法醫(yī)毒物學(xué)的發(fā)展與挑戰(zhàn)

向平，沈敏

（司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所上海市法醫(yī)學(xué)重點實驗室，上海200063）

法醫(yī)毒物學(xué)的發(fā)展與挑戰(zhàn)

向平，沈敏

（司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所上海市法醫(yī)學(xué)重點實驗室，上海200063）

科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步和鑒定實踐的需求促進(jìn)了法醫(yī)毒物學(xué)的迅猛發(fā)展。綜述了法醫(yī)毒物學(xué)的最新發(fā)展動態(tài)。法醫(yī)毒物鑒定已趨向于按照案件性質(zhì)進(jìn)行分類分析，如體外毒品鑒定、毒品濫用鑒定、影響行為能力的酒駕毒駕認(rèn)定、麻醉搶劫及性犯罪等藥物影響下犯罪、中毒死亡鑒定等；新型生物檢材如口腔液、指甲、干血點等和新型精神活性物質(zhì)成為研究熱點；隨著樣品前處理技術(shù)和質(zhì)譜等技術(shù)的發(fā)展，毒藥物的檢測能力獲得很大的提升；毒物鑒定結(jié)果的解釋和評判雖然非常復(fù)雜，但必須繼續(xù)，也越來越受到重視。最后，分析我國毒物學(xué)實驗室的現(xiàn)狀，闡述了面臨的挑戰(zhàn)以及改進(jìn)策略。

司法鑒定；法醫(yī)毒物學(xué)；發(fā)展；挑戰(zhàn)

法醫(yī)毒物學(xué)是運用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)對體內(nèi)外毒藥物進(jìn)行分析和評判，為刑事偵查提供技術(shù)服務(wù)、為法律訴訟提供證據(jù)證明的綜合性、應(yīng)用性學(xué)科。由于每個涉毒事（案）件的性質(zhì)、對象及其發(fā)生、發(fā)展和結(jié)果各不相同，因而法醫(yī)毒物鑒定具有分析目標(biāo)物的不確定性、檢驗材料的復(fù)雜性、鑒定方法的綜合性以及鑒定時限的緊迫性等特點[1]。

法醫(yī)毒物學(xué)的進(jìn)步得益于科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，特別是分析技術(shù)的發(fā)展，從色譜、色譜/質(zhì)譜發(fā)展到色譜/多級質(zhì)譜、高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等，從血液、胃內(nèi)容物等大體積采樣發(fā)展到頭發(fā)、口腔液等無損檢材，從μg級分析發(fā)展到ng、pg級水平，從傳統(tǒng)的攝毒死亡鑒定發(fā)展到濫用物質(zhì)鑒定、行為能力判斷、藥物影響下的犯罪以及分析結(jié)果評判等。

法醫(yī)毒物學(xué)同樣面臨挑戰(zhàn)。自然科學(xué)與證據(jù)科學(xué)交叉的法醫(yī)毒物學(xué)，與臨床毒物學(xué)相比，它的證據(jù)鏈要求更高；與農(nóng)殘、反興奮劑檢測相比，它的目標(biāo)物范圍更具不可知性。2015年12月11日，備受社會關(guān)注的“復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)生投毒案”罪犯林森浩因故意殺人罪被依法執(zhí)行死刑，提供涉毒證據(jù)的法醫(yī)毒物鑒定成為案件的焦點之一。隨著此案的塵埃落定，一方面欣喜看到法醫(yī)毒物鑒定證據(jù)的重要價值，沒有再出現(xiàn)類似“清華鉈中毒”的未解謎團，另一方面也應(yīng)看到，法醫(yī)毒物鑒定在理念、管理和技術(shù)上還有很多亟須改進(jìn)之處。

本文旨在介紹法醫(yī)毒物鑒定的國內(nèi)外最新發(fā)展動態(tài)，綜合分析我國毒物學(xué)實驗室的現(xiàn)狀以及面臨的挑戰(zhàn)，提出持續(xù)改進(jìn)的策略，以期促進(jìn)法醫(yī)毒物鑒定技術(shù)水平的進(jìn)一步提升。

1 發(fā)展動態(tài)

1.1 鑒定類型多樣性

法醫(yī)毒物鑒定已趨向于按照案件性質(zhì)進(jìn)行分類分析，如中毒死亡鑒定、體外毒品鑒定、毒品濫用鑒定、影響行為能力的酒駕毒駕認(rèn)定、藥物影響下犯罪的麻醉搶劫及性犯罪等。部分實驗室還參與承擔(dān)反興奮劑檢測，盡管體育競技領(lǐng)域建有反興奮劑實驗室，但一旦涉及訴訟，仍需要法醫(yī)毒物學(xué)實驗室提供證據(jù)。

不同性質(zhì)案件的鑒定特點和要求不同。（1）體外毒品鑒定需按照聯(lián)合國禁毒署的建議進(jìn)行樣品分類和抽樣，然后根據(jù)委托方的要求進(jìn)行定性、定量分析，其目標(biāo)物范圍包括了國家規(guī)定管制的麻醉藥品和精神藥品。由于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的匱乏，新型精神活性物質(zhì)的鑒別、確認(rèn)成為需要攻克的難點問題。（2）毒品濫用鑒定是依據(jù)適用的生物檢材和判斷閾值來提供被檢者是否非法使用國家規(guī)定管制的麻醉品和精神藥物的證據(jù)。此類鑒定涉及攝毒確認(rèn)、濫用史調(diào)查、興奮劑檢測、酗酒確認(rèn)等，結(jié)果解釋需要考慮內(nèi)源性和外源性判斷、主動攝取和被動污染的判斷以及cutoff值確定等。（3）酒駕毒駕等行為能力判定則要根據(jù)法規(guī)建立酒精以及精神活性物質(zhì)的檢測方法及判斷閾值，以評判事發(fā)時受檢者的行為能力受損害的程度，服務(wù)于交通安全執(zhí)法檢查以及事故處置。國際酒精、藥物與交通安全協(xié)會于2007年發(fā)布了影響駕車能力時血液中部分精神活性物質(zhì)的cutoff值，我國也有望于近期頒布。（4）藥物影響下犯罪是指在中樞神經(jīng)抑制劑、興奮劑和致幻劑等影響下的麻醉搶劫、性犯罪以及詐騙案件等，通過對所涉方的體內(nèi)精神活性物質(zhì)鑒定為案件偵破和處置提供證據(jù)。此類案件具有單次用藥的特征，常因采樣延遲致體液檢材中目標(biāo)物痕量或完全消除，而頭發(fā)分段分析可提供有價值的證據(jù)。（5）中毒死亡鑒定通過對大范圍的毒藥物的篩選分析，發(fā)現(xiàn)、確認(rèn)可能存在的毒藥物并準(zhǔn)確定量，從而評價其中毒程度或?qū)λ劳龅挠绊懗潭取Ｔ擃惏讣顬閺?fù)雜，所涉目標(biāo)物具有范圍廣、未知性、地區(qū)性、流行性等特點，且涉及到結(jié)果解釋和評判等內(nèi)容，是實驗室能力的重要體現(xiàn)。目前我國的法醫(yī)毒物學(xué)鑒定報告雖尚無結(jié)果評判的內(nèi)容，然筆者認(rèn)為，給出結(jié)果解釋代表著法醫(yī)毒物學(xué)的發(fā)展方向。

