高效液相色譜法同時測定止咳片中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量

趙萬晴，戚繼紅

（安徽省淮北市食品藥品檢驗中心，安徽 淮北 235000）

高效液相色譜法同時測定止咳片中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量

趙萬晴，戚繼紅

（安徽省淮北市食品藥品檢驗中心，安徽 淮北 235000）

目的 建立同時測定止咳片中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 采用Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m)，流動相為甲醇－水（77∶23），檢測波長為321 nm，流速為1.0 mL／min，進(jìn)樣量為10 L。結(jié)果 白花前胡甲素質(zhì)量濃度在21.98～219.8 mg／L范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好(r＝0.999 5)；白花前胡乙素質(zhì)量濃度在5.895～58.95 mg／L范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好(r＝0.999 9)。白花前胡甲素的平均加樣回收率為100.75%，RSD為1.44%（n＝9）；白花前胡乙素的平均加樣回收率為99.11%，RSD為1.68%(n＝9)。結(jié)論 該方法操作簡便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、靈敏度高，適用于止咳片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；止咳片；白花前胡甲素；白花前胡乙素

止咳片是由百部、前胡、苦杏仁組方的復(fù)方制劑，具有潤肺定喘、祛痰止咳的功效[1]。前胡為主要成分之一，最早產(chǎn)地及歷史上前胡道地產(chǎn)區(qū)在長江以南的江浙與皖南一帶，歷代均以白花前胡作為前胡的正品[2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，白花前胡具有祛痰、改善心肌功能、抗菌、抗氧化及抗癌的作用[3－5]，還具有雙重抑制乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶的作用[5－6]，其主要成分為白花前胡甲素、白花前胡乙素[6]。筆者采用高效液相色譜（HPLC）法同時測定止咳片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Thermo U－3000型 HPLC色 譜 儀 （W Thermo DAD－3000檢測器）；JAC－300N型超聲波處理器（濟(jì)寧奧波超聲電氣有限公司）；Mettler AE－240型電子分析天平（精度為0.1 mg／0.01 mg）。

1.2 試藥

白花前胡甲素對照品（批號為111711－200602）、白花前胡乙素對照品（批號為111904－201203）均購于中國食品藥品檢定研究院，含量以98.0%計；止咳片（批 號 分 別 為 20140103，20140114，20140208，20140509，吉林省康福藥業(yè)有限公司）；甲醇為色譜純；水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗[7－8]

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Agilent Zorbax SB－C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇－水（77∶23）；檢測波長：321 nm；流速：1.0 mL／min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：25℃。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液

稱取白花前胡甲素對照品21.98 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為白花前胡甲素對照品貯備液。

稱取白花前胡乙素對照品12.03 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為白花前胡乙素對照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液[9－10]

取樣品除去糖衣，研細(xì)，精密稱取2.80 g（約10片重），置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入氯仿25 mL，精密稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷至室溫，再稱定質(zhì)量，用氯仿補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，蒸干，殘渣用甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至10 mL，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗：按照止咳片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制備工藝制備不含對照藥材的陰性對照樣品，研細(xì)，稱取粉末1.684 5 g，按供試品制備方法制備陰性對照品溶液。在擬訂色譜條件下，陰性對照品溶與對照品溶液相同保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密量取白花前胡甲素對照品、白花前胡乙素對照品貯備液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置同一10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按擬訂色譜條件，精密量取10 μL注入液相色譜儀，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得白花前胡甲素回歸方程為 Y＝0.395 9 X－1.253 8（r＝0.999 5），質(zhì)量濃度在21.98～219.8 mg／L范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好；白花前胡乙素為Y＝0.338 6 X－0.070 8（r＝0.999 9），質(zhì)量濃度在5.895～58.95 mg／L范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗：分別精密量取白花前胡甲素對照品、白花前胡乙素對照品貯備液2.0 mL，置同一10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。取上述對照品混合溶液，按擬訂色譜條件，精密量取10 μL注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素的 RSD分別為0.16%和0.26%（n＝6）。

重復(fù)性試驗：取同一批（批號為20140103）樣品，按供試品溶液制備方法制備6份，照擬訂色譜條件測定。結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素的 RSD分別為1.71%和1.83%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一批（批號為20140103）供試品溶液，于0，4，8，12，16，20，24 h時分別進(jìn)樣測試，記錄色譜峰面積。結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素的RSD分別為0.23%和0.18%(n＝7)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗：精密稱取已知含量樣品（批號為20140103），共9份，分成3組，置具塞錐形瓶中，每組分別精密加入含白花前胡甲素87.92 mg／L、含白花前胡乙素23.58 mg／L的對照品貯備液4.0，5.0，6.0 mL，照供試品溶液制備方法制備溶液，精密量取10 μL注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

