。

5 討論

對于原料藥材飲片的選擇，是中藥配方顆粒研制、生產(chǎn)、開發(fā)和應(yīng)用等最根本的前提的前提條件，只有在確保了原料藥材的質(zhì)量的基礎(chǔ)上，才能保證和提高穩(wěn)定中藥配方顆粒的質(zhì)量[2]。由于條件有限，本研究只收集了兩個不同產(chǎn)地的品種進(jìn)行含量測定等一系列的對比考察研宄，通過研究發(fā)現(xiàn)兩個不同產(chǎn)地的品種含有效成分總含量差別不大。

防風(fēng)配方顆粒的水提工藝直接關(guān)系到配方顆粒的質(zhì)量，以出膏率和升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量作為衡量指標(biāo)，初步評價了工藝的提取效果，結(jié)果表明煎煮時間和加水量對工藝的影響較小，而煎煮次數(shù)對其二者的含量和出膏率有顯著的影響，是該飲片提取工藝的重要因素。目前由于防風(fēng)配方顆粒樣品數(shù)量較少，有待于后續(xù)試驗數(shù)據(jù)的積累，制定了升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的限量范圍，使該制劑的質(zhì)量更加穩(wěn)定可靠，為有效控制防風(fēng)配方顆粒的質(zhì)量提供保證。

參考文獻(xiàn)

[1]國家藥典委員會中華人民共和國藥典（一部）[S]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社， 2010： 239.

[2]涂瑤生，畢曉黎，羅文匯. 中藥配方顆粒的質(zhì)量控制研究[J].世界科學(xué)技術(shù)中醫(yī)藥現(xiàn)代化思路與方法，2011，13（1）：41.

（編輯：程鵬飛）