1.2 生物檢材新型性

檢材的選擇對于分析結(jié)果的解釋與評判至關(guān)重要。中毒死亡鑒定多選擇心血、外周血、尿液、組織、玻璃體液和頭發(fā)等檢材；而對于活體的毒品濫用鑒定或行為能力判定等，則可選擇尿液、血液、頭發(fā)和口腔液等。不同的檢材可提供不同的信息，尿液中毒藥物原體和代謝物濃度較高，原體及代謝物濃度以及濃度比對于濫用時間、濫用程度的判斷具有一定的參考價值。頭發(fā)具有檢出時限長、能反映攝毒史或用藥史的特征，其提供的獨特信息在某些情況下成為提供證據(jù)的唯一手段。同時，高度靈敏的分析技術(shù)為單次用藥的毛發(fā)分析提供了可能性，使毛發(fā)分析在單次用藥的涉毒案件、性犯罪案件、興奮劑檢測等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景?？谇灰褐卸舅幬餄舛扰c血液濃度存在一定的相關(guān)性，作為一種簡便、無損的方式用于酒駕、毒駕的現(xiàn)場監(jiān)測。目前正有研究在考察其應(yīng)用于酒精檢測、替代血液的可行性[2]。

隨著儀器分析靈敏度的提高，檢材取樣量趨于減小，如血液分析的取樣量低至0.1mL至1mL。近年來，指甲、干血點等微樣（microsample）也成為研究的熱點[3]。

（1）指甲。指甲和毛發(fā)相似，均屬富角蛋白檢材，具有易獲取、易保存、待測物穩(wěn)定、檢測時窗長的特點，正逐漸為人們所關(guān)注[4]。本書作者采用冷凍研磨聯(lián)合超聲浴法提取指甲中精神活性物質(zhì)，率先在國際上開展指甲對攝毒史的反映能力、指甲和頭發(fā)的關(guān)系等方面的基礎(chǔ)研究[5]。

選取唑吡坦作為目標(biāo)物，研究其在指甲中的時間過程，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：單次攝藥后第1周即可在指甲中檢出唑吡坦（見圖1），攝藥后約10～15周指甲中濃度達(dá)第二次峰值，至第20周左右指甲中難以再檢測到目標(biāo)物。攝藥后立刻出現(xiàn)在指甲中的唑吡坦，可能系汗液侵蝕游離緣指甲腹層進(jìn)入；攝藥后10～15周出現(xiàn)的第二個唑吡坦峰值濃度被認(rèn)為是與甲基質(zhì)有關(guān)。

圖1 單次攝藥后指甲中唑吡坦?jié)舛入S時間變化的趨勢

研究結(jié)果表明：長期攝藥者不同指的指甲中目標(biāo)物分布不存在顯著性差異；指甲中原藥濃度低于其代謝物濃度，濃度與劑量存在正相關(guān)性；同一精神活性物質(zhì)，由于黑色素等因素影響，頭發(fā)中濃度遠(yuǎn)高于指甲濃度。指甲分析可應(yīng)用于濫用物質(zhì)鑒定，為長期濫用提供證據(jù)。無名尸源等復(fù)雜案件中，指甲分析可縮小偵查范圍，鎖定特殊人群[6]。本實驗室曾利用指甲分析提供無名死者長期服用氯氮平的有價值信息，協(xié)助警方迅速破案。

（2）干血點（Dried blood spot，DBS）。DBS是近年迅速興起的體液替代檢材，具有采樣量小、前處理簡便、易于保存、便于運輸?shù)葍?yōu)點[2]。一般采用Whatman采樣卡，將血液直接滴到采樣卡的圓圈內(nèi)，室溫放置2～3h干燥。目前的LC-MS/MS分析靈敏度足以高，一般DBS采樣量僅需10～100μL，經(jīng)簡單的甲醇超聲等前處理即可，此法克服了傳統(tǒng)方法的諸多缺點。

目前，DBS已應(yīng)用于多種類毒藥物篩選分析，Odoardi et al[7]采用30μL血液的DBS篩選多類精神活性物質(zhì)，方法LODs為0.05～1ng/mL。Ambach et al[8]采用10 μL血液的DBS同時分析46個精神活性物質(zhì)，方法LODs為1～10ng/mL。DBS還可以實現(xiàn)自動提取，Versace et al[9]采用5 μL DBS和在線Hilic/RP LC-MS/MS系統(tǒng)，無需手動前處理，全自動分析22個常見濫用物質(zhì)。與血液樣品保存相比，DBS對苯二氮卓類藥物等更為穩(wěn)定。DBS還可以作為尿液、玻璃體液等其它體液檢材的替代物。

DBS目前不足的是其精密度和準(zhǔn)確度，大多數(shù)研究是基于準(zhǔn)確滴一定量血液在采血卡上制備、線性校正等，但鑒定實踐中往往難以操作，更方便的是將一滴血滴在采血卡上，采樣時的不均勻性致難以實現(xiàn)定量。但對于定性篩選而言，DBS還是很有價值，應(yīng)用前景良好。

1.3 檢測能力大突破

隨著樣品前處理技術(shù)和串聯(lián)質(zhì)譜、高分辨質(zhì)譜等技術(shù)的發(fā)展，毒藥物的檢測能力已獲得很大的提升。作為目前最為有效及相對普及的LC-MS/MS技術(shù)，具有樣品前處理簡單、無需衍生化的優(yōu)點。但是適當(dāng)?shù)臉悠非疤幚砣允潜匾?，可以提高靈敏度、減少基質(zhì)效應(yīng)。基質(zhì)效應(yīng)在多目標(biāo)物同時分析、系統(tǒng)篩選、腐敗血液、毛發(fā)分析等狀況下影響尤為明顯，故在建立方法時首先需要考察基質(zhì)效應(yīng)，盡量將其控制在±25%以內(nèi)[10]。減小基質(zhì)效應(yīng)、提高靈敏度，可以從樣品處理、色譜、質(zhì)譜等環(huán)節(jié)上進(jìn)行改進(jìn)。

1.3.1 樣品處理

綠色化學(xué)的理念已逐漸深入[11]。除了傳統(tǒng)的液液提取，SPE已逐漸在我國實驗室廣泛應(yīng)用[12]，各種新型樣品處理技術(shù)不斷開發(fā)應(yīng)用。

渦流色譜（Turbulent flow chromatography，TFC）利用大粒徑填料使流動相在高流速下產(chǎn)生渦流狀態(tài)，而對生物樣品進(jìn)行凈化與富集。TFC可以在線處理生物樣品，速度快、選擇性好、靈敏度高，易于實現(xiàn)自動化，近年來在生物領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用[13]。利用TFC可進(jìn)行體內(nèi)多種類的毒藥物分析，Schaefer et al[14]采用 Cyclone和C18XL柱提取，Betasil Phenyl/Hexyl為分析柱，通過流動相梯度程序控制，減少了人為誤差和樣品間誤差。

分散液相微萃取技術(shù)（Dispersive liquid-liquid microextraction，DLLME）具有操作簡便快速、高富集因子、萃取劑用量少的特點[15]。DLLME技術(shù)相當(dāng)于微型化的液液萃取，是基于目標(biāo)分析物在樣品溶液和小體積的萃取劑之間平衡分配的過程[16]，其適用于非極性或者親脂性化合物，或者可通過調(diào)節(jié)pH使其處于非離子游離狀態(tài)的酸堿性物質(zhì)，但較難應(yīng)用于極性強或親水性化合物。與其他樣品處理方法相比，DLLME萃取液幾無基質(zhì)效應(yīng)。

微波輔助提取法（Microwave assisted extraction，MAE）利用微波加熱來加速溶劑對樣品中目標(biāo)物的萃取，具有溶劑用量少、提取時間短、提取效率高的優(yōu)點，近年來在提取天然產(chǎn)物和藥物殘留中應(yīng)用較廣。目前MAE已應(yīng)用于毛發(fā)、骨頭等檢材中毒藥物的前處理[17]，該法中提取溶劑、體積、溫度、時間等因素需要針對特定目標(biāo)物進(jìn)行優(yōu)化。