取3批（批號分別為20140114，20140208，20140509）樣品，各2份，精密稱取適量，置具塞錐形瓶中，依法制備供試品溶液。精密量取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算含量。結(jié)果見表2。

表1 白花前胡甲素和白花前胡乙素加樣回收試驗結(jié)果（n＝9）

表2 樣品中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 波長選擇

考察質(zhì)量濃度為0.10 g／L白花前胡甲素和白花前胡乙素對照品77%的甲醇水溶液，分別進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果均于320 nm波長處有最大吸收，參照2010年版《中國藥典（一部）》前胡藥材檢驗項下的波長為321 nm，故波長選擇為321 nm。

3.2 提取超聲時間選擇

考察白花前胡甲素、白花前胡乙素提取時間，分別處理20，30，40 min[10]后進(jìn)行考察，結(jié)果超聲30 min能達(dá)到滿意的效果。

3.3 流動相選擇

前胡甲素含量測定使用流動相大多為甲醇－水或乙腈－水[11－13]，考慮到甲醇毒性比乙腈小，選擇甲醇－水作流動相。為了白花前胡甲素、白花前胡乙素及雜質(zhì)組分能完全分離，調(diào)節(jié)甲醇－水的比例，發(fā)現(xiàn)采用甲醇－水（77∶23）為流動相時效果較好。

[1]WS3－B－0700－91，中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第四冊)[S].

[2]單 鋒，郝近大，黃璐琦.2010年版《中國藥典》中“紫花前胡”功效描述的商榷[J].中國中藥雜志，2015，40（12）：2 464－2 469.

[3]吳 霞，畢 贏，王一濤.前胡化學(xué)成分及藥理作用的研究進(jìn)展[J].食品與藥品，2010，12（11）：442－444.

[4]孟德玉，毛子成，何興金，等.藥用前胡研究進(jìn)展[J].中國野生植物資源，2005，24（3）：10－13.

[5]宋亞旻，宋 波，李宗陽，等.前胡揮發(fā)油膽堿酯酶抑制作用及化學(xué)成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012，24（11）：1 508－1 512.

[6]張 村，肖永慶，谷口雅彥，等.白花前胡化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志，2005，30（9）：675－676.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：248.

[8]陳 建.HPLC法測定含化上清片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2015，30（3）：251－252.

[9]劉 慧 .止咳片的質(zhì)量控制[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2015，34（6）：811－813.

[10]李紅燕，張 蕊，馮曉川.HPLC測定除痰止咳丸中的桔梗皂苷D、桔梗皂苷E白花前胡甲素和白花前胡乙素[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2014，20（2）：78－82.

[11]劉海斌，蘇榮芳，李雯姍，等.HPLC法測定清熱鎮(zhèn)咳糖漿中白花前胡甲素的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報，2014，30（1）：57－59.

[12]代麗萍，李漢偉，董誠明.HPLC法測定不同產(chǎn)地白花前胡中白花前胡甲素的含量 [J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2010，8（11）：258－259.

[13]楊紅兵，陳科力，余婕婧，等.前胡藥材的質(zhì)量狀況考察[J].中國藥房，2012，23（39）：3 701－3 702.

Simultaneous Content Determination of Praeruptorin A and Praeruptorin B in Zhike Tablets by HPLC

Zhao Wanqing,Qi Jihong
(Huaibei Food and Drug Inspection Center,Huaibei,Anhui,China 235000)

Objective To establish an HPLC method for the simultaneous content determination of praeruptorin A and praeruptorin B in Zhike Tablets.Methods Agilent ZORBAX SB C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm)was used.The mobile phase was methanol－water (77∶23).The detection wavelength was 321 nm,the flow rate was 1.0 mL／min and the injection volume was 10 μL.Results The linear range of praeruptorin A was 21.98－219.8 mg／L(r＝0.999 5),and the linear range of praeruptorin B was 5.895－58.95 mg／L (r＝0.999 9).The average recovery rate of praeruptorin A were 100.75%(n＝9),RSD＝1.44%;the average recovery rate of praeruptorin B was 99.11%(n＝9),RSD＝1.68%.Conclusion The method is simple,accurate,stable and high sensitive,which is suitable for the quality control of praeruptorin A and praeruptorin B in Zhike Tablets.

HPLC;Zhike Tablets;praeruptorin A;praeruptorin B

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2016)21－0060－04

2016－07－28)