離子液體（Ionic liquids，ILs）是在室溫或近于室溫情況下由陰陽離子為主體組成的熔融鹽體系[18]。ILs陰陽離子的組成對其性質(zhì)有很大影響，通過改變陰陽離子種類，可進(jìn)行生物樣品的萃取。目前，離子液體在樣品處理中的應(yīng)用研究主要集中在液液萃取、液相微萃取、固相微萃取和膜分離等方面。如與固相微萃取結(jié)合，分析尿液中甲基苯丙胺和苯丙胺[19]。與傳統(tǒng)萃取方法相比，ILs簡便快速、靈敏度高。頭發(fā)分析中最大的困擾是外污染問題，利用ILs可清除頭發(fā)表面的外污染物質(zhì)[20]。

1.3.2 色譜分離

有效分離是色譜儀的不懈追求，無論是GC還是HPLC，在色譜柱、分離裝置等方面都有新技術(shù)出現(xiàn)。

超高效液相色譜（UPLC）、高分離度快速液相色譜（RRLC）和超快速液相色譜（UFLC）是分別采用1.7 μm、1.8 μm和2.2 μm顆粒度色譜柱填料而推出的液相色譜技術(shù)，峰容量、分析效率、靈敏度和分辨率較常規(guī)HPLC有了很大的提高。最近又有新的Ultrahigh pressure liquid chromatography（UHPLC）出現(xiàn)，UHPLC色譜柱是采用1.5μm顆粒度的色譜柱填料，并采用增強的核殼技術(shù)，最高流速達(dá)5mL/min，具有超短的色譜擴散路徑和高效的分離能力[21]。

兩維色譜（Two dimensional chromatography，2D）將分離機理不同而又相互獨立的兩根色譜柱以串聯(lián)的方式結(jié)合，可以有效利用分離空間，得到更快的分離速度或更大的峰容量。兩維GC結(jié)合線性程序升溫法，第一維用非極性柱，物質(zhì)按沸點分離；第二維用極性柱，高沸點物質(zhì)相對于低沸點的同類化合物進(jìn)入第二根色譜柱時間較晚從而得到溫度補償[22]?？蓱?yīng)用于揮發(fā)性成分、農(nóng)藥、手性分離、代謝組學(xué)、環(huán)境分析等，與傳統(tǒng)的色譜相比，提高了靈敏度和特異性，可用于系統(tǒng)篩選分析。兩維LC通過第一維色譜柱的分離，進(jìn)入切換閥的接口中，經(jīng)捕集或切割后，被切換進(jìn)入第二維色譜柱及檢測器。如果把第一維換成SPE，實際上是在線SPE[23]。兩維LC峰容量明顯提升、基質(zhì)效應(yīng)和殘留現(xiàn)象顯著降低，并通過自動化樣品處理提高了分析的通量。對于結(jié)構(gòu)相似的同系物，如內(nèi)源性大麻素類，可用二維LC有效分離[24]。

手性固定相（Chiral stationaryphases，CSPs）指能夠直接分離對映異構(gòu)體的具有光學(xué)活性的色譜固定相。許多毒藥物存在手性對映體，其通過與體內(nèi)大分子的不同立體結(jié)合，可產(chǎn)生不同的吸收、分布、代謝和排泄過程，導(dǎo)致藥動學(xué)參數(shù)的不同，從而具有不同的藥理作用。如苯丙胺類興奮劑具有S（+）構(gòu)型和R（-）構(gòu)型，在量刑上有所區(qū)別。采用HPLC法手性固定相分離對映異構(gòu)體是手性毒藥物分離的首選技術(shù)平臺之一[25]，適用范圍廣、分離性能高、無需衍生化。本實驗室采用Supelco Astec Chirobiotic V2液質(zhì)柱（2.1 mm×250 mm，5 μm），有效分離甲基苯丙胺和苯丙胺（見圖2）。2008年至2014年在江浙滬地區(qū)緝獲的冰毒和麻古片劑中，以純S-甲基苯丙胺為主，該類毒品所占數(shù)量及含R構(gòu)型的比例逐年上升。

大體積進(jìn)樣 （Large volume injection，LVI）通過能夠容納大體積樣品的進(jìn)樣裝置以及增加可控時間的溶劑蒸汽放空裝置的進(jìn)樣技術(shù)。LVI可以在不影響色譜分離的同時，大幅度地提高分析方法的靈敏度，簡化樣品濃縮的步驟，減少揮發(fā)性有機物的損失以及實現(xiàn)樣品提取和檢測的在線聯(lián)用。采用LVI-GC/MS/MS可測定頭發(fā)中乙基葡萄糖醛酸苷，最低檢測限低至5pg/mg[26]。

1.3.3 質(zhì)譜技術(shù)

質(zhì)譜是證據(jù)科學(xué)領(lǐng)域最強有力的鑒定工具，隨著液相接口技術(shù)的劃時代進(jìn)步，凸顯其卓越應(yīng)用價值。

系統(tǒng)篩選分析是法醫(yī)毒物學(xué)的重點與難點，增強篩選能力是實驗室不斷的追求。目前的篩選主要分為目標(biāo)物篩選（target screening）、疑似篩選（suspect screening）和完全未知篩選（non-target screening），低分辨和高分辨質(zhì)譜均有應(yīng)用。目標(biāo)物篩選是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立SIM或SRM模式，通過母離子子離子對和保留時間進(jìn)行確認(rèn)。在適宜的樣品處理和色譜條件下，可以一次分析，同時篩選上千個目標(biāo)物。目前，許多實驗室已建立LC-MS/MS的日常篩選分析方法[27]。疑似篩選是指針對一定方向、但無確定目標(biāo)的篩選，如尋找已知目標(biāo)物的代謝物，通過對藥物原型、代謝物精確分子量和多級質(zhì)譜分析，結(jié)合生物轉(zhuǎn)化類型、二級質(zhì)譜關(guān)聯(lián)分析、質(zhì)量數(shù)虧損等，通過ToxID、SmileMS等軟件分析，確認(rèn)代謝物。本實驗室針對新型精神活性物質(zhì)缺乏標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或?qū)φ掌返默F(xiàn)狀，根據(jù)文獻(xiàn)資料輸入可疑目標(biāo)物的母離子子離子信息，也不失為一種篩選策略。完全未知篩選更為復(fù)雜，而高分辨質(zhì)譜凸顯優(yōu)勢。對于可疑新型精神活性物質(zhì)，目前主要聯(lián)合GC-MS、LC/HRMS和NMR等技術(shù)進(jìn)行體外樣品的確認(rèn)[28]。由于高分辨質(zhì)譜確認(rèn)主要依據(jù)準(zhǔn)確分子量，而自然界中某些化合物具有相同的分子式和分子量，如嗎啡和二氫嗎啡酮，代謝物也存在同分異構(gòu)體的可能，故給完全未知篩選增加了不確定性。

圖2 甲基苯丙胺（MA）和苯丙胺（AM）的LC-MS/MS手性分析色譜圖

質(zhì)譜成像（Mass spectrometry imaging，MSI）是將質(zhì)譜的離子掃描技術(shù)與成像處理軟件相結(jié)合的一種新型的成像技術(shù)，可實現(xiàn)對樣本表面多種物質(zhì)的原位定性、定量分析。其利用激光或離子束使組織切片表面的分子離子化，然后通過質(zhì)譜測定這些離子化分子的質(zhì)荷比，再由軟件重構(gòu)出目標(biāo)物在組織中分布[29]。應(yīng)用這一技術(shù)，可以直接從生物組織切片表面獲得多種蛋白質(zhì)或小分子代謝物的空間分布信息。MALDI是MSI研究中應(yīng)用最廣的離子化技術(shù)。質(zhì)譜成像離子化后是通過質(zhì)譜分析實現(xiàn)的，只有超高分辨、高靈敏度、大質(zhì)量范圍、多級串聯(lián)的高端質(zhì)譜儀如Q-TOF、LTQ Orbitrap和FTICR等才能進(jìn)行MSI。法醫(yī)毒物學(xué)領(lǐng)域已開始MSI的探索研究，監(jiān)測體內(nèi)毒藥物及其代謝物的分布，本文作者利用MALDIFTMS從單根濫用者頭發(fā)中繪制出氯胺酮的分布圖（見圖3），為濫用物質(zhì)進(jìn)入毛發(fā)機制研究提供了新手段[30]。

圖3 濫用者頭發(fā)中氯胺酮的MSI圖

通常MSI成像時一個很重要的障礙是內(nèi)源性基質(zhì)干擾，但MALDI上連接串聯(lián)質(zhì)譜，通過兩級離子選擇，去除分子量相近的雜質(zhì)離子，特異性和靈敏度可大大提高。

1.4 結(jié)果評判受重視

結(jié)果評判是法醫(yī)毒物學(xué)的重要組成部分，建立在長期研究、數(shù)據(jù)積累基礎(chǔ)上的綜合分析評判才能達(dá)到科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)、有效的要求。探尋閾值、標(biāo)志物、特征代謝物以及開展代謝動力學(xué)、基因組學(xué)研究等是解決復(fù)雜問題的重要途徑，如通過同時分析毛發(fā)中的單乙酰嗎啡和嗎啡以解決實踐中嗎啡陽性的窘境、區(qū)分吸毒與服用咳嗽藥水等臨床藥物；通過檢測乙醇的體內(nèi)標(biāo)志物EtG以區(qū)分主動飲酒與腐敗產(chǎn)生等，這些策略通過研究已成功應(yīng)用于實踐。隨著學(xué)科的交叉融合以及鑒定實踐的需求，國際上越來越注重毒物鑒定結(jié)果的解釋和評判。

（1）異a-酸類物質(zhì)。異a-酸類物質(zhì)（Iso-a-acids，IAA）是啤酒花中的主要成分，包括葎草酮（又稱酒花酮humulone）、異葎草酮A（isohumulone A）、異葎草酮B（isohumulone B）、異葎草酮（isohumulone）、聚葎草酮（adhumulone）等。啤酒花是釀造啤酒的重要原料，IAA是啤酒花的關(guān)鍵性成分，絕大多數(shù)啤酒中均還有IAA，因此，IAA可以作為飲用啤酒的特征標(biāo)志物[31]，這在酒駕、藥物影響下犯罪、中毒死亡等復(fù)雜案件中均可發(fā)揮證據(jù)作用。

（2）Δ9-四氫大麻酸和四氫大麻酸葡萄糖甙。被動污染是毛發(fā)大麻分析中難點，Δ9-四氫大麻酸（Δ9-tetrahydrocannabinolic acid-A，THCA-A）和四氫大麻酸葡萄糖甙（11-nor-Δ9-tetrahydrocannabinol-9-carboxylic acid glucuronide，THC-COOH-glu）是采用頭發(fā)區(qū)分主動吸食與被動污染的兩個特征物。THCA-A為四氫大麻酚的前體物質(zhì)，存在于大麻植物中，當(dāng)加熱或吸食時，部分轉(zhuǎn)變成THC，如果頭發(fā)中檢出THCA-A，則可能為大麻煙塵污染或接觸過大麻煙的手污染[32]。THC-COOH-glu為THC的體內(nèi)代謝物四氫大麻酸的葡萄糖結(jié)合物，頭發(fā)中檢出THC-COOH-glu可以作為主動吸食大麻者的標(biāo)志物[33]。THCA-A和THC-COOH-glu對分析靈敏度要求高，目前大部分實驗室還無此能力。

（3）閾值。閾值（cutoff）是判斷分析結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。它是一個濃度數(shù)值，等于或高于此值則結(jié)果為陽性，低于此值，即使樣品中可能存在某目標(biāo)物，結(jié)果仍為陰性[34]。不同狀況下，閾值的含義不同，可以是方法的最低檢測限LOD、作用最低值、危險臨界值等，但更多的是行業(yè)依據(jù)國家法規(guī)為規(guī)范判定而設(shè)定的確認(rèn)濃度值，如攝毒鑒定、毒駕、毛發(fā)中毒藥物分析、反興奮劑等。閾值的設(shè)定直接影響假陽性和假陰性率，既要辨識出絕大部分的濫用者，又不能對在濫用環(huán)境中未主動吸食者造成誤判。攝毒鑒定中設(shè)定的閾值相對其它案件類型是最高的，以盡可能避免假陽性。閾值也隨著分析技術(shù)的進(jìn)步而變化，是國際法醫(yī)毒物學(xué)的研究熱點，如乙醇體內(nèi)標(biāo)志物 EtG和EtS[35]、主要在亞洲地區(qū)濫用的氯胺酮[36]、新型精神活性物質(zhì)[37]等。而我國有關(guān)濫用物質(zhì)的閾值設(shè)定相對滯后，目前多沿用國外文獻(xiàn)報道，在使用上還需注意其適用范圍。

（4）新型精神活性物質(zhì)的藥代學(xué)與藥效學(xué)研究。新型精神活性物質(zhì)不斷涌現(xiàn)，一旦涉及即需要開展藥代學(xué)與藥效學(xué)研究，才能進(jìn)行法醫(yī)毒物學(xué)鑒定。最新技術(shù)有利用各種體外代謝模型對目標(biāo)物的代謝特性（如代謝穩(wěn)定性、代謝多態(tài)性、活性/毒性代謝產(chǎn)物生成、參與代謝的藥物代謝酶種類以及代謝相互作用等）進(jìn)行高通量篩選，然后合成活性代謝物，建立原藥及其代謝物分析方法，收集鑒定實踐中的藥代學(xué)與藥效學(xué)數(shù)據(jù)[38]。

（5）藥物基因組學(xué)。藥物基因組學(xué)（Pharmacogenomics）是研究基因本身及其突變體對不同個體藥物作用效應(yīng)差異的影響，就是通過分析遺傳變異和監(jiān)測基因表達(dá)譜，從基因水平研究基因序列的多態(tài)性與藥物效應(yīng)多樣性之間的關(guān)系。藥物基因組學(xué)在法醫(yī)毒物學(xué)中的應(yīng)用被稱為分子解剖學(xué)[39]，適時將藥物基因組學(xué)應(yīng)用于鑒定科學(xué)，將改變毒理學(xué)實施的方式，將為法醫(yī)毒物學(xué)研究提供新的方法、新的資料和新的評判，是目前法醫(yī)毒物學(xué)的發(fā)展方向、研究前沿和國際上新的熱點[40]。藥物基因組學(xué)的應(yīng)用還很少，但已有成功案例報道，主要集中在阿片類藥物、抗抑郁藥和抗癲癇藥等方面[41]。

（6）體內(nèi)再分布研究。體內(nèi)再分布也是死后毒物結(jié)果評判的難題，以前多采用心血與外周血中藥物濃度比率幫助判斷是否存在再分布。最新，McIntyre et al[42]提出，通過肝臟/外周血的濃度比，評價死后再分布。如果濃度比小于5，則沒有或很少死后再分布；如果濃度比在20～30，則有明顯死后再分布。采用此種評價方法，得到之前未引起注意的三環(huán)類抗抑郁藥和SSRI類藥物存在死后再分布。

2 面臨挑戰(zhàn)

2.1 高靈敏度引發(fā)系列問題

隨著分析技術(shù)的飛速發(fā)展，生物檢材中毒藥物分析的靈敏度已達(dá)極高水平，毒物鑒定工作者在欣喜的同時，還應(yīng)關(guān)注和思考：常規(guī)的毒物鑒定需要如此低的檢出限嗎？分析的高靈敏度是否會引發(fā)其他問題？我國 “尿液中毒藥物篩選分析”能力驗證項目每年度均出現(xiàn)一定比例的假陽性結(jié)果的原因？

顯然，高靈敏度可延長目標(biāo)物的檢出時限，特別是對于消除相對遲緩的親脂性物質(zhì)，大大提高案件的陽性檢出率。但在很多情況下，低濃度的陽性結(jié)果對行為能力已無任何影響；血液中檢出痕量的毒藥物，可能對死亡原因也沒有任何貢獻(xiàn)。更重要的是，高靈敏度伴隨著被動接觸、內(nèi)源性干擾、食品或環(huán)境等污染的消除問題，在沒有合理設(shè)置定性認(rèn)定的閾值情況下，存在很大的不能容忍的假陽性風(fēng)險。選擇滿足鑒定要求的適宜方法，設(shè)立質(zhì)量控制措施，建立可切割各種原因所致的極痕量濃度的cutoff值，才能得到科學(xué)、合理的定性結(jié)果。此外，堅持“質(zhì)量、效率、成本”的統(tǒng)一也是成熟實驗室應(yīng)用的理念和目標(biāo)。

2.2 新型精神活性物質(zhì)的挑戰(zhàn)

隨著新的化學(xué)物質(zhì)的不斷研發(fā)及各國對毒品管制種類的不斷補充，新型精神活性物質(zhì)的種類也在不斷演變，已出現(xiàn)苯甲?；胚犷?、苯乙?；胚犷?、萘甲?；胚犷?、環(huán)己烷基苯酚類、萘甲酰吡咯類、金剛烷甲酰吲哚類、卡西酮、苯乙胺類、哌啶類等以及其他非經(jīng)典結(jié)構(gòu)策劃藥，新型精神活性物質(zhì)的擴散對法醫(yī)毒物鑒定構(gòu)成極大的挑戰(zhàn)。目前我國毒物學(xué)實驗室對新型精神活性物質(zhì)的分析能力仍然非常有限，主要原因是對策劃藥的認(rèn)識不足、無標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或?qū)φ瘴镔|(zhì)、無有效的確認(rèn)方法，也沒有相應(yīng)的氘代物用于構(gòu)建最佳的定量方法等。此外，對體內(nèi)分析而言，由于新型精神活性物質(zhì)在生物檢材中以多種形式存在，包括原體、蛋白結(jié)合物、代謝物、綴合物等；生物樣品中成分復(fù)雜，有內(nèi)源性成分、潛在干擾物或共存藥物等，故樣品處理是體內(nèi)新型精神活性物質(zhì)分析最為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。因此，提高對新型精神活性物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)、識別、確認(rèn)能力是當(dāng)前毒物學(xué)實驗室極具專業(yè)和艱巨的任務(wù)。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化存在距離

雖然我國大部分較高層次的毒物學(xué)實驗室已按照ISO/IEC 17025《校準(zhǔn)和檢測實驗室能力認(rèn)可通用要求》建立和運行了質(zhì)量管理體系，但從專業(yè)的角度，與國際法醫(yī)毒物學(xué)協(xié)會（SOFT）等推薦的《法醫(yī)毒物學(xué)實驗室準(zhǔn)則》（Forensic Toxicology Laboratory Guidelines）的要求仍存在一定距離。

一是分析方法的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化問題。分析方法反映了實驗室的技術(shù)能力，從方法的科技水平、方法的適用范圍、方法的技術(shù)指標(biāo)、方法的標(biāo)準(zhǔn)屬性（標(biāo)準(zhǔn)方法還是非標(biāo)方法）四個層面評價，我國毒物學(xué)實驗室仍存在不規(guī)范、不標(biāo)準(zhǔn)問題。此外，相同的技術(shù)方法，由于實驗室內(nèi)部所建的樣品處理方法和分析方法涵蓋的目標(biāo)物數(shù)量不同、代謝物納入情況不同，其鑒定效能也完全不同。盡管形成這種狀況有毒物鑒定對象的不確定性和鑒定性質(zhì)的特殊性的原因，如不像反興奮劑和農(nóng)殘實驗室有明確的檢測范圍和確定的檢測標(biāo)準(zhǔn)，但此特殊性在賦予實驗室擴大篩選能力的同時，卻存在因?qū)嶒炇议g方法靈敏度和范圍差異造成鑒定結(jié)果不一致的風(fēng)險。

二是鑒定過程的質(zhì)量控制問題。根據(jù)《法醫(yī)毒物學(xué)實驗室準(zhǔn)則》的基本原則和基本要求，毒物鑒定過程應(yīng)使用與檢材相同或相似基質(zhì)的控制樣監(jiān)控定性、定量結(jié)果的可靠性，包括陰性控制樣、陽性控制樣和分析控制樣；體內(nèi)毒物定量分析應(yīng)進(jìn)行雙份平行樣分析，相對相差一般≤20%；確證分析應(yīng)使用定性可靠的質(zhì)譜法，并需用保留時間、特征離子以及豐度比等指標(biāo)進(jìn)行判斷；確證分析應(yīng)重新提取檢材或使用該案的不同檢材提取物，以排除污染及操作問題等。但是相當(dāng)部分實驗室在實踐中并沒有實施或有效實施上述質(zhì)控措施，蘊含假陽性、假陰性結(jié)果的風(fēng)險。

2.4 結(jié)果評判依據(jù)、資料缺乏

法醫(yī)毒物學(xué)的結(jié)果評判需要大量實際案例數(shù)據(jù)的積累。目前在鑒定實踐中，定量結(jié)果的準(zhǔn)確度越來越高，但結(jié)果解釋和評判的依據(jù)資料、信息卻十分有限，如毒物中毒致死濃度、全血/血清分布比率，心血與外周血的分布比率，藥物的交叉反應(yīng)資料等?？蓞⒖嫉陌咐龍蟮烙械氖侨械臑檠寤蜓獫{、有的未標(biāo)明采集部位等。而且實驗室接收的檢材多樣化，結(jié)果解釋時對應(yīng)檢材或?qū)?yīng)目標(biāo)物的資料更少。我國大部分實驗室在鑒定實踐中，也存在僅滿足于定性、滿足于完成任務(wù)，而沒有進(jìn)一步獲取陽性案件的定量數(shù)據(jù)，不注意資料積累的狀況，更沒有或參與對分析結(jié)果進(jìn)行解釋和評價。另一方面，實驗室因缺乏毒物中毒致死濃度的數(shù)據(jù)而經(jīng)常借鑒國外的參考資料，但在使用國外資料分析判斷時，必須考慮到不同人群對毒物的敏感性、毒物本身的純度、毒性等可能存在的差異。因此，要提升法醫(yī)毒物鑒定水平，法醫(yī)毒物分析工作者不能僅關(guān)注分析技術(shù)的提高，還要注重資料的積累、數(shù)據(jù)庫的建立以及結(jié)果評價能力的提高。

3 應(yīng)對策略

近年來，我國法醫(yī)毒物學(xué)實驗室建設(shè)、發(fā)展很快，在硬件上可以說與歐美實驗室已無明顯差異。但是在軟件上，尤其在管理理念、專業(yè)素養(yǎng)、質(zhì)量控制等方面仍然有待提升。作者認(rèn)為通過認(rèn)證認(rèn)可、水平測試和質(zhì)量評估等可促進(jìn)實驗室規(guī)范化建設(shè)、鑒定能力建設(shè)、技術(shù)系統(tǒng)建設(shè)和質(zhì)量控制建設(shè)。同時，根據(jù)我國國情也不可能全部生搬硬套國外實驗室模式，而把握好以下的幾個平衡，可以夯實基礎(chǔ)，逐步提升。

3.1 “寬與?！钡钠胶?/p>

如何充分發(fā)揮法醫(yī)毒物鑒定的證據(jù)作用，寬與專，不同群體所要掌握的知識不同。

（1）需求方。作為證據(jù)需求方的法官、警察或法醫(yī)應(yīng)當(dāng)了解法醫(yī)毒物學(xué)的應(yīng)用價值與局限性，針對不同案件選送合理、有價值的檢材，并且能理解法醫(yī)毒物學(xué)報告，這就需要加強供需雙方的溝通。法醫(yī)毒物學(xué)檢材具有“一次采集”的特殊性，由于體內(nèi)代謝消除或尸體火化，將無法再次取得檢材，故需求方提供充分的有價值的檢材非常重要。如經(jīng)常遇及血液中乙醇陽性而家屬堅決否認(rèn)，辯稱系腐敗產(chǎn)生或人為添加，造成不良的社會影響。玻璃體液是死亡案件乙醇檢驗的有效檢材，在歐美已屬常規(guī)檢材，但在我國至今仍無法推廣。檢材證據(jù)鏈也是另一需要協(xié)同解決的問題。如最簡單的酒駕案件，從采血管、采樣時間、標(biāo)簽、封存等整個過程至今仍不夠完整。而其他精神活性物質(zhì)對樣品保存的要求更高，如何完善仍需關(guān)注努力。

有必要開展對證據(jù)需求方進(jìn)行必要的毒物學(xué)相關(guān)知識的培訓(xùn)。法官需要理解證據(jù)的內(nèi)涵以及合理性，警察需要了解鑒定技術(shù)和方法的進(jìn)展，以有助于保護公眾安全，并且保證取證程序合法，在訴訟中可作為沒有瑕疵的證據(jù)使用。

（2）專業(yè)技術(shù)人員。要確保鑒定質(zhì)量，從事毒物鑒定的專業(yè)技術(shù)團隊也需要寬與專的平衡，具有化學(xué)、藥學(xué)的教育背景以及法醫(yī)學(xué)的相關(guān)知識。在涉及重大、復(fù)雜案件的犯罪、死因調(diào)查時，需要有業(yè)務(wù)全面、經(jīng)驗豐富的專家參與，制定流程方案，以確保證據(jù)采集的充分性和可靠性。

專業(yè)技術(shù)人員需要熟知和執(zhí)行實驗室的體系文件、質(zhì)量手冊，而在鑒定實踐中，更要掌握能力范圍內(nèi)各類案件的鑒定特點、方法要點以及應(yīng)用局限性。此外，為了不斷提高鑒定能力和鑒定效率，實驗室應(yīng)有少數(shù)高層次技術(shù)人員負(fù)責(zé)研發(fā)，包括新方法的建立、方法驗證、編制標(biāo)準(zhǔn)等，相對于此，一般的技術(shù)人員只需嚴(yán)格按照已制訂的方法進(jìn)行常規(guī)操作。

3.2 科研與鑒定的平衡

法醫(yī)毒物學(xué)需要不斷的科技創(chuàng)新以保障鑒定的科學(xué)性、可靠性。以前的體制中，公安系統(tǒng)法醫(yī)毒物機構(gòu)以鑒定為主，而高校系統(tǒng)的專業(yè)部門主要從事教學(xué)、科研，兩者相對脫節(jié)。目前，大部分高校設(shè)立鑒定中心，參與鑒定實踐，而公安也與高校聯(lián)合，培養(yǎng)研究生以及從事科研工作，科研與鑒定的聯(lián)系逐漸緊密起來。但是，由于申請基金項目和適應(yīng)評價指標(biāo)的需要，許多研究項目仍是一味追隨新技術(shù)，如目前非常熱門的蛋白組學(xué)和代謝組學(xué)，離實際應(yīng)用相距甚遠(yuǎn)。法醫(yī)毒物學(xué)作為應(yīng)用性學(xué)科，應(yīng)定位于應(yīng)用研究或應(yīng)用基礎(chǔ)研究，應(yīng)在鑒定實踐中發(fā)現(xiàn)問題、提出課題，如實踐中急需的新型精神活性物質(zhì)的藥代學(xué)與藥效學(xué)數(shù)據(jù)、新型檢材的評價數(shù)據(jù)、影響結(jié)果評判的因素等，目前資料均以國外居多，尤需積累和建立中國人群的數(shù)據(jù)。

從國際學(xué)術(shù)會議和國內(nèi)外學(xué)術(shù)刊物上，可以看到國內(nèi)外法醫(yī)學(xué)的研究定位、研究對象和研究方法的顯著差異，應(yīng)引起我們的重視。加強國際間的交流合作、參加國際法醫(yī)毒物學(xué)會的年度TIAFT會議等有助于了解國際最新研究動態(tài)和技術(shù)發(fā)展方向，同時也分享我們的新技術(shù)、新發(fā)現(xiàn)。

3.3 分析質(zhì)量與時間的平衡

作為法庭證據(jù)的毒物鑒定質(zhì)量取決于實驗室質(zhì)量管理和專業(yè)技術(shù)的積累，而在實踐中經(jīng)常面臨的是委托方需要盡快得到報告，但實驗室需要時間滿足質(zhì)控和程序要求的矛盾，故平衡好分析質(zhì)量和時間的關(guān)系顯得十分重要。

首先，需要通過技術(shù)創(chuàng)新改進(jìn)方法盡可能縮短樣品前處理和儀器分析所需時間。如本實驗室的毛發(fā)中單乙酰嗎啡和嗎啡的分析，通過改進(jìn)樣品前處理技術(shù)，將原來的稀酸水解方法改進(jìn)為液氮冷凍研磨方法，鑒定過程可在3小時內(nèi)完成。另一方面，充分利用軟件、自動化系統(tǒng)。從樣品接收即開始電子編碼、掃描系統(tǒng)，樣品前處理的自動、在線系統(tǒng)，色譜的自動進(jìn)樣系統(tǒng)，質(zhì)譜的數(shù)據(jù)處理軟件，這些自動化操作系統(tǒng)既可減少人工誤差，又可實現(xiàn)大通量，大大提高了鑒定效能。

其次，要加強與委托方溝通。如法醫(yī)可能采集了盡可能全面的生物檢材，但一般案件可以首先分析血液檢材，然后經(jīng)與法醫(yī)溝通后按需實施后續(xù)分析。澳大利亞維州法醫(yī)中心推行了簡便、高效的overnight方案[43]，尸體進(jìn)法醫(yī)中心后首先CT掃描、抽取外周血，當(dāng)天晚上即進(jìn)行常見毒藥物分析，并于第二天早上十點前將結(jié)果通知驗尸官，驗尸官匯總結(jié)果后確定是否實施大解剖，以及進(jìn)一步擴大毒物篩選范圍。

最后，注重個案積累，這是進(jìn)行結(jié)果評判的基礎(chǔ)。我國目前的案件結(jié)果多為定性分析，定量結(jié)果很少。以毛發(fā)分析為例，樣品前處理不同，其中的目標(biāo)物釋放效率不同，原型與代謝物的比率也可能不同，實驗室只有積累各自的個案結(jié)果，才能在復(fù)雜案例中依據(jù)數(shù)據(jù)、經(jīng)驗做出判斷。中毒死亡案件的結(jié)果評判更是如此，所以目前許多國家共同建立Toxicolist database數(shù)據(jù)庫，便于案例積累和數(shù)據(jù)分享，其錄入信息包括外周血液濃度、詳細(xì)案情、法醫(yī)病理結(jié)果等，但我國目前還遠(yuǎn)未達(dá)到，譬如血液樣品仍取自心臟。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)與非標(biāo)的平衡

我國目前在實驗室認(rèn)證認(rèn)可、標(biāo)準(zhǔn)化、能力驗證等方面取得了很大進(jìn)展，但仍有很多工作需要推進(jìn)，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)化的思路和模式也值得思考。

首先，法醫(yī)毒物學(xué)術(shù)語必須標(biāo)準(zhǔn)化，實驗室總的準(zhǔn)則、方法驗證、定性定量認(rèn)定規(guī)則等也應(yīng)是標(biāo)準(zhǔn)化的。2009年美國國會為普及法庭科學(xué)證據(jù)收集與分析的最優(yōu)方法與指導(dǎo)方針，撥款成立了 Scientific Working Group for Forensic Toxicology，SWGTOX），推出了一系列標(biāo)準(zhǔn)，以加強法醫(yī)毒物學(xué)的認(rèn)證認(rèn)可和標(biāo)準(zhǔn)化工作。相關(guān)法規(guī)也明確規(guī)定如攝毒、酒駕、毒駕等閾值以規(guī)范結(jié)果的一致性。而具體的毒物分析方法多為實驗室依據(jù)自身技術(shù)條件制定的實驗室方法。

我國目前尚缺乏法醫(yī)毒物實驗室總則以及定性定量認(rèn)定規(guī)則，而是制定、頒布一個個僅針對具體目標(biāo)物的測定方法標(biāo)準(zhǔn)。但事實上這些具體方法標(biāo)準(zhǔn)難以在不同的實驗室應(yīng)用執(zhí)行，在實踐中不具可操作性，因此這些具體方法標(biāo)準(zhǔn)的采標(biāo)率很低。更為嚴(yán)重的，鑒定報告中注明按照某個標(biāo)準(zhǔn)方法鑒定，但實驗室并沒有考察方法的靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度，并沒有證實該方法的指標(biāo)可以在本實驗室實現(xiàn)，這種方式不具科學(xué)性。

對于系統(tǒng)篩選分析，由于案件的復(fù)雜性、目標(biāo)物的多變性與區(qū)域性特點導(dǎo)致難以實現(xiàn)完全的標(biāo)準(zhǔn)化，實驗室需要根據(jù)儀器條件、案發(fā)區(qū)域特點等建立自己的非標(biāo)方法，當(dāng)然此類非標(biāo)方法也應(yīng)以法醫(yī)毒物學(xué)實驗室準(zhǔn)則要求為依據(jù)。在結(jié)果報告中需要標(biāo)明分析范圍和檢出限，以保障不同實驗室結(jié)果的可比性。這種國際上大部分國家采用的標(biāo)準(zhǔn)和非標(biāo)方法相結(jié)合的模式值得我們思考和借鑒。

我國的法醫(yī)毒物學(xué)實驗室無論在硬件、軟件和質(zhì)量管理上都有了很大進(jìn)步，并且有其獨特性。相信只要我們能認(rèn)識到尚存在的差距，并能借鑒國際高水平實驗室的方法和策略，一定能提高法醫(yī)毒物學(xué)鑒定的質(zhì)量與效能，為維護公共安全提供更好的技術(shù)服務(wù)。

[1]沈敏，向平．法醫(yī)毒物學(xué)手冊[M]．北京：科學(xué)出版社．2012：1．

[2]Bueno L H P，da Silva R H A，Azenha A V，et al.Oral fluid as an alternative matrix to determine ethanol for forensic purposes[J]．Forensic sci int，2014，242:117-122．

[3]Henion J，Oliveira R V，Chace D H．Microsample analyses via DBS:challenges and opportunities[J]．Bioanalysis，2013，5（20）:2547-2565．

[4]陳航，向平，沈敏．指（趾）甲在濫用藥物分析中的研究現(xiàn)狀及應(yīng)用展望[J]．法醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（5）:367-373．

[5]Hang C，Ping X，Min S．Long-term follow-up analysis of zolpidem in fingernails after a single oral dose[J]．Anal Bioanal Chem，2013，405（23）:7281-7289．

[6]Chen H，Xiang P，Shen M．Determination of clozapine in hair and nail:the role of keratinous biological materials in the identification of a bloated cadaver case[J]．Journal of forensic and legal medicine，2014，（22）：62-67．

[7]Odoardi S，Anzillotti L，Strano-Rossi S．Simplifying sample pretreatment:Application of dried blood spot（DBS）method to blood samples，including postmortem，for UHPLC-MS/MS analysis of drugs of abuse[J]．Forensic sci int，2014，243:61-67．

[8]Ambach L，Hernández Redondo A，K?nig S，et al.Rapid and simple LC-MS/MS screening of 64 novel psychoactive substances using dried blood spots[J]．Drug Test Analysis，2014，6（4）：367-375．

[9]Versace F，Déglon J，Lauer E，et al.Automated DBS Extraction Prior to Hilic/RP LC-MS/MS Target Screening of Drugs[J]．Chromatographia，2013，76（19-20）:1-13．

[10]Peters F T，Remane D．Remane．Aspects of matrix effects in applications of liquidchromatography-mass spectrometry to forensic and clinicaltoxicology—a review[J]．Anal Bioanal Chem，2012，（403）:2155-2172．

[11]Agata S，Lukasz M，Miguel D L G，et al.Recent developments and future trends in solid phase microextraction techniques towards green analytical chemistry[J]．Journal of Chromatography A，2013，1321（24）:1-13．

[12]張松，曹峻華，劉文文．固相萃取一液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法檢測血液中海洛因及其代謝產(chǎn)物[J]．質(zhì)譜學(xué)報，2015，（36）:367-371．

[13]劉朋，周建良，安婧婧，等．渦流色譜技術(shù)在生物樣品分析中的應(yīng)用[J]．色譜，2010，（28）:168-174．

[14]Schaefer N，Peters B，Schmidt P，et al.Development and validation of two LC-MS/MS methods for the detection and quantification of amphetamines，designer amphetamines，benzoylecgonine，benzodiazepines，opiates，and opioids in urine using turbulent flow chromatography[J]．Anal Bioanal Chem，2013，405（1）:247-258．

[15]張明勇，洪戰(zhàn)英，范國榮．分散液相微萃取技術(shù)及其在生物樣品分析中的應(yīng)用進(jìn)展[J]．中國新藥雜志，2011，20（5）: 429-432．

[16]臧曉歡，張貴江，王春，等．分散液相微萃取技術(shù)研究的最新進(jìn)展[J]．Chinese Journal of Chromatography，2015，（103）:111．

[17]Chang Y J，Chao M R，Chen S C，et al.A high-throughput method based on microwave-assisted extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry for simultaneous analysis of amphetamines，ketamine，opiates，and their metabolites in hair[J]．Anal Bioanal Chem，2014，406（9-10）:2445-2455．

[18]杜甫佑，肖小華，李攻科．離子液體在樣品預(yù)處理中的應(yīng)用[J]．化學(xué)通報，2007，（9）:647-653．

[19]He Y，Pohl J，Engel R，et al.Preparation of ionic liquid based solid-phase microextraction fiber and its application to forensic determination of methamphetamine and amphetamine in human urine．[J]．Journal of Chromatography A，2009，1216（24）:4824-4830．

[20]Restolho J，Barroso M，Dias M，et al.Capture of Opiates by Ionic Liquids[J]．Journal of Solution Chemistry，2014，44（3-4）:1-14．

[21]Vos J D，Pra M D，Desmet G，et al.High-speed isocratic and gradient liquid-chromatography separations at 1500bar[J]．Journal of Chromatography A，2015，（1409）:138-145．

[22]沈保家，秦昆明，劉啟迪，等．二維色譜技術(shù)及其在中藥領(lǐng)域中的應(yīng)用[J]．中國科學(xué)：化學(xué)，2013，（11）:1480-1489．

[23]蕭偉斌，蹇陽，李樺．二維液相色譜在藥物和毒物分析中的應(yīng)用進(jìn)展[J]．分析化學(xué)，2014，（12）：1851-1858．

[24]Flaminia F，Lallo V D D，Ilaria B，et al.Estimation of referenceintervalsoffiveendocannabinoidsand endocannabinoid related compounds in human plasma by two dimensional-LC/MS/MS[J]．Journal of lipid research，2012，53（3）:481-493．

[25]Wang T，Yu Z，Shi Y，et al.Enantiomer Profiling of Methamphetamine in White Crystal and Tablet Forms（Ma Old）Using LC-MS-MS[J]．Journal of Analytical Toxicology，2015，39（7）:551．

[26]Shi Y，Shen B，Xiang P，et al.Determination of ethyl glucuronide in hair samples of Chinese people by protein precipitation （PPT）and large volume injection-gas chromatography-tandem mass spectrometry（LVI-GC/MS/MS）[J]．Journal of Chromatography B，2010，878（30）:3161-3166．

[27]沈敏，向平，沈保華，等．鑒定科學(xué)LC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測篩選分析血液中132種毒藥物[J]．中國司法鑒定，2006，（1）:14-20．

[28]Maurer H H．What is the future of （ultra）high performance liquid chromatography coupled to low and high resolution mass spectrometry for toxicological drug screening?[J]．Journal of chromatography A，2013，（1292）:19-24．[29]Greer T，Sturm R，Li L．Mass spectrometry imaging for drugs and metabolites[J]．Journal of proteomics，2011，74（12）:2617-2631．

[30]Shen M，Xiang P，Shi Y，et al.Mass imaging of ketamine in a single scalp hair by MALDI-FTMS[J]．Anal Bioanal Chem，2014，406（19）:4611-4616．

[31]Maskell P D，Hughes P S，Maskell D L．When Is a Beer Not a Beer:Iso-α-Acids Not Necessarily Proof of Ethanol Consumption?[J]．Journal of analytical toxicology，2015，39（2）:160-160．

[32]Roth N，Moosmann B，Auw?rter V．Development and validation of anLC-MS/MS method for quantification of Δ9-tetrahydrocannabinolic acid A（THCA-A），THC，CBN and CBD in hair[J]．J Mass Spectrom，2013，（48）：227-233．

[33]Pichini S，Marchei E，Martello S，et al.Identification and quantification of 11-nor-Δ9-tetrahydrocannabinol-9-carboxylic acid glucuronide（THC-COOH-glu）in hair by ultra-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry as a potential hair biomarker of cannabis use[J]．Forensic sci int，2015，（249）:47-51．

[34]Kintz P，Mangin P．What constitutes a positive result in hair analysis:proposal for the establishment of cut-off values[J]．Forensic sci int，1995，70（1）:3-11．

[35]Suesse S，Pragst F，Mieczkowski T，et al.Practical experiences in application of hair fatty acid ethyl esters and ethyl glucuronide for detection of chronic alcohol abuse in forensic cases[J]．Forensic sci int，2012，218（1）:82-91．

[36]Tsui T K C，Chan A S L，Lo C W S，et al.Performance of a Point-of-Care Device for Oral Fluid Ketamine Evaluated by a Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry Method[J]．Journal of analytical toxicology，2012，36（3）: 210-216．

[37]Nieddu M，Burrai L，Trignano C，et al.Evaluation of commercial multi-drug oral fluid devices to identify 39 new amphetamine-designer drugs[J]．Legal Medicine，2014，16（2）:106-109．

[38]Wohlfarth A，Scheidweiler K B，Pang S，et al.Metabolic characterization of AH‐7921，a synthetic opioid designer drug:in vitro metabolic stability assessment and metabolite identification，evaluation of in silico prediction，and in vivo confirmation[J]．Drug testing and analysis，2015．DO1:10．1002/ dta．1856．

[39]White，M R，Wong，et al.Toxicogenetics in Drug Abuse: Pharmacogenomics for Toxicology．In:Pathology，Toxicogenetics，and Criminalistics ofDrug Abuse[M]．Steven B．Karch editor．New York，CRC Press，2008：153-164．

[40]Jornil J，Nielsen TS，Rosendal I，et al.A poor metabolizer of both CYP2C19 and CYP2D6 identified by mechanistic pharmacokinetic simulation in a fatal drug poisoning case involving venlafaxine[J]．Forensic Sci Int，2013，226（1-3）: e26-e31．

[41]Mozayani A，Raymon L．Handbook of Drug Interactions[J]．California Medicine，1972，116（7）:501-502．

[42]McIntyre I M．Liver and peripheral blood concentration ratio（L/P）as a marker of postmortem drug redistribution:a literature review[J]．Forensic science，medicine，and pathology，2014，10（1）:91-96．

[43]Gerostamoulos D，Beyer J，Woods J L，et al.Overnight Toxicology-Fast Targeted Screening of Drugs and Poisons in Post‐Mortem Blood[J]．Pathology-Journal of the RCPA，2010，（42）:S28．

（本文編輯：卓先義）

Progress and Challenges in Forensic Toxicology

XIANG Ping,SHEN Min
(Shanghai Key Laboratory of Forensic Medicine,Institute of Forensic Science,Ministry of Justice,Shanghai 200063,China)

Forensic toxicology is improved significantly with the development of technologies and the emerging needs of forensic services．This paper reviews new progress in forensic toxicology．Forensic services tend to be classified according to the nature of the case，such as the analysis of drugs of abuse in seized materials，drug testing，human performance toxicology which could include impaired driving，sexual assault and other drug-facilitated crimes，and postmortem toxicology．There is increasing interest in alternative matrices，such as oral fluid，nail，dried blood spot，etc．，and new psychoactive substances．Analytical capability of drug detection has been highly enhanced with the improvements in sample preparation and mass spectrometry．More and more researches have focused on the interpretation of toxicology results，which is a complex but necessary work．Finally，the current status about laboratories and ongoing challenges are discussed，and development strategies are proposed．

forensic science;forensic toxicology;progress;challenge

DF795．1

A

10．3969/j．issn．1671-2072．2016．01．008

1671-2072-（2016）01-0051-11

2015-12-08

國家科研院所公益項目（GY2013 G-9）；上海市法醫(yī)學(xué)重點實驗室資助項目（12DZ2271500）

向平（1968—），女，研究員，主要從事法醫(yī)毒物學(xué)研究。E-mail：xiangp@ssfjd．cn。

沈敏（1955—），女，研究員，博士研究生導(dǎo)師，主要從事法醫(yī)毒物鑒定研究和司法鑒定管理工作。E-mail:shenm@ssfjd．cn。